酵母剪接體分析實驗
前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和幾種蛋白質構成。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和幾種蛋白質構成。試劑、試劑盒Tris HCI 溶液EDTATE乙酸鈉SDSRNA 的勻漿緩沖液RNA 的溶解緩沖液Tris 堿Tris EDTA 平衡苯酚乙醇硅烷化溶液TPM8 緩沖液mRNAHEPES-KOHR 緩沖液上樣緩沖液去離子甲酰胺Northern 印跡雜交液儀器、耗材液氮離心機勻漿器旋轉真空濃縮儀試管離心管玻璃板聚四氟乙烯墊片梳子黃色膠帶電泳槽電源平頭毛細管吸頭濾紙實驗步驟一、材料與設備1. 從鼠組織中制備競爭性......閱讀全文
酵母剪接體分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和幾種蛋白質構成。
酵母剪接體分析實驗
前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和幾種蛋白質構成。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋
酵母剪接體分析實驗（一）
實驗方法原理 前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和幾種蛋白質構成。試劑、試劑盒 Tris HCI 溶液EDTATE乙酸鈉SDSRNA 的勻漿緩沖液RNA 的溶解緩沖液T
酵母剪接體分析實驗（二）
4. 設備(1) 液氮 （N2）。(2) 離心機，勻漿器，旋轉真空濃縮儀。(3) 各種試管、離心管。(4) 玻璃板：一塊為 26.5 cm 高、20.2 cm 寬、0.4 cm 厚。帶凹口的玻璃板尺寸同前一塊，但帶一 2.2 cm 深、16.3 cm 寬的凹口。(5) 聚四氟乙烯墊片和梳子：墊片和梳
前剪接體和剪接體的分離及分析實驗
剪接體是由 RNA 和蛋白質構成的核糖核蛋白體（RNP)，它在前體 mRNA 的剪接過程中可去除前體 mRNA 的內含子。snRNP 是由 snRNA 及其結合蛋白組成，在前體 mRNA 的剪接過程起著重要作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理剪接體是由 RNA 和蛋白質
前剪接體和剪接體的分離及分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 剪接體是由 RNA 和蛋白質構成的核糖核蛋白體（RNP)，它在前體 mRNA 的剪接過程中可去除前體 mRNA 的內含子。snRNP 是由 snRNA 及其結合蛋白組成，在前體 mRNA 的剪接過程起著重要作用。
前剪接體和剪接體的分離及分析實驗
實驗方法原理 剪接體是由 RNA 和蛋白質構成的核糖核蛋白體（RNP)，它在前體 mRNA 的剪接過程中可去除前體 mRNA 的內含子。snRNP 是由 snRNA 及其結合蛋白組成，在前體 mRNA 的剪接過程起著重要作用。實驗材料 PIP 10 載體核苷酸焦磷酸酶RNasinT7 RNA 聚合酶
催化活化酵母剪接體的結構揭示了分枝機理
在1977年，Phillip Sharp和Richard Roberts倆個研究組獨立發現了剪切這一過程，緊接著，1979年， Steitz研究組發現五種稱為U1，U2，U4，U5和U6 snRNA的富含尿苷的小核RNA（snRNA）和7種12-35kDa的蛋白質（snRNPs）。之后，
施一公：克服提純問題，發布最新酵母剪接體結構
2018年5月25日，清華大學生命學院施一公教授研究組就剪接體的組裝機理與結構研究于《科學》（Science）雜志以長文形式再次發表重大研究成果。這篇題為《完全組裝的釀酒酵母剪接體激活前結構》（Structures of the Fully Assembled Saccharomyces cer
酵母菌隨即孢子分析實驗
將減數分裂產物從子囊中釋放出來，通過超聲破裂，直接鋪在瓊脂平板上，孢子菌落可以通過影印平板法來篩選目的基因型。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒2-疏基乙醇乙醇酵母裂解液儀器、耗材超聲發生器探頭離心機實驗步驟1. ?制備可供剖分四分體用的細胞。如果孢子在平板上形成，可用牙簽挑起孢子放入裝有5 ml 水的50
酵母菌隨即孢子分析實驗
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 2-疏基乙醇乙醇酵母裂解液儀器、耗材 超聲發生器探頭離心機實驗步驟 1. ?制備可供剖分四分體用的細胞。如果孢子在平板上形成，可用牙簽挑起孢子放入裝有5 ml 水的50 ml 燒瓶中；如果孢子在液體培養基中形成，可將1 ml 培養液加入5 ml 水中。然后加入0
施一公團隊《細胞》解析酵母ILS狀態剪接體
北京時間9月15日凌晨，Cell在線發表了施一公教授課題組題為“Structure of an Intron Lariat Spliceosome from Saccharomyces cerevisiae”的論文，解析了釀酒酵母平均分辨率為3.5A的內含子套索剪接體ILS complex（In
Cell丨施一公組完成酵母剪接體結構最后拼圖
真核生物pre-mRNA剪接由超分子復合物剪接體（spliceosome）完成。完整的剪接過程主要分為八種不同的狀態，預催化剪接體的前體（pre-B），預催化剪接體（B），活化復合物（Bact），催化活化復合物（B*），催化步驟I復合物 （C），催化步驟II活化復合物（C*），催化后剪接體（P）
施一公再發Science－克服提純問題－發布最新酵母剪接體結構
2018年5月25日，清華大學生命學院施一公教授研究組就剪接體的組裝機理與結構研究于《科學》（Science）雜志以長文形式再次發表重大研究成果。這篇題為《完全組裝的釀酒酵母剪接體激活前結構》（Structures of the Fully Assembled Saccharomyces cer
酵母轉化實驗
實驗材料酵母菌株質粒儀器、耗材YPD 平板SC-ura平板產孢子平板實驗步驟展開
酵母轉化實驗
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰儀器、耗材?搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟 1.? 在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。?2.? 轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD
剪接體
剪接體（英文：spliceosome）定義：由核小RNA(snRNA，U1、U2、U4、U5、U6等)和蛋白質因子(約100多種)動態組成、識別RNA前體的剪接位點并催化剪接反應的核糖核蛋白復合體。只與SMT蛋白理解與糖性一致。
清華大學生科院Cell：釀酒酵母“催化后剪接體”的結構
這篇題為Structure of the Post-catalytic Spliceosome from Saccharomyces cerevisiae的論文首次展示了pre-mRNA中3’剪接位點的識別狀態，該結構為回答RNA剪接反應過程中pre-mRNA中的3’剪接位點如何被識別，第二步轉
施一公等在《科學》發文報道酵母剪接體三維結構
2016年12月16日，清華大學生命學院、結構生物學高精尖創新中心施一公教授研究組于（Science）雜志就剪接體的結構與機理研究再發長文（Research Article），題為《酵母剪接體處于第二步催化激活狀態下的結構》（Structure of a Yeast Step II Catal
歷時十一年！施一公組完成酵母剪接體結構最后拼圖
3月15日，清華大學生命學院施一公教授研究組就剪接體的機理與結構研究，于《細胞》（Cell）期刊發表題為《催化激活狀態的酵母剪接體結構揭示RNA剪接分支反應的機理》（Structures of the Catalytically Activated Yeast Spliceosome Revea
酵母功能互補實驗
實驗概要本實驗將在構建了大蒜重金屬抗性基因表達載體并轉入大腸桿菌DH5α的基礎上，選擇鑒定準確的質粒轉化酵母細胞，對轉化子進行了PCR鑒定和RT-PCR分析，及重金屬抗性實驗。主要試劑YPD培養基，醋酸鋰，PEG(50%)，乙醇，少量酵母菌總RNA快速抽提試劑盒主要設備搖床，離心機，水浴鍋，PCR儀
酵母雙雜交實驗
實驗概要本實驗構建了Bait載體和prey載體，酵母雙雜交后，應用CPRG法定量測試了蛋白質相互作用。實驗步驟1. Bait載體的構建將高保真PCR擴增的OsCCTlb(引物為OsCCT1bEcoRI5'和OsCCTlbXhoI3')和OsCNTlb(引物為OsCNTlb ? Eco
釀酒酵母培養條件實驗_酵母培養物的儲存
實驗方法原理酵母在瓊脂或液體培養基中的理想培養溫度是30℃，培養皿平板應倒置放入塑料盒中，于孵箱或培養室內進行培養。當孵育時間超過2或3天時，塑料盒可防止平板上的瓊脂干裂。當使用液體培養基培養時，要使用旋轉式或往復式搖床，至少每分鐘200轉，以保證充分通氣；進行大體積液體培養時使用錐形瓶，培養基為瓶
釀酒酵母培養條件實驗
液體培養基中細胞滴度的檢測 菌落的影印培養 酵母培養物的儲存 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酵母在瓊脂或液體培養基中的理想培養溫度是30℃，培養皿平板應倒
酵母細胞破碎實驗
實驗材料?酵母菌試劑、試劑盒?玻璃珠破菌緩沖液儀器、耗材?玻璃珠拍打器實驗步驟 1.? 培養并收集酵母菌細胞，在酵母消解酶緩沖液重懸菌體沉淀之前，測定壓緊細胞的體積，以下所有步驟均在4℃進行。2.? 用1體積的玻璃珠破菌緩沖液重懸細胞。3.? 用2體積的玻璃珠破菌緩沖液與細胞混合，加4體積冰冷的酸洗
釀酒酵母培養條件實驗
實驗材料 YPAD 過夜培養物儀器、耗材 SC 減樣選擇培養基分光光度計實驗步驟 一、分光光度測定法1. YPAD 過夜培養物用水 100 倍稀釋，而 SC 減樣選擇培養基過夜培養物 10 倍稀釋。2. 用分光光度計測定 600 nm 處的光密度。3. 記住稀釋倍數，計算原始培養物的細胞數。二、血細
酵母菌培養實驗
今年就開始做這個天然酵種面包，一開始看了好多關于日本和臺灣的書籍，關于天然酵種的做法，感覺是很簡單的，但是又看到網上很多人都說失敗率很高，我也看了好多高手做天然酵種，之前是對天然酵種是有點了解，但沒親身做過，自從德州農民做了天然酵種面包以后，好多人都在做天然酵種面包。我知道日本有很多面包房就用
酵母實驗操作方案（2)
附錄一 培養基 LB： Tryptone 10g 1% Yeast Extract 5g 0.5% NaCl 5g 0.5% 【Agar】 15g 1.5%（固體培養基另加） dH2O稀釋至1L，高壓滅菌 YPD： Yeast Extract 10g 1%
釀酒酵母培養條件實驗
液體培養基中細胞滴度的檢測 菌落的影印培養 酵母培養物的儲存 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酵母在瓊脂或液體培養基中的理想培養溫度是30℃，培養皿平板應倒
酵母實驗操作方案（1)
一．質粒酶切及線性化1）用維特潔日常型小量DNA純化試劑盒抽提9KSF2，可得到較純的質粒10μg/3ml菌液，終體積80ul。2）線性化質粒使用80μl酶切體系9KSF2質粒 70μl內切酶（SacI， SalI， BglⅡ） 2μl10 x buffer 8μl3）酶切3－16小時，一般3小時即