westernblotting的一些個人經驗
個人經驗,僅供參考:1.用脫脂奶粉封閉的效果不一定比用BSA差,不過我們試過幾種奶粉,有一些奶粉不太適合.推薦使用的奶粉:雀巢高鈣奶粉,多力精低脂奶粉.一般國產的奶粉的顆粒比較大,不太容易溶解.2.關于三名治:本人以前做時花很多時間在防止短路上,現在我做的時候根本沒有剪齊,最主要的是趕氣泡,這是關鍵的關鍵,其實轉膜的原理是電流的單向流動,現在的好多公司的轉膜裝置的電極是一個平面,所以不用擔心短路的.(不信的可以試試!!)3.關于轉膜時的溫度:轉膜時的溫度比較重要,最好保持在10度以下,可以用冰浴(Pharmacia的轉膜裝置),也可以在轉膜液中放入合適的事先準備的冰袋(-70度>3小時)(Bio-Rad),這樣既可以降溫又可以節約Buffer.4.關于轉膜電流和時間:一般轉膜的電流在200mA-400mA之間時間為1小時,大片段的>50KD的可以選用350mA,小片段的可以用250mA,不過本人覺得上述電流均能很好的......閱讀全文
Western雜交
實驗概要本實驗介紹了Western雜交的基本流程。主要試劑液氮，提取緩沖液(1 x PBS，10ug/mL ?Leupeptin，1 mM PMSF，5 mMBenzamidine. 2mM EDTA)，轉移緩沖液(39mM Glycine，48mM ?Tris，0.037% SDS，20%甲醇)，
Western雜交
實驗概要本實驗介紹了Western雜交的基本流程。主要試劑液氮，提取緩沖液(1 x PBS，10ug/mL ?Leupeptin，1 mM PMSF，5 mMBenzamidine. 2mM EDTA)，轉移緩沖液(39mM Glycine，48mM ?Tris，0.037% SDS，20%甲醇)，
Western－Blotting
實驗概要Western Blot (AP)主要試劑1. Membrane Blocking buffer:5% Milk ? 0.05% of Tween 20 PBS2. antibody dilution buffer: PBS 0.05% of Tween20 1.0% Milk(or BSA
Western－雜交
Western?雜交（主要內容如下）Preparing of Protein LysatesWestern BlottingFar Western BlottingSemi Dry BlottingStripping MembranesTrouble Shooting and OthersPrepa
Western雜交
Western雜交l??????組織印跡的Western雜交在硝酸纖維素膜上制備組織印跡1．在塑料板上放置兩層Whatman 1號濾紙，在濾紙上方放上一張普通紙，然后鋪上一層硝酸纖維素膜。2．用雙面刀片從植物組織如大豆的莖上切取一塊切片（厚度約為1mm）。如果組織表面是濕的，則在Kimwipes紙上
Western－Blotting
1. Optional: "Renature" gel- this is thought to permit some refolding of proteins and may be important in finding epitope recognition of monoclonal an
Silver:－Lysate－for－Western
Grow cellsHarvestSpin downWash with PBSSpin down enough cells to collect a 50-100 μL cell pellet in a FastPrep tubePrepare lysis buffer (beforehand) a
Western實驗步驟
一、樣品制備?對于Western Blotting實驗而言，樣品處理是關鍵步驟之一，獲得的蛋白樣品必須均質、可溶，并解離成單個多肽亞基，且盡量減少相互間的聚集，使其最終僅依賴本身的分子量大小進行分離。當目標蛋白的含量很低時，需要選取目標蛋白含量較高的組織或細胞器（如核抽提物），或者通過免疫沉淀等方式
Western－Blotting－Protocol
實驗概要The western blot ?(sometimes called the protein immunoblot) is a widely used analytical ?technique used to detect specific proteins in the given s
western－blot原理
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，經過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體上，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢
Western－Blot－Protocol
一、提取抗原蛋白將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl 100%酒精充分混勻，靜置5min(RT), 2000×g , 4℃離心5min,?吸取上清至新管中,?加入750μl異丙醇,?混勻,?靜置10min(RT), 12000×g, 4℃離心10min,?棄上清,?加入1ml 0.3mol/L
Western印跡法
這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體，并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。Western使用的探針是抗體，它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行鑒別和鑒定。儀器：高壓鍋、玻璃勻漿
Western－bloting－技術
一、實驗目的與原理Western bloting技術是用來檢測蛋白表達的特定的靈敏的方法，由蛋白質的SDS-PAGE、電轉及雜交幾部分組成。雜交技術主要有NC膜封閉，靶蛋白與第一抗體的反應，結合靶蛋白的一抗和二抗的反應，顯色等組成。將凝膠上的蛋白質轉移到NC膜上，用其他蛋白作為封閉液，將膜上余下的其
Western－Blot－(AP)
主要試劑1. Membrane Blocking buffer:5% Milk ? 0.05% of Tween 20 PBS2. antibody dilution buffer: PBS 0.05% of Tween20 1.0% Milk(or BSA)?3. washing buffer:?
Smolke:Protocols/Western
OverviewBlotting for large V5-tagged proteins in?S. cerevisiaeMaterialsY-PER (Pierce)Halt EDTA-free Protease Inhibitor (Pierce)NuPAGE Novex Bis-Tris 4
Immunoblotting－(Western－Blotting)
實驗概要We provide a protocol for SDS-PAGE, Protein Blotting, Immuno-Detection.主要試劑1.?0.3 M TRIZMA? base (Product No. T1503), 20% methanol.2.?0.025 M TRIZ
Stripping－Western－Blots
1) After ECL development, wash membrane once for 10min with PBST.2) Incubate the membrane in stripping buffer (see below) in a heat-sealed plastic bag
western－是什么
向西的；自西的；西洋的；北美及南美的；西部的人；西歐人；西部片；西方的
Western－Blotting－Protocols
back to topProtocolStandard vs. Rapid Immunodetection ProceduresThere are two types of protocols for immunodetection: Standard and rapid.Standard vs.
Western－bloting－綜述
摘要：本文主要是針對Western bloting的原理及操作進行了簡單的闡述，Western印跡法是利用抗原抗體的免疫反應，先將蛋白通過SDS-PAGE電泳分離開來，然后再利用電場力的作用將膠上的蛋白轉移到固相載體（NC膜）上，然后再加抗體形成抗原抗體復合物，利用發光或顯色原理將結果顯示到膜或底片
Western－Blot詳解
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
Western免疫印跡（Western－Blot）實驗原理和主要試劑
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。實驗原理與Southern或 Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電
Stripping－for－reprobing－western－blots
實驗概要Stripping ?is the term used to describe the removal of primary and secondary ?antibodies from a western blot membrane. Stripping is useful when on
Western－Blot實驗（一）
大家都知道Western Blot時間周期較長，大致可以分為忙碌的第一天，和心痛的第二天，像極了愛情。人生若只如初見，何事秋風悲畫扇。經歷轉瞬即逝的新手曙光后，便進入漫長的黑夜。第一天，從最一步的配膠，到最后一步的孵育膜都極細心像極了愛情的萌芽期，需要精心的呵護。第二天經過繁瑣的洗膜，孵二抗，洗膜，
Western－Blot詳解（八）
DDDD.顯色目的條帶又細又淺，靶蛋白是27KD的bcl-xl和67KD 的c-myc，應該是高表達。每個涌道上50-70μg蛋白，開始用半干轉移，后來用濕轉14v，16h，用PVDF膜轉移。膠轉移后染色檢測，發現小分子量的基本轉移走了，可是為什么條帶老是不粗不濃呢?解答：可能跟你的一抗有關
Typical－Western－Tra...
實驗概要Peprotech provides a typical western transfer and development protocol.實驗原理Western Transfer, also known as Western Blotting, is a rapid immunobl
Western轉膜步驟
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。I. 所需材料：?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）?電泳后的迷你膠
Western－Blot詳解－原理
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。?原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢
Stripping－for－reprobing－western－blots
實驗概要Stripping ?is the term used to describe the removal of primary and secondary ?antibodies from a western blot membrane. Stripping is useful when on
Western免疫印跡
?Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理????與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝