免疫印跡與免疫檢測實驗——發光底物顯跡
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒Tris緩沖液發光底物顯跡液PBS磷酸鹽儀器、耗材保鮮膜搖床實驗步驟1. 用50 ml 底物緩沖液洗膜兩次以平衡膜，每次15 min。 2. 對于使用硝酸纖維素膜或PVDF膜進行的堿性磷酸酶反應：膜置于Nitro-Block溶液中5 min，然后以50 ml 底物緩沖液洗5 min。 3. 將膜移入顯跡液中，浸泡30 s 或5 min。4. 取出膜，滴干水份，將膜正面朝下放在一張透明的塑料保鮮膜上，向后折疊用保鮮膜將膜緊密包裹起來。 5. 在暗房中，將膜正面朝下放在感光膠片上，曝光時間取決于樣品，放射自顯影幾秒或過夜。 6. 如果需要，可用50 ml TBS溶液洗膜15 min，再進行發色顯跡。展......閱讀全文
免疫印跡與免疫檢測實驗——發光底物顯跡
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒Tris緩沖液發光底物顯跡液PBS磷酸鹽儀器、耗材保鮮膜搖床實驗步驟1. ?用50 ml 底物緩沖液洗膜兩次以平衡膜，每次15 min。?2. ?對于使用硝酸纖維素膜或PVDF膜進行的堿性磷酸酶反應：膜置于Nitro-Block溶液中5 min，然后以50 ml 底物緩沖液
免疫印跡與免疫檢測實驗——發色底物顯跡
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒Tris緩沖液發色底物顯跡液PBS磷酸鹽儀器、耗材搖床實驗步驟1. ?在室溫以PBS洗膜15 min 以去除過量的磷酸鹽和Tween 20。2. ?將膜放入發色底物顯跡液，條帶應在10~30 min 內出現。3. ?用蒸餾水洗膜，終止反應。晾干后拍照留永久的記錄。
免疫印跡與免疫檢測
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 轉移緩沖液儀器、耗材 搖床海綿纖維素膜尼龍膜電轉儀實驗步驟 1. ?制備抗原樣品，并用小型或標準尺寸的單向或雙向凝膠分離蛋白，在一個或多個泳道中分離預染色或生物素酰化的蛋白質分子量標準。2. ?電泳完成后，拆卸凝膠夾層，去除積層膠。以適量的轉移緩沖液室溫平衡凝膠30 m
免疫印跡與免疫檢測實驗——第二抗體歐聯物進行免疫檢測
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒封閉緩沖液TTBS緩沖液第一抗體TBS緩沖液儀器、耗材手套搖床實驗步驟1. ?將膜放入可熱密封的塑料袋，加5 ml 封閉液，密封塑料袋，在旋轉搖床或擺動平臺中搖動30~60 min。?2. ?用封閉液稀釋第一抗體（取決于抗體和檢測系統，以1：10~1：100 000稀釋）。
免疫印跡與免疫檢測實驗——親和素生物素偶聯
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒TTBS緩沖液TBS緩沖液過氧化物酶堿性磷酸酶儀器、耗材搖床硝酸纖維素膜尼龍膜實驗步驟1. ?在旋轉搖床或擺動平臺中持續搖動使膜與合適的封閉液平衡。對于硝酸纖維素膜或PVDF膜，需在室溫封閉30~60 min。尼龍膜則需在37℃封閉2 h。2. ?用TTBS溶液（用于硝酸纖
免疫印跡與免疫檢測實驗——轉移槽轉印蛋白質
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材搖床海綿纖維素膜尼龍膜電轉儀實驗步驟1. ?制備抗原樣品，并用小型或標準尺寸的單向或雙向凝膠分離蛋白，在一個或多個泳道中分離預染色或生物素酰化的蛋白質分子量標準。2. ?電泳完成后，拆卸凝膠夾層，去除積層膠。以適量的轉移緩沖液室溫平衡凝膠30 min。3
免疫印跡與免疫檢測實驗——半干轉移系統轉印蛋白質
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材半干燥轉移裝置濾紙實驗步驟1. ?制備樣品，并在小型或標準尺寸的單向或雙向凝膠上分離蛋白質。?2. ?準備轉印膜3. ?拆卸凝膠夾層，除去積層膠。4. ?組裝轉印夾層：Mylar聚酯薄膜屏蔽物3張以轉移緩沖液飽和的濾紙已平衡的轉印膜凝膠3張以轉移緩沖液飽
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）底物化學發光－ECL－法
蛋白質免疫印跡（Western Blot ）可以：（1）從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；（3）用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA 相互作用后續分析。實驗方法原理———底物化學發光 ECL 法Western 免疫印跡（Western B
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）——底物化學發光ECL法
蛋白質免疫印跡可應用于：（1）從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；（3）用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。實驗方法原理Western免疫印跡，是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體
電化學發光免疫檢測原理
電化學發光免疫檢測原理報告者：湘雅醫院檢驗科高騫博士
酶免疫技術酶與底物
酶結合物是酶與抗原或者抗體、半抗原在交聯劑作用下聯結的產物,是 ELISA 成敗的關鍵試劑。它不僅具有抗原抗體的特異性反應,還具有酶促反應的特性,最終產生生物放大的特性。酶免疫反應中,最常用的酶是辣根過氧化物酶,HRP的催化反應需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測（二）
2.3 半定量蛋白質印跡法通 常 認 為 蛋 白 質 印 跡 法 是 定 性 的 ，但 當 加 入 特 定 對 照 時 ，它 也 可 成 為 一 種 定 量 方 法 。當 E L I S A 無 法 用 于 某 種 樣 本 ，或 是 當 生 物 樣 本 中 的 某 種 組 分 會 干 擾 E
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測
實驗步驟一、蛋白質印跡法蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白質樣本進行非直接的檢測。在常規的蛋白質印跡中，蛋白
化學發光底物（化學發光劑）
在化學發光反應中參與能量轉移并最終以發射光子的形式釋放能量的化合物稱為化學發光劑或發光底物。在發光免疫技術中常用的化學發光底物有以下幾類。 1、氨基苯二酰肼類主要是魯米諾及異魯米諾衍生物，是最常用的一類化學發光劑。魯米諾（luminol，5＇-氨基-2，3-二氫-1，
免疫印跡實驗相關原理
免疫印跡用于鑒定能夠與特異性抗體相互作用的大分子抗原（一般為蛋白質）并測定抗原的大小。蛋白質首先通過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，再通過電泳轉移到固相支持物上，固相支持物包括硝酸纖維素膜，聚偏乙烯二氟（PVDF）膜和陽離子尼龍膜等。首先把膜上未反應的位點封閉起來以抑制抗體的非特異性吸附，這樣固定的蛋
免疫學實驗感染免疫檢測介紹
感染免疫檢測介紹： 人的免疫力隨結核分支桿菌或其成分在體內存在而存在，故被稱為感染免疫，或稱有菌免疫，一旦體內結核分支桿菌或其成分全部消失，免疫力也隨之消失。因此要進行感染免疫檢測。 感染免疫檢測正常值： 各項的檢測結果呈陰性。 感染免疫檢測臨床意義： 異常結果：一
實驗室分析儀器化學發光免疫分析儀的底物
HRP 標記的CLEIA常用的底物為魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼,lum ino l) ,或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼) , 是一類重要的發光試劑。其結構如圖4 所示。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行,在過氧化物酶及活性氧[ 過氧化陰離子(O 2- ) , 單線態氧(1O 2 ) ,
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測
實驗步驟 一、蛋白質印跡法 蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯
高靈敏的電化學發光免疫檢測方法
傳統的磁免疫電化學發光(ECL)檢測方法是將磁微球用作捕獲抗體的載體，利用其較大的反應面積及順磁性來實現對檢測物的快速結合與分離。由于單個抗體分子用作標記探針時表面可修飾的基團有限，在靶標濃度很低時，標記探針數量很少，很難檢測到，這影響到靈敏度的進一步提高。本研究將酶聯免疫吸附分析(enzyme
自動化發光免疫分析系統在臨床免疫檢測中的應用
自動發光免疫分析系統智能化程度高，敏感度高、特異性強、精密度和準確性均可高于RIA，特別是檢測靈活性高，快速，檢測試劑穩定并易于進行質量控制。 可用于內分泌激素類、腫瘤標志物類、心肌標志物類、病毒標志物類、治療性藥物濃度、骨代謝指標和貧血類等方面的檢測。
自動化發光免疫分析系統在臨床免疫檢測中的用處
自動發光免疫分析系統智能化程度高，敏感度高、特異性強、精密度和準確性均可高于RIA，特別是檢測靈活性高，快速，檢測試劑穩定并易于進行質量控制。 可用于內分泌激素類、腫瘤標志物類、心肌標志物類、病毒標志物類、治療性藥物濃度、骨代謝指標和貧血類等方面的檢測。
蛋白質免疫印跡實驗
這是一個建立在 B urnette 實驗方案基礎上的實驗流程，小于 80k D a 的蛋白質的轉移效果很好并且結果穩定, 重復性好。應用這種膜轉移方法，我們利用多克隆抗體在下面的樣本中檢測目的蛋白：哺乳動物細胞和細菌溶解產物、細胞培養上清、組織提取物以及組織液。雖然下列實驗條件是根據我們自己的實驗需
免疫印跡Western－bloting實驗原理
免疫印跡Western bloting 這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體（NC、PVDF膜），并以特異性抗體作為探針檢測之。抗體與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行定性、分析。
蛋白質免疫印跡實驗
實驗步驟 操作流程(1)制備與凝膠大小一致的硝酸纖維素膜一張，吸水濾紙 2 張 (Whatman 3 MM)。(2) 將凝膠在轉印緩沖液中浸泡 30m in，將轉移膜、濾紙和海綿墊也在同樣的緩沖液浸濕。(3) 安裝轉印「夾心三明治」。將凝膠放置在玻璃平板上，然后將一張浸濕的濾紙放在凝膠上，如
免疫印跡Western－bloting實驗原理
這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體（NC、PVDF膜），并以特異性抗體作為探針檢測之。抗體與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行定性、分析。材料（MATERIALS）：o? 試劑（REAGEN
蛋白質免疫印跡實驗
蛋白質免疫印跡實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 操作流程 (1)制備與凝膠大小一致的硝酸纖維素膜一張，吸水濾紙 2 張
免疫學實驗細菌感染免疫檢測介紹
細菌感染免疫檢測介紹： 細菌感染免疫檢測指在體外用已知抗體(或抗原)檢測抗原(或抗體)，是臨床細菌性疾病診斷和病原菌鑒定的重要手段之一。用已知抗體(即含特異抗體的免疫血清或單克隆抗體等)檢測標本中或分離培養物中未知細菌的種、型或細菌抗原。或者用已知細菌或特異性抗原檢測患者血清中有無相應抗體及其效價
免疫學實驗體液免疫檢測法介紹
體液免疫檢測法介紹： 體液免疫檢測法是檢測體液免疫功能的技術。分為體外檢測和體內檢測。體外體液免疫檢測法包括抗原抗體反應、體液中各種可溶性免疫因素測定，體內檢測為體液免疫測定技術。 體液免疫檢測法正常值： 呈陰性結果。 體液免疫檢測法臨床意義： 異常結果：免疫球蛋白
技術創新讓食品欺詐現形顯跡
花樣繁多的食品欺詐摻假現象，直接損害了廣大人民群眾的切身利益。今年7月初，國務院食品安全辦等9部門聯合印發通知，在全國開展為期一年的食品、保健食品欺詐和虛假宣傳整治。在全球食品大流通背景下，利用先進的食品真實性和溯源技術手段和方法標準，抵制食品造假，保障食品安全，提升我國食品工業的國際競爭力刻
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測（四）
五、常見問題及其原因5.1 沒 有 信 號初 次 曝 光 時 未 捕 獲 到 化 學 發 光 信 號 , 表 明 該 蛋 白 質 印 跡 系 統 需 要 優 化 。通 常 , 信 號 缺失 由 系 統 中 酶 量 (即 HRP) 過 多 造 成 。當 信 號 不 能 被 檢 測 到 時 ，采