蛋白質分離和分析——凝膠蛋白質染色
實驗步驟 基 本 方 案 1 考馬斯亮藍染色檢測范圍為〇.3?lMg 每蛋白質條帶。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)聚丙烯酰胺凝膠（單 元 12. 3)考馬斯亮藍、銀染用固定液考馬斯亮藍染液甲醇/乙酸脫色液7 % (V /V ) 水乙酸Whatman 3M M 濾 紙（可選）干 膠 儀（可選）1 . 將聚丙烯酰胺凝膠放入塑料容器中，加 入 3?5 倍膠體積的固定液，室溫下搖床上振蕩 2 h。2 . 棄去固定液，加入考馬斯亮藍染液振蕩 4 h 。3 . 棄去染色液，用 50m l 左右固定液清洗凝膠。4 . 棄去固定液，加入甲醇/乙酸脫色液振蕩 2 h 。5 . 棄去脫色液，加入新鮮脫色液繼續脫色，直至凝膠背景和條帶清晰。可將凝膠儲存于 7 % 水乙酸中，或者儲存于含水密封塑料袋中， 4°C 可儲存一年左右。6 . 若有需要，可將凝膠拍照。7 . 若有需要，制成干膠可永久保存凝膠。將凝膠置于兩張 Whatman ......閱讀全文
蛋白質分離和分析——凝膠蛋白質染色
實驗步驟?基 本 方 案 1 考馬斯亮藍染色檢測范圍為〇.3?lMg 每蛋白質條帶。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)聚丙烯酰胺凝膠（單 元 12. 3)考馬斯亮藍、銀染用固定液考馬斯亮藍染液甲醇/乙酸脫色液7 % (V /V ) 水乙酸Whatman 3M M 濾 紙（可選）干 膠 儀（可選
蛋白質分離和分析
基 本 方 案 可 溶 性 或 膜 結 合 抗 原 的 分 離材 料抗 體（Ab)-Sepharose (單兀 12. 2)活 化 的（對照）Sepharose填料，用于制 備 A b -Sepharose填 料（單 元 12. 2)，但去除了抗體或偶聯時用無關抗體替代細胞或勻漿的組織T S A 溶
凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質
（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所
凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質
（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所
凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質
（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所
凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質
（一）原理?凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，
凝膠層析法(凝膠過濾)脫鹽和分離蛋白質2
（3）在開始收集洗脫液的同時檢查蛋白質是否已開始流出。為此，由每支收集管中取出1滴溶液置于黑色比色磁盤中，加入1滴20%磺基水楊酸，若呈現白色絮狀沉淀即證明已有蛋白質出現，直到檢查不出白色沉淀時，停止收集洗脫液。（4）由經檢查含有蛋白質的每管中，取1滴溶液，放置在白色比色盤孔中，加入1滴奈氏試劑，若
凝膠層析法(凝膠過濾)脫鹽和分離蛋白質1
原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所需時間
凝膠層析法(凝膠過濾)脫鹽和分離蛋白質3
灌注凝膠時要求將均勻的凝膠一直加到所需柱床高度，不能時斷時續，否則將出現分層或“紋路”等毛病。若中途出現這些現象，可以用玻璃棒將已形成的柱床逐步攪起，直至出毛病的部分再讓凝膠重新沉降或繼續加入攪勻的凝膠懸液。若在灌好膠后才發現“紋路”、分層等現象時，要重新裝柱，以免影響層析效果。在做大型的凝膠柱時，
凝膠層析法分離蛋白質
一．目的1．了解層析技術的基本原理；2．初步掌握分子篩層析的原理和操作方法。 二．原理 介紹層析的概念 所謂層析，就是利用樣品中各組成成分的理化性質的差異，使各組分以不同程度分布在固定相和流動相兩相中，由于各組分隨流動相前進的速率不同，從而把它們分離開來的技術。這些物理特性包括分子的大小
凝膠層析法分離蛋白質
原理 介紹層析的概念 所謂層析，就是利用樣品中各組成成分的理化性質的差異，使各組分以不同程度分布在固定相和流動相兩相中，由于各組分隨流動相前進的速率不同，從而把它們分離開來的技術。這些物理特性包括分子的大小、形狀、所帶電荷、揮發性、溶解性及吸附性質等。層析系統的必要組分有：
蛋白質凝膠染色法實驗
實驗步驟總蛋白質的檢測1. 總蛋白質色度法染色簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀染法是可選擇的色度方法。如果需要對切下的蛋白質進行質譜分析，則首選不會引入共價蛋白
蛋白質凝膠染色法實驗
實驗步驟 總蛋白質的檢測 1. 總蛋白質色度法染色 簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀
凝膠層析法分離蛋白質原理
所謂層析，就是利用樣品中各組成成分的理化性質的差異，使各組分以不同程度分布在固定相和流動相兩相中，由于各組分隨流動相前進的速率不同，從而把它們分離開來的技術。這些物理特性包括分子的大小、形狀、所帶電荷、揮發性、溶解性及吸附性質等。層析系統的必要組分有： a. 固定相，可以是一種固體、凝膠或固定
凝膠層析法(gel－chromatography)脫鹽和分離蛋白質1
（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所
凝膠層析法(gel－chromatography)脫鹽和分離蛋白質3
灌注凝膠時要求將均勻的凝膠一直加到所需柱床高度，不能時斷時續，否則將出現分層或“紋路”等毛病。若中途出現這些現象，可以用玻璃棒將已形成的柱床逐步攪起，直至出毛病的部分再讓凝膠重新沉降或繼續加入攪勻的凝膠懸液。若在灌好膠后才發現“紋路”、分層等現象時，要重新裝柱，以免影響層析效果。在做大型的凝膠柱時，
凝膠層析法(gel－chromatography)脫鹽和分離蛋白質2
葡聚糖具有較強的親水性，在水和電解質溶液中膨脹成為柔軟而富于彈性的凝膠，其吸水能力與葡聚糖凝膠的交聯度有密切關系。交聯度大的，孔徑小，吸水少，膨脹的程度小；交聯度小的，孔徑大，吸水多，膨脹的程度大。因此，葡聚糖凝膠孔徑的大小可以其吸水量的大小來表示，常以G–10至G–200號碼標記。G后面的數字是其
瓊脂糖凝膠電泳和蛋白質分離純化
脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作為介質的一種電泳方法，其兼具“分子篩”和“電泳的雙重作用。 瓊脂糖(Agarose)是一種線性多糖聚合物，是從紅色海藻產物瓊脂中提取而來的，當瓊脂糖溶液加熱到沸點后冷卻凝固便會形成良好的電泳介質，其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。 經過化學修飾的低熔點的瓊脂糖，在
蛋白質凝膠染色法實驗3
糖蛋白的檢測1. 通用糖蛋白檢測糖 基 化 是 真 核 細 胞 中 最 常 見 的 蛋 白 質 翻 譯 后 修 飾 。寡 糖 通 常 連 接 于 天 冬 酰 胺 側 鏈(iV-連 接 糖 基 化 ) 或 絲 氨 酸 和 蘇 氨 酸 羥 基 側 鏈 (〇 連 接 糖 基 化）。凝 膠 中 蛋 白 質
蛋白質凝膠染色法實驗（一）
總蛋白質的檢測1. 總蛋白質色度法染色簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀染法是可選擇的色度方法。如果需要對切下的蛋白質進行質譜分析，則首選不會引入共價蛋白
蛋白質凝膠染色法實驗（二）
關鍵步驟通常如下所述。(1) 固定凝膠，以固定蛋白質條帶，并移除凝膠中的干擾物質, 如 S D S 、緩沖液和鹽，這些物質會結合銀并造成背景染色。(2) 用能夠結合蛋白質并提高銀結合能力的物質, 或是能夠干擾剩余未結合的銀造成的背景染色的物質來孵育凝膠。總之，這些各種各樣的方法都和敏化作用有關。(3
蛋白質凝膠染色法實驗（五）
磷 蛋 白 的 檢 測作為基本的細胞信號機制, 指定氨基酸殘基的可逆磷酸化作用的重要性已無需爭辯。當前磷蛋白染料具有受ZL保護的構型，即磷酸基結合部分共價連接于熒光團。檢測的方式是選擇性結合磷酸化的氨基酸，但是沒有熒光增強作用。從某種程度上講, 許多可溶的熒光復合物都可作為總蛋白質染色劑
蛋白質凝膠染色法實驗（四）
(3) 用 10% 〇 //V ) 甲醇、7 % ( V /V ) 乙酸進行簡單的凝膠脫色。利用基于微波爐的方案可以加快染色過程的進行。 SYPRO R uby 蛋白質凝膠染料具有相對較高的消光系數和量子產率，因此它十分亮眼, 化學穩定性和光穩定性都很高。光譜的激發可借助紫外線或是藍光光源;
蛋白質凝膠染色法實驗（三）
尼羅紅蛋白質凝膠染色劑尼羅紅 (Nile red) 是一種吩囉嗪酮類染料, 當其從水轉入到疏水環境，如 S D S 微粒或蛋白質-S D S 復合物中時，便顯示出強烈的熒光增強作用。尼 羅 紅 不 會 與 S D S 單體發生顯著作用》利用這一特點開發出了一種適合 S D S 凝膠的迅速
蛋白質凝膠染色法實驗2
2. 總蛋白質熒光法染色熒光染色法結合了檢測靈敏度 (可與銀染法媲美) 與染色流程簡便性 (與考馬斯亮藍染 色 或 Z n?2+?反染法相同），且其線性定量范圍較比色法大 10?100 倍 。檢測依賴于儀器,需要一個單色激發光源、能將波長較長的發射光從波長較短 (也更亮）的激發光中分離出來的選擇性光
蛋白質分離和分析——免疫沉淀
實驗步驟?基 本 方 案 1 用非變性去垢劑裂解細胞制成的懸液進行免疫沉淀材 料未標記或標記的細胞懸液P B S ，冰預冷非變性裂解緩沖液，冰預冷5 0 % (V A O protein A-Sepharose 填 料（Sigma， Amersham Pharmacia Biotech)保存于含 0
蛋白質的分離實驗——凝膠層析法
蛋白質分離純化是用生物工程下游技術從混合物之當中分離純化出所需要得目的蛋白質的方法。應用于（1） 化學物質的分離、提純、濃縮;（2）染料、染料中間體的濃縮及脫鹽（3）超細粉體生產過程中的產品回收;（4）生產廢水中有用物質的提純、回用;（5）海洋生物提取物的濃縮、提純（6）氨基酸、蛋白質的濃縮、提純。
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析—凝膠蛋白質激酶分析
試劑、試劑盒Tris-HClDTT鹽酸胍尿素激酶分析緩沖液儀器、耗材SDS-PAGE實驗步驟1. 準備下列材料：SDS-PAGE 要用到的所有試劑50 mmol/L Tris-HCl，室溫（pH 8.0)，1 mmol/L DTT6 mol/L 鹽酸胍，50 mmol/L Tris-HCl，室溫（p
凝膠層析法分離蛋白質操作方法
本實驗通過SephadexG50層析柱，以蒸餾水為洗脫劑，分離血紅蛋白(紅色，分子量約64500)與硫酸銅(藍色，分子量249.5)的混合物，從顏色的不同可觀察到血紅蛋白洗脫快，硫酸銅洗脫較慢。 三．材料 1．儀器 層析柱(直徑0.8-1.5cm，長10-20cm)；吸管；玻璃棒；小燒杯；2
凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質（附凝膠過濾法原理及...2
凝膠是由膠體粒子構成的立體網狀結構。網眼里吸滿水后凝膠膨脹呈柔軟而富于彈性的半固體狀態。人工合成的凝膠網眼較均勻地分布在凝膠顆粒上有如篩眼，小于篩眼的物質分子均可通過，大于篩眼的物質分子則不能，故稱為“分子篩”。凝膠之所以能將不同分子的物質分開是因為當被分離物質的各成分通過凝膠時，小于篩眼的分子將完