分子生物學實驗常用試劑配置
一. 常用貯液與溶液 1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學試劑級，無DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。 1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-......閱讀全文
分子生物學實驗常用試劑配置
一. 常用貯液與溶液?1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。?1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。?10mol/L乙酸胺（ammon
分子生物學實驗常用試劑配置
一. 常用貯液與溶液 1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammo
分子生物學實驗常用試劑配置
常用貯液與溶液1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。10mol/L乙酸胺（ammonium ac
分子生物學常用試劑配置
一、分子生物學常用貯存液的配制1、30%丙烯酰胺溶液【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N,N'-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之，補加水至終體積為100ml.用濾器（0.45μm孔徑）過濾除菌，查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中保存于室溫。【注意】丙烯
分子生物學常用試劑的配制
1．LB(Luria-Bertani)培養液、平板的配制配制每升LB培養液，應在950ml去離子水中加入：細菌培養用酵母提取物（bacto-yeastextract）5g細菌培養用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10gNaCl10g搖動容器直至溶質完全溶解，用5mol/LNaOH(約0.2
分子生物學常用試劑的配制
1．LB(Luria-Bertani)培養液、平板的配制 配制每升LB培養液，應在950ml去離子水中加入： 細菌培養用酵母提取物（bacto-yeastextract） 5g 細菌培養用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g NaCl 10g 搖動容器直至溶質完全溶解，用5mo
分子生物學實驗室常用有毒試劑及應急處理
本文整合了分子生物學實驗室常用有毒試劑及應急處理的方法及注意事項。中毒常見的癥狀包括：呼吸系統、循環系統、消化系統、泌尿系統、神經系統、血液系統。 常見有毒試劑：溴化乙錠（C21H20N3Br，EB） 【性質】：EB是分子生物學常用染料 【毒性】：強誘變劑、中度毒性 【注
分子生物學實驗室常用有毒試劑及應急處理
本文整合了分子生物學實驗室常用有毒試劑及應急處理的方法及注意事項。中毒常見的癥狀包括：呼吸系統、循環系統、消化系統、泌尿系統、神經系統、血液系統。常見有毒試劑：溴化乙錠（C21H20N3Br，EB）【性質】：EB是分子生物學常用染料【毒性】：強誘變劑、中度毒性【注意】：通風櫥中配制，接觸時需戴手套，
分子生物學常用試劑的配制（一）
? 1.LB(Luria-Bertani)培養液、平板的配制 配制每升LB培養液，應在950ml去離子水中加入： 細菌培養用酵母提取物(bacto-yeastextract) 5g 細菌培養用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10g NaCl 10g
分子生物學常用試劑的配制（二）
? 15.5ml 85%磷酸(1.679g /ml) 40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用時再稀釋10倍。 Tris-硼酸(TBE)：5×濃貯存液(每升)：54g Tris 堿 27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
水質檢測實驗常用儀器配置清單
水質檢測實驗中，有42種儀器設備必不可少！一、消毒劑指標指標儀器余氯紫外分光光度計一氯胺（總胺）紫外分光光度計臭氧紫外分光光度計二氧化氯紫外分光光度計二、水質常規指標1、微生物指標總大腸桿菌群培養箱，天平，冰箱，顯微鏡耐熱大腸菌群恒溫水浴鍋，培養箱，天平，冰箱，顯微鏡大腸埃希氏菌紫外光燈6W，培養箱
水質檢測實驗常用儀器配置清單
水質檢測實驗中，有42種儀器設備必不可少！一、消毒劑指標指標儀器余氯紫外分光光度計一氯胺（總胺）紫外分光光度計臭氧紫外分光光度計二氧化氯紫外分光光度計二、水質常規指標1、微生物指標總大腸桿菌群培養箱，天平，冰箱，顯微鏡耐熱大腸菌群恒溫水浴鍋，培養箱，天平，冰箱，顯微鏡大腸埃希氏菌紫外光燈6W，培養箱
分子生物學實驗室的器材配置
分子生物學作為基因工程的上游技術，其實驗的成果和準確性將決定下游所有的步驟和最終的實驗結果。所以構建一個完備的分子生物學實驗室是非常重要的，以下就讓我們來看看構建一個分子生物學實驗室需要哪些儀器？ ? 1. 冰箱： 根據藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱。 最常使用的
分子生物學實驗室的器材配置
分子生物學作為基因工程的上游技術，其實驗的成果和準確性將決定下游所有的步驟和最終的實驗結果。所以構建一個完備的分子生物學實驗室是非常重要的，以下就讓我們來看看構建一個分子生物學實驗室需要哪些儀器？? 1.?冰箱：?根據藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱。最常使用的有：4℃
分子生物學實驗室的器材配置
分子生物學作為基因工程的上游技術，其實驗的成果和準確性將決定下游所有的步驟和最終的實驗結果。所以構建一個完備的分子生物學實驗室是非常重要的，以下就讓我們來看看構建一個分子生物學實驗室需要哪些儀器？ 1. 冰箱： 根據藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱。
分子生物學實驗室的器材配置
分子生物學作為基因工程的上游技術，其實驗的成果和準確性將決定下游所有的步驟和最終的實驗結果。所以構建一個完備的分子生物學實驗室是非常重要的，以下就讓我們來看看構建一個分子生物學實驗室需要哪些儀器？ 1. 冰箱： 根據藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱。
分子生物學實驗室的器材配置
分子生物學作為基因工程的上游技術，其實驗的成果和準確性將決定下游所有的步驟和最終的實驗結果。所以構建一個完備的分子生物學實驗室是非常重要的，以下就讓我們來看看構建一個分子生物學實驗室需要哪些儀器？ 1. 冰箱： 根據藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱。
分子生物學常用實驗技術（十八）
五、操作步驟：（一）、模板制備1、M13 單鏈模板制備：在轉化入合適的大腸桿菌宿主菌且在含有指示劑如X-gal/IPTG 的培養基上鋪板之后, 含有M13 重組子的細胞將表現出無色的"噬菌斑"，事實上受感染的細胞并非被噬菌體溶菌或殺死，出現噬菌斑是因為被感染的細菌在生長速度上比其周圍未感染的
分子生物學常用實驗技術（十一）
第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆第一節概述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA 或RNA 的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA 片段在94℃下解鏈; (2) 退火
分子生物學常用實驗技術（二）
第三節操作步驟 一、細菌的培養和收集 將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12 小時至對數生長后期。 二、質粒D
分子生物學常用實驗技術（五）
第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第一節概述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA 的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA 和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA 文庫,構建的cDNA 文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA 和相
分子生物學常用實驗技術（七）
（四） 電泳分析 通常合成的cDNA 第一鏈和第二鏈長度為350-6000 堿基,需進行1.4%堿性瓊脂糖電泳。將第一鏈和第二鏈摻入測定管中的反應液先用酚抽提,乙醇沉淀，方法見本章（二）第二鏈合成中的9-12 步，一般第一鏈和第二鏈上樣量相同。1. 標準分子量DNA 參照物的同位素標記(1) 通常
分子生物學常用實驗技術（十三）
2. 從RNA 合成單鏈cDNA 探針cDNA 單鏈探針主要用來分離cDNA 文庫中相應的基因。用RNA為模板合成cDNA 探針所用的引物有兩種: (1)用寡聚dT 為引物合成cDNA 探針。本方法只能用于帶Poly(A)的mRNA,并且產生的探針極大多數偏向于mRNA 3'末端序列
分子生物學常用實驗技術（九）
第三節從動物組織提取基因組DNA一、材料 哺乳動物新鮮組織。二、設備 移液管、高速冷凍離心機、臺式離心機、水浴鍋。三、試劑1、分離緩沖液：10mmol/L Tris?Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。2、其它試劑：10% SDS，蛋白酶K (20mg/
分子生物學常用實驗技術（十七）
第二節T7 DN A 聚合酶測序技術一、概述 T7 DNA 聚合酶最初具有5'→3'聚合酶活性以及單鏈和雙鏈3'→5'外切酶活性。當T7 DNA 聚合酶用適當方法處理后，可使3'→5'外切酶活力明顯下降。改造后的T7 DNA 聚合酶又稱T7
分子生物學常用實驗技術（六）
一、材料 提純TMV 病毒液（10mg/ml）。二、設備 冷凍臺式離心機，低溫真空干燥儀，電泳儀，電泳槽。三、試劑 TE-飽和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE 緩沖液，無RNA 酶的雙菌水。四、操作步驟1、取一eppendorf 管加入提純
分子生物學常用實驗技術（八）
第五章重組質粒的連接、轉化及篩選第一節概述 質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的DNA 片段(＜10kb)且結構簡單,質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆,從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段, 然后體外使兩者相連接, 再用所得
分子生物學常用實驗技術（十六）
（三）電泳：1、預電泳（1）當凝膠聚合完全后，撥出鯊魚齒梳，將該梳子反過來，把有齒的一頭插入凝膠中，形成加樣孔。（2）立即將膠板固定在測序凝膠槽中，一般測序凝膠槽的上下槽是分開的，因而只有在固定好凝膠板后，方能加入TBE 緩沖液。（3）稀釋10×TBE 緩沖液至1×TBE，將該緩沖液加入上下二個電泳
分子生物學常用實驗技術（十四）
三、菌落原位雜交 對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行克隆篩選時，可采用本方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝酸纖維素濾膜上。經培養一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。1、材料：待檢測的細菌平皿，已標記好的探針
分子生物學常用實驗技術（十二）
第九章分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總D