植物基因組總DNA的分離———SDS法
實驗方法原理SDS(十二烷基磺酸鈉)是一種強去污劑,可使細胞膜及核膜破裂,因此被用來分離DNA。該分離過程的第一步是用熱的去污劑(SDS)進行抽提,然后將抽提物置于0℃并加入高摩爾濃度的乙酸鉀,離心去除不溶物,以去除蛋白和多糖類雜質。實驗材料植物新鮮葉片試劑、試劑盒液氮提取緩沖液(用前加入)20%SDS(pH7.2)乙酸鉀5×TE緩沖液RNaseA乙酸鈉異丙醇TE緩沖液儀器、耗材天平研缽和研棒50ml 離心管恒溫水浴鍋冰盒冷凍離心機 ( 至少可達25 000×g)- 20℃冰箱Eppendorf 管微量移液器及吸頭微量離心機冰箱實驗步驟1.將2g新鮮植物葉片置于液氮中速凍,用研缽磨成細粉。2.將冷凍粉末轉移至一50ml離心管中并加入15ml提取緩沖液。輕輕旋轉混勻。3.加入1ml20%SDS,混勻,65℃保溫10min,并不時輕輕旋轉混勻。4.加入5ml 5mol/L乙酸鉀,混勻后冰上放置20～30min。5.25000×g,4......閱讀全文
植物基因組總DNA的分離———SDS法
實驗方法原理SDS(十二烷基磺酸鈉)是一種強去污劑,可使細胞膜及核膜破裂,因此被用來分離DNA。該分離過程的第一步是用熱的去污劑(SDS)進行抽提,然后將抽提物置于0℃并加入高摩爾濃度的乙酸鉀,離心去除不溶物,以去除蛋白和多糖類雜質。實驗材料植物新鮮葉片試劑、試劑盒液氮提取緩沖液(用前加入)20%S
植物基因組總DNA的分離———SDS法
實驗方法原理 SDS(十二烷基磺酸鈉)是一種強去污劑,可使細胞膜及核膜破裂,因此被用來分離DNA。該分離過程的第一步是用熱的去污劑(SDS)進行抽提,然后將抽提物置于0℃并加入高摩爾濃度的乙酸鉀,離心去除不溶物,以去除蛋白和多糖類雜質。實驗材料 植物新鮮葉片試劑、試劑盒 液氮提取緩沖液(用前加入)2
SDS法分離植物DNA
實驗概要Dellaporta，Wood?和?Hicks (1983)?法分離植物總基因組DNA，通過實驗掌握SDS法從植物葉片提取DNA?的原理和方法。主要試劑提取緩沖液?[?詳細信息：100mM Tris.Cl,；50mM EDTA； 500mM Nacl；40mmol/L?巰基乙醇，隨用隨加。]
SDS法提取植物基因組DNA
本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的組織細胞用熱的SDS裂解后，加入高濃度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖類雜質，最后用乙醇或異丙醇沉淀。一 材料、試劑和儀器1 材料 新鮮的組織材料或-80℃凍存的材料2 試劑(1)提取緩沖液Tris-H
CTAB法提取植物總DNA
實驗概要CTAB法是一種快速簡便的提取植物總DNA的方法，通過實驗掌握CTAB法從植物葉片提取DNA的原理和方法。?實驗原理CTAB ?(hexadecyltrimethylammonium ?bromide,十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特
SDS法提取小麥DNA
在提取DNA的過程中SDS的主要作用裂解細胞以及是蛋白質與核酸分離。在提取核酸的過程中，經常會用到高溫（一般65-70攝氏度）加SDS一起裂解細胞，這樣會讓核酸釋放的更快，更徹底；高溫也是裂解細胞的一種方法。但加熱本身對SDS沒有任何輔助作用。但在低溫條件下SDS的溶解度沒有那么高，所以會有一定的沉
分離植物總RNA
實驗概要認識真核生物RNA的組成及分離的原理；學習RNA提取過程中抑制RNA酶活性的方法。實驗原理真核生物的RNA包括rRNA、tRNA和mRNA。一個典型的真核細胞約含有10-5~10-6mg的RNA，其中80-85%為rRNA，其余15-20%主要由各種低分子量RNA組成（如tRNA、核內小分子
植物總RNA的分離
實驗概要認識真核生物RNA的組成及分離的原理；學習RNA提取過程中抑制RNA酶活性的方法。實驗原理真核生物的RNA包括rRNA、tRNA和mRNA。一個典型的真核細胞約含有10-5~10-6mg的RNA，其中80-85%為rRNA，其余15-20%主要由各種低分子量RNA組成（如tRNA、核內小分子
植物基因組DNA及總RNA提取技術1
幼嫩組織的細胞處于旺盛的分裂階段，核較大而胞質較少，核酸濃度高，且內含物少、次生代謝產物少，蛋白質及多糖類物質相對較少，在SDS或 CTAB物質存在時，經機械研磨，使細胞破裂并釋放出內含物，提取的DNA、RNA的產量高，純度好。?提取DNA所用的提取液、吸頭、離心管等需要高壓滅菌以滅活DNase。R
植物基因組DNA及總RNA提取技術2
（二）植物總RNA提取?（1）65°C水浴中預熱15 mL CTAB提取液。?（2）液氮中研磨2～3 g新鮮或-70°C冷凍的材料。?（3）轉移樣品至有CTAB提取液的離心管中，立即激烈渦旋30s，短時放回 65°C水浴中（4～5 min）。?（4）加入等體積的氯仿/異戊醇并渦旋混合，10000 r
利用CTAB法提取植物基因組DNA
一、實驗原理 CTAB（十六烷基三甲基溴化銨）是一種去污劑，可溶解細胞膜并能與核酸形成復合物，該復合物在高離子強度（0.7mol/L）的溶液里是可溶的，通過離心可將復合物同蛋白質、多糖類物質分開。在酚仿變性的條件下，去除殘留的CTAB和蛋白質等雜質，然后利用異戊醇或無水乙醇將DNA分
使用SDS法提取DNA中SDS是什么作用
SDS中文名十二烷基硫酸鈉，是一種已知的能夠使蛋白質變性的去污劑，它可以用于核酸抽提操作中破壞細胞壁及裂解核酸：蛋白復合物。在較高溫度下，破壞蛋白質與DNA的結合，使DNA釋放出來。
動物基因組DNA－的分離純化實驗——鹽溶法
本實驗目的是掌握鹽溶法大量制備動物基因組DNA 的基本原理和方法，根據核糖核蛋白與脫氧核糖核蛋白在一定濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同進行分離, 然后用蛋白質變性沉淀劑去除蛋白,使核酸釋放出來, 再利用核酸不溶于乙醇的性質將核酸析出, 達到分離提純的目的。實驗方法原理根據核糖核蛋白與脫氧核糖核蛋白在一
植物總DNA的快速少量抽提實驗——CTAB法
DNA分子是分子生物學研究的基本材料，依不同的實驗目的可采取不同的抽提方法獲取數量和質量不等的DNA。實驗目的是了解植物DNA抽提的主要方法，掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。實驗方法原理CTAB法：該方法簡便、快速，DNA產量高(純度稍次，適用于一般分子生物學操作)。?CTAB是一種非離子去污劑，
植物組織制備基因組DNA實驗——CTAB法
實驗方法原理加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中， 可用玻棒將其取出，而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部， 從而達到提取的目的。實驗材料植物組織試劑、試劑盒CTAB液2-疏基乙醇TE高鹽TE氯仿異戊醇儀器、耗材研缽離心機培養箱實驗步驟1. ?在所需量
植物RNA的制備實驗——酚/SDS法
由于RNA的種類來源很多，因而提取制備方法各異，一般有苯酚法，去污劑法和鹽酸胍法，其中苯酚法實驗室最常用。組織勻漿后用苯酚處理離心，RNA即溶于上層被酚飽和的水相中，向水相加冷乙醇后， RNA即以白色絮狀沉淀析出。此法較好除去DNA和蛋白質，且獲得生物活性的RNA。實驗材料RNA試劑、試劑盒TELi
植物RNA的分離（總RNA的分離和mRNA的分離）
1. 總RNA的分離總RNA分離的方法很多，常采用的是異硫氰酸胍和b-巰基乙醇這兩種RNase 抑制劑來抑制RNase的活性，同時，異硫氰酸胍與十二烷基肌氨酸鈉（sarcosyl）共同作用可以破壞核蛋白復合體，使RNA順利地解脫出來溶進緩沖液。由于RNA在堿性條件下不穩定，因而在整個提取過程中體
植物基因組DNA的RFLP
實驗概要本實驗介紹了植物基因組DNA的RFLP多態性分析的原理及操作步驟。通過本實驗可了解不同植物或同一植物不同個體之間基因組DNA順序的差異性，掌握DNA限制性酶切片段長度多態性研究的基本方法。實驗原理DNA多態性是指DNA堿基順序的差異性。這種差異性不僅存在于不同的植物之間，也存在于同一種植物的
植物組織制備基因組DNA實驗——氯化銫法
利用基因組DNA較長的特性，可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。在提取過程中，染色體會發生機械斷裂，產生大小不同的片段，因此分離基因組DNA時應盡量在溫和的條件下操作，如盡量減少酚/氯仿抽提、混勻過程要輕緩， 以保證得到較長的DNA。實驗方法原理加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即
植物總DNA提取方法和過程
植物總DNA提取植物總 DNA 的提取有多種方法,轉基因食品檢測中不同用途的 DNA 提取應該采用各自適宜的方法進行。下面介紹用于新鮮或干燥的植物性食品檢測的常見 DNA 提取方法。1、可用于 PCR 的粗提液微量制備1)原理與特點利用攪拌破碎食品組織,堿液破壞細胞壁然后再用緩沖液進行提取。此法主要
植物細胞葉綠體DNA的分離純化
實驗方法原理本實驗首先是制備植物新鮮組織勻漿、過濾,分離出完整的葉綠體,然后通過蔗糖密度梯度離心,把葉綠體與其他亞細胞結構分離開來。完整葉綠體經蛋白酶K酶解后,再通過酚-氯仿抽提獲得高純度的葉綠體DNA。實驗材料植物新鮮幼嫩葉片試劑、試劑盒緩沖液A(提取緩沖液)緩沖液B(裂解緩沖液)TE緩沖液蔗糖溶
植物細胞葉綠體DNA的分離純化
實驗方法原理 本實驗首先是制備植物新鮮組織勻漿、過濾,分離出完整的葉綠體,然后通過蔗糖密度梯度離心,把葉綠體與其他亞細胞結構分離開來。完整葉綠體經蛋白酶K酶解后,再通過酚-氯仿抽提獲得高純度的葉綠體DNA。實驗材料 植物新鮮幼嫩葉片試劑、試劑盒 緩沖液A(提取緩沖液)緩沖液B(裂解緩沖液)TE緩沖液
動物基因組DNA－的分離純化實驗
鹽溶法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 根據核糖核蛋白與脫氧核糖核蛋白在一定濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同進行分離, 然后用蛋白質變性沉淀劑去除蛋白,使核酸釋放出來, 再利用
動物基因組DNA－的分離純化實驗
實驗方法原理 根據核糖核蛋白與脫氧核糖核蛋白在一定濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同進行分離, 然后用蛋白質變性沉淀劑去除蛋白,使核酸釋放出來, 再利用核酸不溶于乙醇的性質將核酸析出, 達到分離提純的目的。在0 . 14 mol/ L 的氯化鈉溶液中, RNA 核蛋白(RNP) 溶解度大, 而DNA
植物總DNA的快速少量抽提實驗
實驗方法原理 CTAB法：該方法簡便、快速，DNA產量高(純度稍次，適用于一般分子生物學操作)。 CTAB是一種非離子去污劑，植物材料在CTAB的處理下，結合65 °C水浴使細胞裂解、蛋白質變性、DNA被釋放出來。CTAB與核酸形成復合物，此復合物在高鹽（>0.7 mM）濃度下可溶，并穩
植物總DNA的快速少量抽提實驗
CTAB法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 CTAB法：該方法簡便、快速，DNA產量高(純度稍次，適用于一般分子生物學操作)。?CTAB是一種非離子去污劑，植物材料在CTAB的
堿法分離質粒DNA的原理
現在質粒提取無論手提還是試劑盒，其根本原理大多還是堿裂解法：當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性 而呈絮狀，離心時可沉淀下來。進一步的質粒DNA獲取，手提是經過苯酚、氯仿抽
堿法分離質粒DNA的原理
現在質粒提取無論手提還是試劑盒，其根本原理大多還是堿裂解法：當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性 而呈絮狀，離心時可沉淀下來。進一步的質粒DNA獲取，手提是經過苯酚、氯仿抽
堿法分離質粒DNA的原理
現在質粒提取無論手提還是試劑盒，其根本原理大多還是堿裂解法：當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性 而呈絮狀，離心時可沉淀下來。進一步的質粒DNA獲取，手提是經過苯酚、氯仿抽
植物總RNA的提取實驗_研磨法
在液氮中研磨植物材料, 使部分細胞破碎, 進一步使植物細胞在裂解液中裂解, 用醋酸鈉和氯仿沉淀蛋白質, 異丙醇沉淀核酸, 溶解后經氯化鋰沉淀總RNA, 洗滌后得到高質量的RNA。本實驗旨在了解和掌握植物總RNA 的分離和純化方法。實驗方法原理在液氮中研磨植物材料, 使部分細胞破碎, 進一步使植物細胞