生物素化寡聚脫氧胸苷鏈親和素磁珠純化帶Poly(A)+RNA
用磁性微球代轉纖維索作為介質,這種方法比較常用且已商品化。試劑、試劑盒GTC 抽提緩沖液稀釋緩沖液 β-巰基乙醇無 RNase 水20XSSC0.5XSSC1XPBS。儀器、耗材親和素-磁珠 (SA-PMP)生物素標記的 oligo(dT) 探針磁架75℃ 水浴50 ml 無菌 Corex 離心管15 ml 螺旋蓋錐形離心管TissuemizerDM 或其他同類勻漿器BeckmanJ2-21 離心機或其他類似設備實驗步驟一 材料與設備1) 親和素-磁珠 (SA-PMP)2)GTC 抽提緩沖液:4moL/I, 異硫氰酸胍,25 mmol/L 檸檬酸鈉,pH:7.13) 生物素標記的 oligo(dT) 探針(50pmol/ul)4) 稀釋緩沖液:6XSSC,lmmol/L Tris-HCl,PH 7.4,10 mmoL/L EDTA,0.25% SDS5)β-巰基乙醇 (48.7%)6) 無 RNase 水7)20XSSC:67.......閱讀全文
鏈親和素生物素結合物免疫熒光標記實驗
實驗材料 組織樣品試劑、試劑盒 生物素熒光染料鏈親和素儀器、耗材 離心機搖床實驗步驟 1. ?將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒,由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片,放入玻片盒中(每邊放6片),或故濕盒中(載玻片勿相互接觸)。?2. ?待載玻片達室濕且未干時,鋪加PBS于切片上(勿溢出玻片)。?3.
鏈親和素生物素結合物免疫熒光標記實驗
免疫熒光標記是微生物學、免疫學、病理學及免疫組織化學中常用的一種免疫學實驗方法,在臨床上得到了廣泛的應用。實驗方法原理免疫熒光標記技術(immunofluorescence technique)是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素,當與其相對應的抗原或抗體起反應時,在形成的復合物上就帶有一定量的熒光
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗可用于:(1)體外診斷;(2)體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外,還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選,而且 DNA 文庫具有更好的穩定性,操作也相對簡便。實驗材料3
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外,還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選,而且 DNA 文庫具有更好的穩定性,操作也相對簡便。
poly(A)+-RNA的制備實驗
利用cND A微陣列技術可用于:(1)并行分析檢測成千上萬個基因的表達情況;(2)在新基因的發現、基因組功能的研究、疾病的預測和診斷、藥物靶標的確定和藥物毒性預測等多方面發揮著重要的作用。實驗方法原理大多數的信使RNA(mRNA)都帶有poly(A)尾,而結構RNA沒有。使用本工作方案,可以將帶po
Biotin標簽蛋白純化工具的應用類型
Biotin 標簽與其它標簽的球形蛋白不同,生物素(Biotin)要小得多,這使蛋白質間的干擾更小;同時可以多個生物素偶聯在單個蛋白質上,利用鏈霉親和素,可使檢測效果最大化。此外,生物素含有戊酸側鏈,很容易與其它基團反應偶聯生成相關衍生物,且不影響鏈霉親和素與生物素的結合功能,極大拓展了生物素的應用
親和素和生物素為什么親和力最高
生物素容易與蛋白質和核酸類等生物大分子結合,形成的生物素衍生物,不僅保持了大分子物質的原有生物活性,而且比恬度高,具多價性。此外,每個親和素分子有四個生物素結合部位,可同時以多價形式結合生物素化的大分子衍生物和標記物。因此,BAS具有多級放大作用,使其在應用時可極大地提高檢測方法的靈敏度。特異性親和
mRNA的提取及純化實驗——磁珠法
真核細胞的mRAN是單順反子,其最顯著的特征是具有5‘'端帽子結構和3'端的poly A的結構,此poly A結構為mRNA的提取提供了有效的途徑。實驗材料mRNA試劑、試劑盒mRNA分離試劑盒異丙醇NaAC儀器、耗材儀器水浴離心機取液器分光光度計實驗步驟一、生物素標記的Oligo(
RNA的分離與純化
包括Northern雜交在內的許多分子生物學實驗均是以RNA為材料,mRNA的制備也需要一定質量的總RNA樣品,RNA的數量、純度與完整性將直接影響這些實驗的結果。RNA中rRNA的數量最多,占總量的80%~85%;tRNA及核內小分子RNA占15%~20%;mRNA僅占1%~5%。由于各種rRNA
2.8.3-甲型肝炎病毒-RNA-提取
試劑、試劑盒TSES 緩沖液TSES 緩沖液飽和酚氯仿辛醇乙酸鉀乙醇緩沖液 Almol LNaH2P04 緩沖液氯胺 T 溶液Na125I5 mmol LNa2S2O5lOOmmol LKINET 緩沖液酵母 tRNA蔗糖纖維素柱平衡液三重蒸餾水0.1mol LNaOH5 mmol LEDTA0.1
甲型肝炎病毒-RNA-提取
試劑、試劑盒 TSES 緩沖液TSES 緩沖液飽和酚氯仿辛醇乙酸鉀乙醇緩沖液 Almol LNaH2P04 緩沖液氯胺 T 溶液Na125I5 mmol LNa2S2O5lOOmmol LKINET 緩沖液酵母 tRNA蔗糖纖維素柱平衡液三重蒸餾水0.1mol LNaOH5 mmol L
甲型肝炎病毒-RNA-提取
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TSES 緩沖液 TSES 緩沖液飽和酚 氯仿 辛醇 乙酸鉀 乙醇 緩沖液 A lmol L
順磁性鏈霉抗生物素蛋白珠子的純化實驗
試劑、試劑盒 ATEN 緩沖液聚乙烯乙二醇T5E5 緩沖液Dpn I蛋白酶 KRNA 酶 A5'端為生物素-TEG 且 3'端為核糖胞嘧啶的引物蛋白酶 K 處理過的 PCR 產物 儀器、耗材 磁鐵鏈霉抗生物素蛋白珠子 實驗步驟 一、材料 1. 緩沖液、溶液和試劑
順磁性鏈霉抗生物素蛋白珠子的純化實驗
試劑、試劑盒 ATEN 緩沖液聚乙烯乙二醇T5E5 緩沖液Dpn I蛋白酶 KRNA 酶 A5'端為生物素-TEG 且 3'端為核糖胞嘧啶的引物蛋白酶 K 處理過的 PCR 產物儀器、耗材 磁鐵鏈霉抗生物素蛋白珠子實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑1X ATEN 緩沖液(見第
順磁性鏈霉抗生物素蛋白珠子的純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATEN 緩沖液 聚乙烯乙二醇 T5E5 緩沖液 Dpn I 蛋白酶 K RNA 酶 A 5'端為生物
生物素姊妹篇鏈霉親和素及其衍生物的應用(二)
? ? ? ??HeLa細胞中α-微管蛋白的免疫熒光染色:將固定和透化的HeLa細胞中的α-tubulin與兔抗tubulin一抗一起孵育,然后與生物素化的山羊抗兔IgG(H&L)(Cat# 16794)進行孵育,然后加入iFluor?647-鏈霉親和素偶聯物(Cat# 16966),使用D
生物素鏈霉親和素結合系統及衍生品的實際應用(二)
? ? ?? 注意:?? ? ? ?Ext. Coeff. = 在其最大吸收波長處的摩爾消光系數(單位= cm -1 M -1)。? ? ? ?FQY = 在水性緩沖液(pH 7.2)中的熒光量子產率。?? ? ? ?2.生物素化二抗? ? ? ?我們提供生物素化的二抗,可與基于鏈霉親和素的擴增技術
生物素姊妹篇鏈霉親和素及其衍生物的應用(一)
? ? ? ?上一期我們給大家介紹了目前在生化實驗中被廣泛使用的生物素-鏈霉親和素結合系統,以及其中的第一個成員——生物素及其衍生物以及他們的一些常規的應用,今天給大家帶來了該系統中另外一個重要的成員——鏈霉親和素及其衍生物,與生物素類似,鏈霉親和素分子本身也較小,同時也可以與生物活性大分子(例
生物素鏈霉親和素結合系統及衍生品的實際應用(一)
? ? ? ?生物素-鏈霉親和素結合系統的廣泛采用主要是由于兩個因素。第一個是生物素和鏈霉親和素分子本身相對較小,它可以與生物活性大分子(例如抗體)廣泛結合,而不會對其功能(即抗體的結合位點)產生抗性。第二個是生物素和鏈霉親和素彼此結合的特異性,以及后續鍵的強度,可實現強大的流線型生物測定應用。
親和素生物素系統:如何減少干擾更好地應用于免疫...
親和素-生物素系統:如何減少干擾更好地應用于免疫檢測-1-什么是親和素-生物素系統(鏈霉)親和素-生物素是免疫檢測中常用的信號放大系統。親和素是蛋清中常見的糖類蛋白,由四個相同的亞基組成。每一個亞基都包含一個生物素結合位點,因此一個理論上正常的親和素能夠結合4個生物素。親和素與生物素具有非常強烈的親
鏈親和素的性狀
鏈親和素的性狀描述級別:Biotechnology grade活力:≥17 units/mg proteinDnase,Rnase&protease activity:None detectedElectrophoresis (One Band):Pass產品描述:Streptomyces av
帽子轉換-RACE-實驗
這里介紹的方法,是用一個生物素化的引物來幫助純化第一鏈產物。這些純化技術是可以互換的。與之類似,使用這里所介紹的基于寡核苷酸-(dT) 的引物,在反轉錄的起始階段使用的基因特異性引物(如上所述)也是可以互換的。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。試劑、試劑盒寡核苷酸引物cD
特定細胞類型標記的細胞核分離
從大量的植物或動物組織中分離出特異性的細胞類型是費力和棘手的。為了研究表觀遺傳學上的改變和在不同細胞系中不同表達的基因,如癌細胞與正常細胞,或者擬南芥中兩種類型的表皮細胞(epidermal cell),人們通常必須采用激光捕獲顯微切割(laser capture microdissection,
中國首發納米孔RNA直接測序揭示其在全長轉錄本中的作用
近日發表在RNA Biology上的研究中,來自中國科學院北京生命科學研究院、動物研究所及中國科學院大學等多家單位的科學家們首次通過5’-Cap捕獲法對蝗蟲的 RNA直接測序,揭示了Piwi 外顯子化模式的廣泛建立以及蝗蟲轉錄組中的轉座子(TEs)對RNA剪接的重要作用。 轉座子(TEs)在后
從RNA抽提到制成cDNA的全過程
一).構建cDNA文庫:以生物細胞的總 mRNA 為模板,用反轉錄酶合成互補的雙鏈 cDNA ,然后接到載體上,轉入到宿主后建立的基因文庫就是 cDNA 文庫。1、mRNA的提取及其完整性的確定1) 總 RNA 的提取RNA 提取方法:APGC法或NP-40或應用試劑盒提取總RNA2)mRNA的分離
生物素親合素系統的生物素與親和層析介紹
親和層析是將具有特殊結構的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中,當要被分離的蛋白混合液通過層析柱時,與吸附劑具有親和能力的蛋白質就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質由于不被吸附,直接流出,從而與被分離的蛋白質分開,然后選用適當的洗脫液, 改變結合條件將被結合的蛋白質洗脫下來。 生
寡聚(dT)纖維素柱純化mRNA
實驗概要本實驗介紹了寡聚(dT)-纖維素柱層析法純化mRNA。此法利用mRNA 3’末端含有Poly(A )的特點,在RNA流經寡聚(dT)纖維素柱時,在高鹽緩沖液的作用下,mRNA被特異地結合在柱上,當逐漸降低鹽的濃度時或在低鹽溶液和蒸餾水的情況下,mRNA被洗脫,經過兩次寡聚(dT)纖維柱后,即
泛素化蛋白快速富集純化黑科技TUBEs
? ? ? ?泛素化是一種常見的調節蛋白的穩定性和功能的翻譯后修飾。蛋白的泛素化需要3種酶的參與,分別是泛素活化酶(ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素偶聯酶(ubiquitin conjugation enzyme,E2)和泛素連接酶(ubiquitin
Poly(A)+RNA-Isolation
Eukaryotic messenger RNA (mRNA) can be separated from the other RNA species in a total RNA preparation by affinity chromatography by virtue of the
生物素鏈霉抗生物素蛋白系統的方法介紹
中文名稱生物素-鏈霉抗生物素蛋白系統英文名稱biotin streptavidin system定 義利用生物素與鏈霉抗生物素蛋白有很高親和結合能力設計的檢測分析系統。與生物素-抗生物素蛋白系統相似,但鏈霉抗生物素蛋白表面所帶正電荷少,且不含糖基,在實驗中非特異性結合遠低于抗生物素蛋白。應用學科生