分離和培養人角膜內皮細胞實驗——分離人角膜內皮細胞
實驗材料完整的人角膜試劑、試劑盒CMF-SalineG胰蛋白酶 EDTADMEM F-12 GASPDMEM F-12 2FB:DMEM:Ham’sF-12 1:1 含2%FBSCMF GASP儀器、耗材手術刀或單刃安全刀片彎虹膜剪 11cm(4-3 8 in.)Jeweler’s懾子 10cm(4 in.)角膜剪 19mm刃 尖頭Colibri縫線鉗0.1 mm實驗步驟(a)用PBSA將角膜清洗3次，每次5 min。(b)剪除殘留的鞏膜，結膜和虹膜。(c)加人2 ml 1.2 U/ml中性蛋白酶II，4℃過夜，輕微攪動。(d)將加人中性蛋白酶II的角膜放人4℃搖床搖30 min。(e)用DMEM/F-12/GASP清洗角膜。(f)解剖顯微鏡下，小心去除小梁網，剝離內皮層并用胰蛋白酶/EDTA消化37℃，30 min。(g)加入同等體積的DMEM/F-12/2FB并拍散細胞。(h)離心400g,10 min,棄去上清。(i)加人......閱讀全文
人臍靜脈內皮細胞分離培養儀器試劑和操作步驟
溶液以及器材：1、用RPMI-1640配I型膠原酶 0.1g/100ml2、配三抗：青霉素：100ku/L鏈霉素：100ku/L慶大霉素：100ku/L3、培養液（M199＋ECGS[3ug/ml]＋15％胎牛血清）有EGF可以適當加點10ng/ml4、大瓶生理鹽水5、廣口瓶（臍帶數＋1）6、止血鉗
人臍帶靜脈內皮細胞的分離培養與增殖試驗
血管內皮細胞不僅參與調節血管通透性和凝血過程，在免疫調節，移植排斥，腫瘤轉移，炎癥等許多過程中也具有重要作用。內皮細胞培養是體外研究內皮細胞功能的重要手段。70年代Eric等建立了內皮細胞分離及體外培養的方法。人臍帶靜脈是人血管內皮細胞最易獲取的來源，在人內皮細胞的研究中被普遍采用。 ㈠ 原理在體
臨床物理檢查方法介紹角膜內皮細胞計數儀介紹
角膜內皮細胞計數儀介紹:?角膜內皮細胞計數儀是一種眼科醫療器械,角膜內皮顯微鏡通過所拍攝的照片可以觀察角膜內皮細胞的大小、形狀、細胞密度和細胞的轉變過程,對內皮細胞的形態改變可以做深入的了解。角膜內皮細胞計數儀正常值:?除這些癥狀角膜炎:羞明、流淚、疼痛、眼瞼閉鎖、結膜潮紅。外傷所致的則角膜表面粗糙
ELISA試劑盒研討移植角膜內皮細胞可恢復視力
elisa試劑盒研究人員日宣告，他們在進行臨床研討時，通過向大泡性角膜病變病人的角膜直接寫入經過培育的異體角膜內皮細胞，ELISA試劑盒成功康復了病人的視力。角膜是坐落眼球前壁的一層通明膜，角膜內皮細胞坐落角膜最內側，能夠調整水分，具有堅持角膜通明性的效果。大泡性角膜病變是因為外傷等因素，造成角膜內
正常人角膜上皮細胞和干細胞的分離實驗
實驗材料：1.?完整的人角膜；2.?GMF-Saline G；3.?中性蛋白酶Ⅱ，1.2U/ml（用DMEM/F12/GASP稀釋2.4U中性蛋白酶Ⅱ）；4.?胰蛋白酶/EDTA；5.?DMEM/F12/GASP；6.?DEME/F12/2FB/GASP：DMEM/F12/GASP含2%FBS；7.
角膜內皮細胞計數儀的臨床意義及注意事項
臨床意義 異常結果：由于內皮功能自發性代償失調，或角膜外傷，不適當的角膜放射狀切開，白內障，青光眼等內眼手術后所造成的角膜內皮損傷，功能失調所致。 需要檢查的人群：角膜內受傷患者。 注意事項 不合宜人群：其他炎癥，突發性疾病。 檢查前禁忌：忌用腎上腺皮質激素。 檢查時要求：用消毒的毛
角膜內皮細胞計數儀的注意事項及檢查過程
注意事項 不合宜人群：其他炎癥，突發性疾病。 檢查前禁忌：忌用腎上腺皮質激素。 檢查時要求：用消毒的毛巾熱敷。 檢查過程 先進行眼前檢查，眼瞼，眼壓，眼外部等等。然后操作計數儀，讓患者坐與前面再進行角內膜觀察。
原代微血管內皮細胞的體外分離培養
微血管內皮細胞生長因子的應用和免疫磁珠技術的發展，使微血管內皮細胞的培養和純化變得相對簡化。?1、微血管內皮細胞培養簡述人體主要器官和組織的微血管內皮細胞已經培養成功的有：骨骼肌、心、腦、胃、視網膜、肺、皮膚、脈絡膜、小腸、脂肪、肝竇、腎、關節滑膜、胎盤、骨髓、胰島、角膜及食道等器官組織的微血管內皮
正常人原代角膜間質細胞的分離
正常人原代角膜間質細胞的分離 實驗材料： 1.完整的人角膜； 2.GMF-Saline G； 3.中性蛋白酶Ⅱ；PriCellls原代細胞分離試劑盒 4.L型膠原酶，1mg/ml在DMEM/F12/GA中； 5.GMF-Saline G配制的TrypLE Expre或0.
正常人原代角膜間質細胞的分離
正常人原代角膜間質細胞的分離實驗材料：1.?完整的人角膜；2.?GMF-Saline G；3.?中性蛋白酶Ⅱ；PriCellls原代細胞分離試劑盒4.?L型膠原酶，1mg/ml在DMEM/F12/GASP中；5.?GMF-Saline G配制的TrypLE Express或0.25%胰蛋白酶；6.?
正常人角膜上皮細胞和干細胞的分離
實驗材料： 1.完整的人角膜； 2.GMF-Saline G； 3.中性蛋白酶Ⅱ，1.2U/ml（用DMEM/F12/GA稀釋2.4U中性蛋白酶Ⅱ）； 4.胰蛋白酶/EDTA； 5.DMEM/F12/GA； 6.DEME/F12/2FB/GA：DMEM/F12/GA含2%F；
偶聯了PECAM抗體的順磁玻珠分離內皮細胞的實驗
實驗概要本實驗用以血小板內皮細胞粘附分子（PECAM或CD31）為靶分子的活性篩選技術分離和培養純的人毛細血管內皮細胞。實驗原理PECAM是130kDa內膜糖蛋白，屬于細胞粘附分子的免疫球蛋白超家族。該分子在細胞中呈組成型表達，基本上為內皮細胞和血小板所獨有，只有一些骨髓譜系的亞種例外。PECAM在
人毛細血管內皮細胞分離—偶聯了抗PECAM抗體磁珠篩選細胞
試劑、試劑盒PBS FCS儀器、耗材磁珠T25 板實驗步驟1. 向“分離樣品的制備”步驟10的細胞樣品中加入 30 μl 偶聯了抗 PECAM 抗體的磁珠。2. 細胞和磁珠混合物冰上保溫 15 分鐘。3. 磁體置于管側 5 分鐘，吸引篩選樣品向磁體移動。小心吸棄上清，移開磁體。4. 向磁珠中加 2
關于角膜的生理結構介紹
1.解剖：角膜位于眼球最前端，為質地堅韌而富有彈性的透明組織，表面呈圓形、稍向前凸。橫徑約為11mm，豎徑約為10.5mm，周邊厚約1mm，中央厚0.5～0.6mm。角膜前表面曲率半徑約為7.8mm，后表面曲率半徑約為6.8mm，前表面屈光度為+48.8D，后表面的屈光力為-5.8D，所以角膜的
人毛細血管內皮細胞的分離—偶聯抗PECAM抗體的磁珠的制備
實驗材料抗人 CD-31（PECAM）單克隆抗體試劑、試劑盒PBS BSA儀器、耗材磁珠實驗步驟1. 短暫振蕩，使磁珠溶液均一。2. 用 PBS 稀釋 PBS/BSA（4.0 mg/ml BSA）至 BSA 終濃度 0.2 mg/ml。3. 取 100 μl 磁珠（1 mg）加 2 ml 含 0.2
人臍靜脈內皮細胞的介紹
人臍靜脈內皮細胞（英Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）在進行血管內皮細胞實驗時，通常選用的細胞模型為人臍靜脈內皮細胞（Human umbilical vein endothelial cells，簡稱HUVECs)。而不是直接采用靜脈血管內皮細
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）培養
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）培養1 ).?將15-20cm長的新生兒臍帶放入無菌的PBS溶液中儲存。（注：4℃下最多貯存24小時，室溫下不超過6小時，否則廢棄）2 ).?用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中，用無菌的PBS溶液沖洗3-5次，將污血沖洗干凈為止。3 ).?用手術鉗夾緊臍帶下端，加入15m
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）培養
實驗材料 新生兒臍帶試劑、試劑盒 PBS膠原酶M199培養基胰酶EDTADMEM培養基儀器、耗材 針頭手術鉗離心管低溫離心機彎管明膠恒溫培養箱顯微鏡實驗步驟1. 將15-20cm 長的新生兒臍帶放入無菌的PBS 溶液中儲存。（注：4℃下最多貯存24 小時，室溫下不超過6 小時，否則廢棄）2. 用一個
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）培養
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）培養?1. 將 15-20cm 長的新生兒臍帶放入無菌的 PBS 溶液中儲存。（注：4℃下多貯存 24 小時，室溫下不超過 6 小時，否則廢棄）?2. 用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中，用無菌的 PBS 溶液沖洗 3-5 次，將污血沖洗干凈為止。?3. 用手術鉗夾緊臍帶
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）培養
1. 將 15-20cm 長的新生兒臍帶放入無菌的 PBS 溶液中儲存。（注：4℃下最多貯存 24 小時，室溫下不超過 6 小時，否則廢棄）2. 用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中，用無菌的 PBS 溶液沖洗 3-5 次，將污血沖洗干凈為止。3. 用手術鉗夾緊臍帶下端，加入 15ml 的膠原酶（1mg
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）培養
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）可用于：（1）作為體外實驗模型細胞；（2）研究血管內皮細胞的生物學特性及其與各種疾病的關系。實驗方法原理本實驗采用新鮮的健康產婦新生兒臍帶，采用膠原酶Ⅰ型用消化分離得到臍靜脈內皮原代細胞。膠原酶是最理想的血管內皮細胞分離酶，對細胞間質有較強的消化作用，能使上皮細胞與膠原
人PBMC分離和培養
1、將靜脈血20ｍl用ACD抗凝劑以容積比血：抗凝劑＝9：1抗凝處理2、按血：分離液＝1：2注入國產淋巴細胞分離液上層，400g 20℃離心30分鐘3、交接層重浮于4倍體積的RPMI1640并通過離心法200g，10min洗三次4、獲得細胞可做分選或其他實驗。體會：1、實驗中我用過肝素方法抗凝，但效
角膜水腫的病因及常見疾病
角膜內水的含量(78%)是恒定的，如果含量增加就會產生角膜水腫。角膜內皮有泵水和漏水的功能，通過內皮細胞的間隙，房水進入基質；角膜不斷將基質內的水泵出，其漏水率與泵水率相等。內皮屏障和泵功能受多種因素影響。各種引起角膜內皮損害的疾病(青光眼、角膜炎、角膜營養不良以及虹膜睫狀體炎)和手術創傷均可導
角膜盲患者的希望：人工角膜
因角膜受損而導致的盲眼病被稱作角膜盲，它是僅次于白內障的第二大致盲眼病。我國目前角膜盲患者約有400萬名，并且每年新增10萬多病例。角膜盲患者復明的唯一手段是角膜移植，但由于我國角膜供體極其匱乏，90%的角膜盲患者都在黑暗中苦苦等待。 視覺中國供圖 用相機拍照，如果鏡頭損壞，照片自然不會清晰
HUVEC人臍靜脈內皮細胞培養要點
1984年，HUVEC細胞株由Hiroyoshi Hoshi、Wallace L.Mckeehan從一段長約10-20cm的人正常臍帶靜脈中獲取、建立。SetsukoShioda等人研究發現，HUVEC細胞株18-30代的倍增時間為23.5個小時，24-27代的倍增時間為67個小時，27-30代的倍
HUVEC人臍靜脈內皮細胞培養要點
1984年，HUVEC細胞株由Hiroyoshi Hoshi、Wallace L.Mckeehan從一段長約10-20cm的人正常臍帶靜脈中獲取、建立。SetsukoShioda等人研究發現，HUVEC細胞株18-30代的倍增時間為23.5個小時，24-27代的倍增時間為67個小時，27-30代的倍
HUVEC人臍靜脈內皮細胞培養要點
1984年，HUVEC細胞株由Hiroyoshi Hoshi、Wallace L.Mckeehan從一段長約10-20cm的人正常臍帶靜脈中獲取、建立。SetsukoShioda等人研究發現，HUVEC細胞株18-30代的倍增時間為23.5個小時，24-27代的倍增時間為67個小時，27-30代的倍
人臍靜脈內皮細胞的形態學觀察和鑒定方法
人臍靜脈內皮細胞爬片準備：細胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態及生長特征，并作相差攝影，同時進行常規HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學法，在6孔培養板中放置載玻片，在玻片上植入2ml含有1×106的細胞懸液，待細胞貼壁后，取出載玻片，放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖
什么是內皮細胞？
內皮細胞，是一層鱗狀細胞，排列在血管和淋巴管的內表面。內皮形成循環之間的界面血液或淋巴中的內腔和血管壁的其余部分。內皮細胞在血管和組織之間形成屏障，并控制物質和流體進出組織的流動。與血液直接接觸的內皮細胞被稱為血管內皮細胞，而與淋巴直接接觸的內皮細胞被稱為淋巴內皮細胞。從心臟到最小的毛細血管，血管內
內皮細胞的特點
在心血管系統的內皮細胞中，還有懷布爾-帕拉德體（Weible-Palade body，簡稱W-P小體），又稱內皮特有顆粒。