結核分枝桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立與應用
【摘要】目的 建立結核分枝桿菌的熒光定量PCR檢測方法,探討熒光 PCR檢測痰標本中結核分枝桿菌的應用價值。方法 根據結核分枝桿菌基因保守序列設計引物和探針，并構建標準品。對102例培養涂陽的結核痰液標本和45例非結核感染者的痰標本，應用熒光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法檢測結核分枝桿菌。 結果 熒光定量 PCR、抗酸染色法檢測結核分枝桿菌的特異性分別為100%、30%。結論 熒光定量PCR是一種快速、敏感性高、特異性強的結核分枝桿菌輔助診斷方法,具有重要的應用價值。【關鍵詞】 結核;分枝桿菌;抗酸染色;熒光定量PCR Establishment and application of fluorescence quantitative PCR for detection of Mycobacterium tuberculosis. ZHU Yu-lan, WANG Dian-peng, GAO Zha......閱讀全文
結核分枝桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立與應用
【摘要】? 目的 建立結核分枝桿菌的熒光定量PCR檢測方法，探討熒光 PCR檢測痰標本中結核分枝桿菌的應用價值。方法 根據結核分枝桿菌基因保守序列設計引物和探針，并構建標準品。對102例培養涂陽的結核痰液標本和45例非結核感染者的痰標本，應用熒光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法檢測結核分枝桿菌。結果
結核分枝桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立與應用
【摘要】目的 建立結核分枝桿菌的熒光定量PCR檢測方法,探討熒光 PCR檢測痰標本中結核分枝桿菌的應用價值。方法 根據結核分枝桿菌基因保守序列設計引物和探針，并構建標準品。對102例培養涂陽的結核痰液標本和45例非結核感染者的痰標本，應用熒光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法檢測結核分枝桿菌。 結果 熒
結核分枝桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立與應用
結核病是嚴重危及全球的公共衛生問題之一，自1985年以來結核病疫情在全球范圍內急劇上升，據世界衛生組織報道，目前全球有近1/3的人感染了結核桿菌，即20億人口感染了結核桿菌，其中活動性肺結核病人約2 000萬，每年新增結核病人約800～1 000萬，每年約有300萬人死于結核病［1～3］。結核病已成
結核分枝桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立與應用（一）
?????? 【摘要】? 目的 建立結核分枝桿菌的熒光定量PCR檢測方法，探討熒光 PCR檢測痰標本中結核分枝桿菌的應用價值。方法 根據結核分枝桿菌基因保守序列設計引物和探針，并構建標準品。對102例培養涂陽的結核痰液標本和45例非結核感染者的痰標本，應用熒光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法檢
結核分枝桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立與應用（二）
?????? 1.5? 標準品的制備?????? 標準品包括：陽性定量參考品、陰性質控品、臨界陽性質控品和強陽性質控品。以結核桿菌陽性DNA樣品2μl做為PCR反應的模板，加入PCR反應液23μl，PCR反應液中含有10x PCR Buffer 3μl、25mmol/L MgCl2 1.
結核分枝桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立與應用（三）
?????? 2.2? 瓊脂糖凝膠電泳結果?????? 痰液DNA進行驗證實驗，對所獲取的PCR產物進行測序，序列分析顯示該產物為TB核酸序列。?????? 2.3? 特異性實驗?????? 葡萄球菌等呼吸道易感菌的DNA提取物為對照模板進行Taq-man探針進行實時PCR未檢測到無熒光信號。???
熒光定量PCR檢測方法
所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。 檢測方法 1.SYBRGreenⅠ法： 在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信
實時熒光定量PCR檢測方法
聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。目前，PCR成為分子生物學研究必不可少的一部分。實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技術，是指在PCR反應
熒光定量PCR技術的熒光定量PCR的方法
接下來我們就來了解一下熒光定量的主要方法，我們如何選擇合適的方法？熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種：熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應的可分為特異類和非特異類兩類，特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物；而非特異性檢測方法是在在PCR反
常見熒光定量PCR檢測方法比較
定量PCR：以參照物為標準，對PCR終產物進行分析或對PCR過程進行監測，從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數，稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴增的指數期進行的。 常見熒光定量PCR方法比較 SYBR Green I 檢測模式 SYBR
常見熒光定量PCR檢測方法比較
定量PCR：以參照物為標準，對PCR終產物進行分析或對PCR過程進行監測，從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數，稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴增的指數期進行的。 常見熒光定量PCR方法比較 SYBR Green I 檢測模式 SYBR Green I 是一種能與雙鏈 D
實時熒光定量－PCR技術原理與應用
聚合酶鏈式反應 ( PCR) 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 。在擴增反應結束之后，我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，也可以通過 放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析 。無論定性還是定量分析，分析的都是 PCR 終產物。但是在許多情況下，我們所感興趣的是未經 PCR
實時熒光定量－PCR技術原理與應用
聚合酶鏈式反應 ( PCR) 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 。在擴增反應結束之后，我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，也可以通過 放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析 。無論定性還是定量分析，分析的都是 PCR 終產物。但是在許多情況下，我們所感興趣的是未經
實時熒光定量PCR檢測及臨床應用
實時熒光定量PCR技術的應用定量PCR是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Appliedbiosystems公司推出，它是一種在PCR反應體系中加入熒光基團，利用對熒光信號積累的實時檢測來監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的
外周血PSMA－mRNA－熒光定量檢測方法的建立
作者：柳建磊,秦進????作者單位：(成都鐵路中心醫院,四川 成都 610081)【摘要】? 目的：建立一種利用MGB-Taqman探針的快速、靈敏、特異、準確定量檢測外周血PSMA mRNA的方法。方法：選擇PSMA mRNA的保守區域，設計合成引物和MGB-Taqman探針，構建質粒標準品pMD
實時熒光定量PCR檢測系統的應用范圍
PCR檢測靈敏度高,檢測線性范圍寬,檢測精度和重復性好等突出優勢,因此被公認為世界用于臨床及科研的最先進核酸分子診斷技術,被美國FDA承認并推崇。檢測項目包括：食物等病原菌以及疾病病毒等病原體如：乙肝病毒HBV DNA,丙肝病毒HCV RNA,艾滋病病毒HⅣ RNA,沙眼衣原體CT,淋病雙球菌N
熒光定量PCR技術的應用
? ? 1、絕對定量分析? ? 這是熒光定量PCR技術的直接應用，可用于檢測病毒及細菌的濃度！? ??? ? 2、相對定量分析及實驗方案? ? 基因表達(gene expression)是指細胞在生命過程中,把儲存在DNA順序中遺傳信息經過轉錄和翻譯,轉變成具有生物活性的蛋白質分子. 遺傳物質DNA
熒光定量PCR儀的應用
熒光定量PCR儀可用于醫療，新藥研發，診斷檢驗試劑研發等領域。?在醫療方面，具體可用于病原體檢測；產前診斷以防止各類遺傳性疾病的發生；藥物療效考核，例如對乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示：病毒量與某些藥物的療效關系；腫瘤基因檢測。?在新藥開發研究中，實時熒光定量PCR
熒光定量PCR儀的應用
?熒光定量PCR儀可用于醫療，新藥研發，診斷檢驗試劑研發等領域。?在醫療方面，具體可用于病原體檢測；產前診斷以防止各類遺傳性疾病的發生；藥物療效考核，例如對乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示：病毒量與某些藥物的療效關系；腫瘤基因檢測。?在新藥開發研究中，實時熒光定量PC
熒光定量PCR的相關應用
臨床疾病診斷 各型肝炎、艾滋病、禽流感、結核、性病等傳染病診斷和療效評價；地中海貧血、血友病、性別發育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優生優育檢測；腫瘤標志物及瘤基因檢測實現腫瘤病診斷；遺傳基因檢測實現遺傳病診斷。 動物疾病檢測 禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放
熒光定量PCR的應用范圍
1.核酸定量分析。 對傳染性疾病進行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 轉基因動植物基因拷貝數的檢測，RNAi 基因失活率的檢測等。?2.基因表達差異分析。 比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異 ( 如藥物處理、物理處理、化學處理等 ) ，特定基因在
3種方法檢測痰結核分枝桿菌的比較
?????? 目前從痰中檢測結核分枝桿菌仍是診斷肺結核的重要方法，痰結核分枝桿菌檢查對發現傳染源、確定治療方案、考核療效、評價防治效果等具有重要意義。本文對558 例肺結核患者及疑似患者痰標本同時進行涂片抗酸染色法、快速結核菌培養法和熒光定量PCR技術檢測結核分枝桿菌，并對3種方法的陽性
實時熒光定量－PCR技術原理與應用（一）
實時熒光定量 PCR技術原理與應用聚合酶鏈式反應 ( PCR) 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 。在擴增反應結束之后，我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，也可以通過 放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析 。無論定性還是定量分析，分析的都是 PCR 終產物。但是
實時熒光定量－PCR技術原理與應用（二）
SYBR Green I 在核酸的實時檢測方面有很多優點，由于它與所有的雙鏈 DNA 相結合，不必因為模板不同而特別定制，因此設計的程序通用性好，且價格相對較低。利用熒光染料可以指示雙鏈 DNA 熔點的性質，通過熔點曲線分析可以識別擴增產物和引物二聚體，因而可以、區分非特異擴增，進一步地還可
熒光定量PCR引物的設計原則與方法
實時熒光定量PCR是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環后產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。? ? 實時熒光定量PCR是實驗室最常用的實驗。研究基因在mRNA表達水平,以及驗證基因敲除后下游靶基因變化情況等等。對于新
熒光定量PCR檢測儀應用領域
□ 基礎科學研究 □ 病原體檢測 □ 肉制品摻假 □ 轉基因檢測 □ 食品安全檢測 □ 藥物開發及合理用藥 □ 基因表達 □ 水體監測
熒光定量PCR技術的檢測原理和方法
1.SYBRGreenⅠ法：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖PCR產物熔解曲線圖（單一峰圖表明P
熒光定量PCR：簡介，原理，應用
熒光定量PCR簡介 熒光定量PCR檢測技術誕生至今已10多年的時間，而其應用一直都沒廣泛展開，究其原因，無外乎受制于相關儀器、試劑和技術的發展。近期，尤其是08年以來，儀器和試劑是遍地開花，這也使科研人員均躍躍欲試，都想借此技術使自己的研究能突飛猛進，發展勢頭通過查找每年所發表的文章數可一目了然。據
熒光定量PCR應用——腫瘤篇
?? 腫瘤是是機體在各種致癌因素作用下，局部組織細胞在基因水平上失去對其生長的正常調控，從而導致其克隆性異常增生而形成的異常病變。學界將其分為良性和惡性兩大類。腫瘤作為全球疾病致死的重要元兇之一，如果發現和治療不及時，有可能導致人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發熱及臟器功能受損等，其后果極為嚴重。?
熒光定量PCR應用——病毒篇
諾如病毒諾如病毒（Norovirus，NVs）屬于杯狀病毒科諾如病毒屬，是引起非細菌性急性胃腸炎的主要病原體，世界50%以上的胃腸炎暴發均由它引起，可在醫院、學校、餐館等人群密集地爆發急性胃腸炎。根據病毒RNA 聚合酶和衣殼蛋白核苷酸序列的差異，諾如病毒分為5個基因型，其中GI、GII 型諾如病