雜交瘤細胞的篩選
雜交瘤細胞的篩選 在細胞融合后，要從上述五種細胞中篩選出雜交瘤細胞，一般使用HAT培養進行篩選，HAT培養基中含有次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶（T）三種成分。細胞的DNA合成有內源性途徑（主要途徑）和外源性途徑（旁路途徑）兩種方式。內源性途徑就是利用谷氨酰胺或單磷酸尿苷酸在二氫葉酸還原酶的催化下來合成DNA；而外源性途徑則是利用次黃嘌呤或胸腺嘧啶在次嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶（Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase, HGPRT）或胸腺嘧啶激酶（thymidine kinase,TK）的催化下來補救合成DNA，HAT培養基中氯基喋呤是二氫葉酸還原酶的抑制劑, 能有效地阻斷DNA合成的內源性途徑。 雜交瘤細胞的篩選 B淋巴細胞具有HGPRTTK這兩種酶, 因此在內源性途徑被阻斷后仍能利用HAT培養基中的次黃嘌呤和胸腺嘧啶來合......閱讀全文
分子雜交技術Southern雜交的操作步驟
(1) 約50μl體積中酶切10pg-10μg的DNA, 然后在瓊脂糖凝膠中電泳12-24小時(包括DNA分子量標準物)。 (2) 500ml水中加入25μl 10mg/ml溴化乙錠,將凝膠放置其中染色30分鐘, 然后照相。 (3) 依次用下列溶液處理凝膠,并輕微搖動: 500ml 0.2m
原位雜交與熒光原位雜交
一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH) 是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛應
分子雜交技術的幾種常見的雜交
分子雜交是通過各種方法將核酸分子固定在固相支持物上，然后用放射性標記的探針與被固定的分子雜交，經顯影后顯示出目的DNA或RNA分子所處的位置。根據被測定的對象，分子雜交基本可分為以下幾大類：(1) Southern雜交:DNA片段經電泳分離后,從凝膠中轉移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上,然后與探針雜交。
原位雜交與熒光原位雜交
?一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH)?是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛
概述分子雜交技術常見的雜交分類
分子雜交是通過各種方法將核酸分子固定在固相支持物上，然后用放射性標記的探針與被固定的分子雜交，經顯影后顯示出目的DNA或RNA分子所處的位置。根據被測定的對象，分子雜交基本可分為以下幾大類： (1) Southern雜交:DNA片段經電泳分離后,從凝膠中轉移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上,然后與探
雜交育種的雜交過程介紹
選擇父母本父母本的選擇取決于育種的目標和目的。親本植物必須從當地挑選，并被認為是最適合當地條件的。去雄這是植物雜交的第二個步驟。自交系材料在正常條件下生長的，需要去雄。去雄就是將雌親本的雄蕊在其開裂并散落花粉之前去除。單性生殖的植物不需要去雄，但雙性生殖或自花授粉植物需要去雄 。套袋套袋是植物雜交的
分子雜交技術斑點雜交的操作步驟
(1) 10μl樣品與20μl 100%甲酰胺、 7μl 37%甲醛、2μl 20×SSC混合。混合置于68℃，15分鐘后置冰浴中。 (2) 用0.1mol/L NaOH清洗點樣器,再用無菌水充分沖洗。將一張經20×SSC浸潤的濾紙鋪在點樣器上,上面再鋪上一張經20×SSC浸潤1小時的硝酸纖維
熒光原位雜交的熒光原位雜交
熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。探針首先與某種介導分子（reporter molecule）結
分子雜交技術斑點雜交的實驗簡介
斑點雜交是指將DNA或RNA樣品直接點在硝酸纖維素濾膜上,然后與核酸探針分子雜交，以顯示樣品中是否存在特異的DNA或RNA。同一種樣品經不同倍數的稀釋,還可以得到半定量的結果。所以它是一種簡便、快速、經濟的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因診斷中經常用到,是研究基因表達的有力工具。但由于
分子雜交技術菌落原位雜交的介紹
(1) 盛有2×SSC的塑料盤同，將干烤的濾膜飄浮在液面上,徹底浸濕5分鐘。 (2) 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。 (3
原位雜交儀原位雜交的意義
原位雜交：在研究DNA分子復制原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，能過氫鍵結合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點，應用帶有標記的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質）DNA或R
分子雜交技術Northern雜交的注意事項
(1)如果瓊脂糖濃度高于1%，或凝膠厚度大于0.5cm，或待分析的RNA大于2.5kb,需用0.05mol/LNaOH浸泡凝膠20分鐘,部分水解RNA并提高轉移效率。浸泡后用經DEPC處理的水淋洗凝膠,并用20×SSC浸泡凝膠45分鐘。然后再轉移到濾膜上。 (2)在步驟(3)的操作中，如果濾膜
原位雜交儀—原位雜交實驗（二）
原位雜交第二天 1. 1）將探針回收，放于－20C保存（通常探針可重復使用十次左右）。 2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。 3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。 4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。
原位雜交儀—原位雜交試驗（一）
收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養，到達所需要的發育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時后用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗，然后換成甲醇，在-20C 保存，待用（兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧水處理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養，可阻斷色素的形成）
原位雜交儀—原位雜交實驗（三）
原位雜交第三天 1） 用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，最后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。 2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置
斑點雜交的DNA斑點雜交方法
①先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用鉛筆在濾膜上標好位置,將DNA點樣于膜上,每個樣品一般點5μl(2~10μg DNA)。④將膜烘干，密封保存備用。
什么核酸雜交？
具有互補序列的不同來源的單鏈核酸分子，按堿基配對原則結合在一起稱為核酸雜交（hybridization）。雜交可發生在DNA-DNA、RNA-RNA和DNA-RNA之間。雜交是分子生物學研究中常用的技術之一，利用它可以分析基因組織的結構，定位和基因表達等，常用的雜交方法有Southern印跡法，No
Northern雜交技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。?含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller，
RNA點雜交
RNA點雜交1）??純化的RNA的點雜交和狹線雜交安裝印跡裝置1．切一張合適大小的帶正電荷尼龍膜。用鉛筆標上表示方向的記號。用水把膜簡單弄濕，在20×SSC中室溫泡1 h。2．在膜浸泡期間，先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印跡裝置，再用無菌水洗干凈。3．把兩片厚濾紙用20×SSC浸濕，再放到
消減雜交實驗
消減雜交實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 稀釋緩沖液 雜交緩沖儲存液 基三乙基溴化銨 礦
消減雜交實驗
試劑、試劑盒 稀釋緩沖液雜交緩沖儲存液基三乙基溴化銨礦物油核酸和寡核苷酸儀器、耗材 熱循環儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑稀釋緩沖液（20 mmol/L HEPES>HCl、pH8.3，50 mmol/LNaCl,0.2 mmol/L EDTA)4X 雜交緩沖儲存液：4mol/L NaC
RNA點線雜交
RNA點線雜交（Dot and Slot blotting）·?????????RNA dot blot and slot blot (Beverly Faulkner-Jones)This methods allows the rapid analysis of numerous small sa
分子雜交技術
分子雜交技術? 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總R
RNA點雜交
1） 純化的RNA的點雜交和狹線雜交安裝印跡裝置1．切一張合適大小的帶正電荷尼龍膜。用鉛筆標上表示方向的記號。用水把膜簡單弄濕，在20×SSC中室溫泡1 h。2．在膜浸泡期間，先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印跡裝置，再用無菌水洗干凈。3．把兩片厚濾紙用20×SSC浸濕，再放到真空器頂部。4
雜交設備Biometra
·經濟：OV5的特別設計可使緩沖液連續流布在雜交膜上，從而減少緩沖液量 ·操作簡單：雜交瓶同一直徑，方便雜交膜的放取，無滲漏也不易產生氣泡，尼龍篩布保證雜交瓶同時容納多個雜交膜 ·安全：帶金屬框的真空雙層玻門提供對標品的安全監視，保證操作者免受β射線的傷害 ·搖蕩平臺：OV5帶有搖蕩平臺，可以
消減雜交實驗
試劑、試劑盒稀釋緩沖液雜交緩沖儲存液基三乙基溴化銨礦物油核酸和寡核苷酸儀器、耗材熱循環儀實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑稀釋緩沖液（20 mmol/L HEPES>HCl、pH8.3，50 mmol/LNaCl,0.2 mmol/L EDTA)4X 雜交緩沖儲存液：4mol/L NaCl,2
Southern－雜交鑒定
1）??取10ul待測DNA，于一定濃度的瓊脂糖凝膠上進行電泳。(20mL,1.0%凝膠,)2) 凝膠用溴化乙錠染色，切掉凝膠四周多余部分，并在凝膠的一角作一記號, 拍照記錄電泳結果(拍照時, 凝膠旁放一尺子)。3) 雜交用膠的制備 (做以下步驟兩組合一)A．??將凝膠浸沒入30mL 0.25mol
芯片雜交儀
多功能芯片雜交裝置，三維持續搖動，保證了整個點陣雜交信號的均勻性，增強反應信號強度，提高信噪比，可以一次進行1～12芯片的空氣浴雜交，也可在更換托盤后完成不同體積試管在設定溫度下的混勻反應。
分子雜交儀
分子雜交儀（又名：分子雜交箱、分子雜交爐）廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學領域中具有廣泛地應用，而且在臨床診斷上的應用也日趨增多。
雜交泵介紹
? ? ? ?化學雜交泵在進氣口側是二級的油封旋葉泵，二級油泵的第二級和油箱的出口是由二級無油防腐蝕化學隔膜泵來抽。這樣油泵的敏感部分，防止了氣體的冷凝和腐蝕，保證油霧的揮發同時腐蝕性氣體的分壓也減少，同時，也保證了油泵的高真空。特點1、作高真空的油泵運轉，zui終真空度達到10-4mbar；2、排