異源表達經驗談（2）
2. 轉化子、表達子的篩選轉化子的篩選，由于許多質粒是穿梭質粒，因此大多具有E.coli中的抗性篩選標記，篩選起來是很方便的（當然，我不清楚細胞方面的篩選，一般使用病毒載體吧，希望高手們介紹一下）。但是轉化成功的并不意味著能夠成功表達目的蛋白了，因此還需要“表達子”的篩選，尤其是整合入基因組的片斷（E.coli一般是游離質粒表達，好像不用再篩選了，有就有，沒有就沒有了）。我做的是畢赤酵母(GS115,pPIC9k)，在篩選過程中遇到了不小的問題，一般如果目的蛋白有些容易檢測的特殊活性（比如抑菌活性），則篩選起來是比較容易的。但是如果沒有，由于酵母是整合入基因組表達的，就不太好說了，我用原位點雜交的方法篩選過，效果不好，但篩選量倒挺大；還有就是5ml小量發酵篩選，工作量就比較大了，而且篩了400-500個也沒有。還有就是發現不同的篩選方法獲得的陽性菌株好像不是很平行，將上述篩到的菌株放大到100ml時就沒有了。請教師兄，他說有可能......閱讀全文
異源表達經驗談（2）
2. 轉化子、表達子的篩選轉化子的篩選，由于許多質粒是穿梭質粒，因此大多具有E.coli中的抗性篩選標記，篩選起來是很方便的（當然，我不清楚細胞方面的篩選，一般使用病毒載體吧，希望高手們介紹一下）。但是轉化成功的并不意味著能夠成功表達目的蛋白了，因此還需要“表達子”的篩選，尤其是整合入基因組的片斷（
異源表達經驗談（3）
4. 菌種的保存、退化一般來說是加甘油20%左右，-70保存；或制成干粉保存。但是在做甲醇酵母時發現了個問題，就是重組工程菌的退化現象比較嚴重，一般都是學生做得好好的，但是畢業以后下面的師弟一接手，蛋白就不表達了，或表達量非常的低。連續好幾個師兄的結果都是如此，很是奇怪。我猜測可能是由于整合入基因組
異源表達經驗談（1）
異源蛋白的表達是個很復雜的問題，有許許多多的影響因素，而且由于蛋白本身千差萬別，很難有一個很完善或很標準的流程方法。另外，表達的宿主也是多種多樣，目前比較常用的包括E.coli，酵母（以甲醇酵母居多），昆蟲細胞，哺乳動物細胞等，各自有著其本身的特點，優缺點各異。1. 宿主的選擇。表達宿主雖眾多，但比
異源蛋白表達的基本介紹
隨著人類基因組計劃的完成，蛋白表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。越來越多的基因被發現，其中多數基因功能不明，利用蛋白表達系統表達目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。根據不同的表達要求，如表達量高低、目標蛋白的活性和表達產物的純化方法，可選用適當的表達系統及相應的表達策略。
異源蛋白表達的處理和修飾
真核mRNA在離開細胞核進而在胞漿的核糖體上被翻譯前需要特異的處理和修飾。這些過程包括去除內含子、5'端甲基化帽子形成和3'端加poly-A。內含子去除需要5'剪切位點、G75/G100U100A65AG65U保守序列、3'剪切位點、富含密啶NC66A100G10
關于異源蛋白表達的分類介紹
蛋白表達是現代工業、醫療和基礎研究領域的重要組成部分，也是當前生物技術的難點和熱點，重組蛋白表達的系統主要分為： 1、原核蛋白表達系統 以大腸桿菌表達系統為代表，具有遺傳背景清楚、成本低、表達量高和表達產物分離純化相對簡單等優點，缺點主要是蛋白質翻譯后缺乏加工機制，如二硫鍵的形成、蛋白糖基化
酵母表達外源蛋白（foreign－protein）（2）
如果是用自己配置的培養基，如玉米浸提液、麥芽浸提液、麥麩浸提液等等，可以不用換液，采取添料來維持酵母對培養基的營養需要。用無機鹽進行大規模發酵，更省錢。大規模發酵時，甲醇的流加速度增加不要太快。另外使用純氧并不昂貴，在武漢買個鋼瓶600元左右，一瓶純氧20元。一個批次100h左右估計3－4 瓶氧氣。
密碼子的應用提高基因的異源表達
可通過分析密碼子使用模式，預測目的基因的最佳宿主；或者應用基因工程手段，為目的基因表達提供最優的密碼子使用模式。3種不同的方式，目的都是利用密碼子偏愛性來提高異源基因的表達。
異源蛋白表達的密碼子偏愛性介紹
原核細胞表達真核基因的cDNA時，會涉及到密碼子的偏愛性，真核細胞在表達原核來源的基因、真核基因的cDNA拷貝或其他無內含子的基因時可能表現很多特異問題。富含AT的基因在很多真核細胞中表達時會遭遇很劇烈的障礙。主要的真核信號序列如 加poly-A的位點、酵母轉錄終止位點和真核mRNA去穩定序列都
簡述密碼子提高基因的異源表達的作用
可通過分析密碼子使用模式，預測目的基因的最佳宿主；或者應用基因工程手段，為目的基因表達提供最優的密碼子使用模式。3種不同的方式，目的都是利用密碼子偏愛性來提高異源基因的表達。
異源異倍體的概念
中文名稱異源異倍體英文名稱alloheteroploid定 義染色體來自不同染色體組的異倍體。應用學科遺傳學（一級學科），細胞遺傳學（二級學科）
異源異倍性的概念
中文名稱異源異倍性英文名稱alloheteroploidy定 義由非同源染色體形成的異倍性。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞遺傳（二級學科）
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達2
2.包涵體的分離與純化細胞破碎時提取細胞內產物的關鍵。對于細菌的裂解常用的有酶溶法、超聲破碎法、化學滲透法、玻璃珠研磨等。包涵體可通過超聲波、勻漿等常規的方法是菌體破碎后，離心就可得到。密度梯度離心后可得到高純度的包涵體。包涵體一般不溶于水，為了獲得可溶性的蛋白質可加入強蛋白質變性劑后使其溶解。一般
異源基因的概念
中文名稱異源基因英文名稱heterologous gene定 義來自不同物種的、在進化過程中不源于共同祖先的基因。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
原核生物大腸桿菌異源表達一定要切除信號肽嗎
一般要進行切除。假如你將那個來自原核的酶（包括信號肽序列）插入表達載體后，表達產物的信號肽也很難將酶分泌出來，這里涉及到的問題很多，首先能否可溶性表達，其次信號肽能否在宿主菌中能起作用（不同種類的細菌，信號肽有差異），信號肽能否被信號肽酶切除，很多情況下信號肽即使能起作用，一般也只能將表達產物分泌至
外源基因的誘導表達
1．目的了解外源基因在原核細胞中表達的特點和方法。2．原理外源基因克隆在含有lac啟動子的表達系統中。先讓宿主菌生長，lac I產生的阻遏蛋白與lac操縱基因結合抑制下游的外源基因轉錄。向培養基中加入誘導物IPTG（異丙基硫代-b-D-半乳糖），解除抑制使外源基因大量表達。表達的蛋白可經SDS-
異源翻譯系統的定義
中文名稱異源翻譯系統英文名稱heterologous translational system定 義將基因或信使核糖核酸(mRNA)轉移到非自身的宿主表達系統中進行蛋白質的翻譯合成，該宿主表達系統即為異源翻譯系統。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
什么是異源誘導者？
能誘導原腸胚外胚層形成一定的結構，并具有區域性誘導效應的組織稱為異源誘導者（heterogeneous inductor）。它們雖不是組織者，卻具有與組織者相當的形態發生效應，而且無種的特異性。它們包括許多成體和幼體的多種組織，廣泛存在于動物界，甚至某些有機和無機化合物。最初發現成體組織對兩棲類原腸
異源倍性的概念
中文名稱異源倍性英文名稱alloploidy定 義由非同源染色體形成的倍性變化。應用學科遺傳學（一級學科），細胞遺傳學（二級學科）
細胞化學詞匯異源基因
中文名稱：異源基因英文名稱：heterologous gene定 義：來自不同物種的、在進化過程中不源于共同祖先的基因。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
異源倍性的概念
中文名稱異源倍性英文名稱alloploidy定 義由非同源染色體形成的倍性變化。應用學科遺傳學（一級學科），細胞遺傳學（二級學科）
異源倍性的概念
中文名稱異源倍性英文名稱alloploidy定 義由非同源染色體形成的倍性變化。應用學科遺傳學（一級學科），細胞遺傳學（二級學科）
異源抗血清的定義
中文名稱異源抗血清英文名稱heterologous antiserum定 義來源于異種動物(如馬對人)，含特異性抗體的血清。應用學科免疫學（一級學科），免疫病理、臨床免疫（二級學科），感染免疫（三級學科）
異源抗血清的定義
中文名稱異源抗血清英文名稱heterologous antiserum定 義來源于異種動物(如馬對人)，含特異性抗體的血清。應用學科免疫學（一級學科），免疫病理、臨床免疫（二級學科），感染免疫（三級學科）
異源多倍性的概念
異源多倍性(allopolyploidy)指不同種的染色體組組合在一起而產生的染色體倍數的變異（H．Kihara，T．Ono，1926）。根據組成核型的染色體組的數目又可分別稱為異源三倍體、異源四倍體、異源…倍體等（allotriploid，allote- traploid，sllo…ploid），
異源雙鏈的概念
中文名稱異源雙鏈英文名稱heteroduplex定 義(1)兩種不同來源的單鏈DNA分子雜交而成的DNA雙鏈，是堿基沒有完全互補的DNA雙鏈。(2)DNA與RNA雜交形成的雙鏈。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
異源多元單倍體的概念
中文名稱異源多元單倍體英文名稱allopolyhaploid定 義細胞染色體來自異源多倍體的不同染色體組的一類多元單倍體。應用學科遺傳學（一級學科），細胞遺傳學（二級學科）
異源雙鏈作圖的定義
中文名稱異源雙鏈作圖英文名稱heteroduplex mapping定 義不同來源的雙鏈DNA分子的單鏈間進行雜交，繪制出同源區和非同源區的遺傳圖。應用學科遺傳學（一級學科），基因組學（二級學科）
異源載體疫苗的功能特點
中文名稱異源載體疫苗英文名稱heterologous carrier vaccine定 義一種新型疫苗。即將疫苗附著在大分子載體上，以增強其免疫原性。所用載體一般是具有免疫原性的大分子蛋白質或減毒的活病毒、細菌。應用學科免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫預防（三級學科）
異源抗血清的功能介紹
中文名稱異源抗血清英文名稱heterologous antiserum定 義來源于異種動物(如馬對人)，含特異性抗體的血清。應用學科免疫學（一級學科），免疫病理、臨床免疫（二級學科），感染免疫（三級學科）