DNA轉染
DNA轉染· Transfection of Mammalian Cells Using Lipofectamine (LTI)· Guide to Eukaryotic Transfections with Cationic Lipid Reagents (PDF) (LTI)· Transfection of Mammalian Cell (Calcium Phophate Method) (Botwell Lab)· &n......閱讀全文
DNA轉染
DNA轉染·?????????Transfection of Mammalian Cells Using Lipofectamine (LTI)·?????????Guide to Eukaryotic Transfections with Cationic Lipid Reagents?(PDF)
DNA體外轉染試劑_如何準備轉染所需的質粒DNA
轉染效率受到諸多因素的影響，除了細胞、培養基和載體等影響因素外，另外一項非常重要的因素便是DNA的質量。為了比較不同廠家的轉染效率，我們分別從三家不同的供應商購買了質粒制備試劑盒來制備pEGFP-N3質粒DNA，并通過不同的方法將制備的pEGFP-N3質粒轉運至NIH-3T3細胞。pEGFP-N3質
電穿孔轉染－DNA－實驗
電穿孔可以有效地轉染磷酸鈣-DNA 沉淀物等其他方法轉染效果不好的細胞系。但是，與其他轉染方法一樣，未使用過的細胞系進行電穿孔轉染的實驗條件要經過優化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒Giem
電穿孔轉染－DNA－實驗
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒 Giemsa 染液甲醇磷酸鹽緩沖液丁酸鈉載體 DNA細胞生長培養基儀器、耗材 組織培養皿基因脈沖器 II電穿孔設備與電轉化池Sorvall H1000B 轉子或類似設備實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需
電穿孔轉染－DNA－實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液 試劑、試劑盒 Giemsa 染液 甲醇 磷酸鹽緩沖液
脂質體介導DNA轉染法
脂質體（LR）試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下最方面的轉染方法之一。轉染率高，優于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞。用LR進行轉染時，首先需要優化轉染條件，應找出該批LR對轉染某一特定細胞
利用－Polybrene－進行－DNA－轉染實驗
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞試劑、試劑盒 DMSO(30%) 含血清培養基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸鈉要轉染的 DNA儀器、耗材 最低基礎培養基組織培養皿實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需濃度。DMSO(30%)/含血清培養基第 3
利用－Polybrene－進行－DNA－轉染實驗
利用 Polybrene 進行 DNA 轉染實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞
DNA轉染的基本概念
中文名稱DNA轉染英文名稱DNA transfection定 義將外源DNA分子導入真核細胞的過程。一般細胞很難接受外源DNA分子，可用適當的化學或物理方法處理(如磷酸鈣法、電穿孔法等)，使外源DNA容易進入細胞。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
利用－Polybrene－進行－DNA－轉染實驗
下面講述的 Polybrene 與 DMSO 轉染的方法是 Aubin 等（1997) 方法的改進。利用此方法可以有效地將質粒 DNA 轉染中國倉鼠卵巢細胞與角化細胞，產生的轉化體比磷酸鈣-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 時兩種方法的轉染效率無明顯差別。本實驗來源于分子克
如何優化GenMuteTM轉染試劑，提高siRNA/DNA共轉染效率？
GenMuteTM siRNA轉染試劑（Cat#SL100568）是市場上最有力的siRNA傳遞工具之一。siRNA/DNA共轉染時，siRNA的最佳濃度范圍是0.5ηM到10ηM，過多的siRNA可能導致沉默效果差的“洪水效應”，切勿使用超過20ηM的siRNA。以24孔板為例，如下步驟將對如何優
生物粒子介導的－DNA－轉染實驗
下面是拫據 Horch 等（1999)、Sanford 等（1993)、主要基因槍生產商的出版物（US/EG Bulletins 1688 and 2087;Bio-Rad) 以及 Steve Finkbeiner(University of California,San Francisco) 建立
脂染介導的－DNA－轉染實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養物 試劑、試劑盒 脂染試劑 NaCl 枸櫞酸鈉
生物粒子介導的－DNA－轉染實驗
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 生物粒子介導的 DNA 轉染實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 CaCl2 乙醇
脂染介導的－DNA－轉染實驗
下述方法是 Mark Evans 所研究的一種方法的改進（Alexion Pharmaceuticals,New Haven,Connecticut)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。實驗材料指數生長的哺乳動物細胞培養物試劑、試劑盒脂染試劑N
生物粒子介導的－DNA－轉染實驗
試劑、試劑盒 CaCl2乙醇甘油亞精胺質粒DNA細胞生長培養基儀器、耗材 基因槍金或鎢粒子鏡頭紙微量離心管需轉染的細胞或組織實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄1。稀釋貯存液至所需濃度CaCl2(2.5mol/L)乙醇未曾打開過的純乙醇一瓶。乙醇有吸濕性，在空氣中會吸收水分。在
貼壁/懸浮細胞瞬時轉染RFect質粒DNA轉染操作步驟和注意..
本文以RFect Plasmid DNA Transfection Reagent（RFect質粒DNA轉染試劑盒），作為攜帶質粒穿膜的載體物質，具體介紹DNA轉染方法。圖. 用本產品4ul轉染1ug pEGFP-C2質粒到293T細胞后，綠色熒光蛋白的表達情況。貼壁/懸浮細胞瞬時轉染-RFect質
基因轉染技術的DNA的準備介紹
用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質，無RNA和其它化學物質的污染，OD260/280比值應在1.8以上。DNA的質量和純度能影響某些細胞系的轉染效率，可以通過CsCl梯度法或標準柱層析法進行純化。
癌基因轉化細胞：基因組DNA轉染法
實驗概要?癌基因轉化細胞實驗步驟1．提取基因DNA（含癌基因）。2．DNA準備：取供體DNA50～100微克，加3M NaCl或醋酸鈉使最終濃度至0.3M混勻。3．再加2倍體積無水乙醇，3000轉/分離心10分鐘，去上清。4．加入轉染緩沖液，待DNA充分融解后，再加入2.5M CaCl2，令最終濃度
基因轉染(磷酸鈣DNA共沉淀法)
實驗材料?細胞樣品試劑、試劑盒?HBSCaCl2TEG418(新霉素G418)液G418選擇培養基儀器、耗材?培養瓶
基因轉染(磷酸鈣DNA共沉淀法)
基因轉染技術可以應用于：基因組功能研究（基因表達調控，基因功能，信號轉導和藥物篩選研究）和基因治療研究。實驗方法原理核酸以磷酸鈣-DNA 共沉淀物的形式出現時，可使DNA 附在細胞表面，利于細胞吞入攝取，或通過細胞膜脂相收縮時裂開的空隙進入細胞內，進入細胞的DNA 僅有1%～5%可以進入細胞核中，其
基因轉染(磷酸鈣DNA共沉淀法)
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 核酸以磷酸鈣-DNA 共沉淀物的形式出現時，可使DNA 附在細胞表面，利于細胞吞入攝取，或通過細胞膜脂相收縮時裂開的空隙進入細胞內，進入細胞的DNA 僅有1%～5%可以進入細胞核中，其中僅有不到1%的DNA 可以與細胞D
磷酸鈣介導的質粒－DNA－轉染真核細胞實驗
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞試劑、試劑盒 CaCl2氯喹Giemsa 染液甘油HEPES 鹽緩沖液甲醇磷酸鹽緩沖液丁酸鈉TE質粒 DNA細胞生長培養基儀器、耗材 組織培養皿（60 mm) 或 12 孔板實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需濃度。CaCl
磷酸鈣介導的質粒－DNA－轉染真核細胞實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞 試劑、試劑盒 CaCl2 氯喹 Giemsa 染液
磷酸鈣介導的質粒－DNA－轉染真核細胞實驗
本方法中介紹的磷酸鈣介導的質粒 DNA 轉染貼壁細胞是對 Jordan 等建立的方法 (1996) 的改進。Jordan 等大大優化了磷酸鈣介導的中國倉鼠卵巢細胞與人胚腎 293 細胞的轉染方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料指數
轉染
細胞傳代(1) 試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。(2) 棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3) 用Tip頭加入1ml Trypsin液，消化1分鐘（37。C，5%CO2 )。用手輕拍
轉染和轉染效率測定步驟
LIPOFECTAMINE 2000轉染試劑轉染步驟此實驗步驟設計用來進行24孔板貼壁細胞的瞬時或穩定轉染，其為設計用來在生長培養基中直接加入復合物。1. 轉染前一天，胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板，使其在轉染日密度為90%。細胞鋪板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養基中。2. 對于每孔細
細胞轉染脂質體轉染法
陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內，形成DNA脂復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內吞進入細胞。脂質體轉染適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前實驗室最方便的轉染方法之一，其轉染率較高，優于磷酸鈣法。由于脂質體對細胞有一定的毒性
細胞轉染電穿孔轉染法
電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內，這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質體轉染效率很低或幾乎無法轉入時建議用電穿孔法轉染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70% 的細胞。現在針對細胞死亡開發出了一種電轉保護劑，可以大大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉染效率
xCELLigence系統實時監測低毒性XtremeGENE－DNA轉染實驗（一）
前言?X-tremeGENE DNA Transfection Reagent是一種非脂質體、多組分轉染試劑，已被證明可有效轉染多種細胞。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP在有無血清條件下均可進行轉染，且細胞毒性低，轉染后無需更換培養基。?降低轉染試劑本身的脫靶效應是非常重要的