流式細胞儀實驗方法1
流式細胞儀實驗方法 一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA 四、血小板1．活化2．活化檢測3．網織血小板 五、紅細胞1．網織紅細胞2．PNH3．胎兒紅細胞 六、腫瘤學1．DNA 細胞周期2．蛋白3．多藥耐藥4．微小殘留白血病 *部分 標本處理 一、流式細胞術常規檢測時的樣品制備 （一）直接免疫熒光標記法 取一定量細胞（約1X106細胞／ml），在每一管中分別加入50μl的HAB，并充分混勻，于室溫中靜置1分鐘以上（）,再直接加入連接有......閱讀全文
流式細胞儀實驗方法1
流式細胞儀實驗方法?一、?實驗準備1．?? 標本制備：2．?? zui小化非特異性結合：?二、凋亡1．凋亡的檢測方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法?三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA?四、血小板1．活化2．活化檢測3．網織血小板?五、紅細胞1．網織紅細胞2．
流式細胞儀實驗方法
一、?實驗準備1．?? 標本制備：2．?? zui小化非特異性結合：?二、凋亡1．凋亡的檢測方法：網站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法?三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA?四、血小板1．活化2．活化檢測3．網織血小板?五、紅細胞1．網織紅細胞2．PNH3．胎兒紅
流式細胞儀實驗方法（一）
一、實驗準備1． ? 標本制備：2． ? 最小化非特異性結合：二、凋亡1．凋亡的檢測方法：網站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA四、血小板1．活化2．活化檢測3．網織血小板五、紅細胞1．網織紅細胞2．PNH3．胎兒紅細胞六、腫瘤學
流式細胞儀實驗方法（二）
第二部分 細胞因子 細胞內細胞因子的流式細胞儀檢測 一、簡介隨著研究的進展，僅僅對細胞進行定量和活性的檢測已不能滿足需要。在單細胞水平研究細胞因子的表達能力對研究細胞因子在疾病中的作用越來越顯的重要無比。目前檢測單個細胞特定細胞因子的表達手段包括：ELIspot、原位雜交、免疫細胞化學、限制
流式細胞儀實驗方法（三）
四、所需試劑1、細胞表面染色的熒光標記的單抗試劑依據實驗需要選擇特殊表面標志CD45圈定所有淋巴細胞CD3 圈定T淋巴細胞CD4 圈定T輔助淋巴細胞亞群CD8 圈定T抑制淋巴細胞亞群CD19/或CD20圈定B淋巴細胞CD56圈定NK淋巴細胞CD14圈定單核細胞2、熒光標記的細胞因子抗體：R&D提供F
流式細胞儀實驗方法2
六、流式檢測細胞染色基本過程（以全血為例）1、???收獲細胞：肝素鈉抗凝的靜脈血，按1：1與培養基混勻，加刺激劑，同時加蛋白轉運抑制劑（參照說明書）， 混勻后，37℃，5%二氧化碳培養4-6小時2、???阻斷Fc受體：用于消除非特異性的結合染色①??????在小鼠，可使用純化的FcII/III受體的
流式細胞儀標本制備1
流式細胞儀(FCM)是八十年代集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術發展起來的一種先進儀器，已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷，對淋巴細胞群和亞群進行精確分類，還能分離純化某一群或亞群細
實驗動物的麻醉方法1
麻醉（anesthesia）的基本任務是消除實驗過程中所至的疼痛和不適感覺，保障實驗動物的安全，使動物在實驗中服從操作，確保實驗順利進行。一、常用的麻醉藥（一）常用局部麻醉劑：普魯卡因，此藥毒性小，見效快，常用于局部浸潤麻醉，用時配成0.5％～1％；利多卡因，此藥見效快，組織穿透性好，常用1％～2％
免疫熒光實驗方法1
免疫熒光技術是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。它是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質和定位，以及利用定量技術
流式細胞儀實驗安全
生物學操作技術最重要的就是安全問題，在操作流程中有諸多環節存在各種安全隱患，需要謹慎操作。 （1）電安全問題：偏振板，激光供電等都是高電壓，需要特別小心。儀器內部只能由廠家人員及相關工作人員才可操作，實驗人員不得冒險操作。 （2）激光安全問題：流式細胞術的激光有相應的cover保護，不得打開
流式細胞儀檢測實驗_用次GoZG1－DNA峰值計算細胞凋亡
實驗材料要分析的細胞在FACS緩沖液中試劑、試劑盒FACS緩沖液冰冷的100%乙醇（如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇）1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙錠（PI)的PBS儀器、耗材流式細胞儀實驗步驟1)凋亡刺激后，從培養液中沉淀所要分析的細胞，同樣沉淀一未處理的對照培養液。重
流式細胞儀檢測實驗用次GoZG1－DNA峰值計算細胞凋亡
實驗材料要分析的細胞在FACS緩沖液中試劑、試劑盒FACS緩沖液冰冷的100%乙醇（如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇）1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙錠（PI)的PBS儀器、耗材流式細胞儀實驗步驟1)凋亡刺激后，從培養液中沉淀所要分析的細胞，同樣沉淀一未處理的對照培養液。重
沉淀反應實驗原理、材料和實驗方法（1）
可溶性抗原（如血清中的蛋白,組織浸出液,細胞裂解液等）與其相應的抗體在溶液中或凝膠中結合,若比例合適,可形成肉眼可見的抗原-抗體復合物,這就是免疫沉淀反應。免疫沉淀反應可以在小玻璃管中或毛細玻璃管及凝膠平板中進行。在用凝膠平板做實驗時,常用瓊脂糖凝膠做介質,有的加電流,使反應更快更靈
沉淀反應實驗原理、材料和實驗方法（1）
可溶性抗原（如血清中的蛋白,組織浸出液,細胞裂解液等）與其相應的抗體在溶液中或凝膠中結合,若比例合適,可形成肉眼可見的抗原-抗體復合物,這就是免疫沉淀反應。免疫沉淀反應可以在小玻璃管中或毛細玻璃管及凝膠平板中進行。在用凝膠平板做實驗時,常用瓊脂糖凝膠做介質,有的加電流,使反應更快更靈敏。一、環狀沉淀
RTPCR實驗方法總結(1)
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。?要求：?1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、
RNA干擾（RNAi）實驗原理與方法（1）
近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（RNAi）。一、R
流式細胞儀檢測技術實驗
實驗方法原理?? ?流式細胞儀的使用一般分為三個步驟。*，是儀器前階段，包括試劑的準備，細胞制備、細胞的熒光染色；第二，是流式細胞儀階段，主要是儀器的操作；第三，是結果分析階段。實驗材料?? ?淋巴細胞外周血的白細胞試劑、試劑盒?? ?FACS緩沖液PBS疊氮鈉溶液儀器緩沖液FACS清潔液FACS洗
流式細胞儀檢測技術實驗
流式細胞儀（flow cytometer）是一種能夠探測和計數以單細胞液體流形式穿過激光束的細胞檢測裝置，由于在檢測中使用的細胞標志示蹤物質為熒光標記物，因此，用來分離、鑒定細胞的流式細胞儀有被稱為熒光激活細胞分類儀，是分離和鑒定細胞群及亞群的一種強而有力的應用工具。流式細胞儀實驗方法原理流式細胞儀
流式細胞儀檢測技術實驗
流式細胞儀檢測技術可應用于：（1）分離和鑒定細胞群及亞群；（2）分析腫瘤細胞的DNA、RNA含量；（3）分析細胞內抗原物質。實驗方法原理流式細胞儀的使用一般分為三個步驟。第一，是儀器前階段，包括試劑的準備，細胞制備、細胞的熒光染色；第二，是流式細胞儀階段，主要是儀器的操作；第三，是結果分析階段。實驗
流式細胞儀檢測技術實驗
流式細胞儀檢測技術可應用于：（1）分離和鑒定細胞群及亞群；（2）分析腫瘤細胞的DNA、RNA含量；（3）分析細胞內抗原物質。實驗方法原理流式細胞儀的使用一般分為三個步驟。第一，是儀器前階段，包括試劑的準備，細胞制備、細胞的熒光染色；第二，是流式細胞儀階段，主要是儀器的操作；第三，是結果分析階段。實驗
實驗時間_流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以：鑒定細胞凋亡形態；可以準確的進行凋亡細胞的計數；可以進行特異的定性分析和定量分析。實驗原理細胞凋亡時，在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變，這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變最具特征性。通過流式細胞儀檢測這
流式細胞儀分選方法
流式細胞儀96孔微孔板單個細胞分選方法進行優化和應用。通過對液流的調節．獲得較穩定的分選設定值；在96孔微孔板蓋上分選肉眼可見液滴，確定分選液滴在96孔微孔板每孔相對應的蓋上的位置；分選結束后，計數單個細胞存在的細胞孔數；分選細胞培養7d后．記錄單個細胞存在孔數及單克隆形成的數量。結果5個細胞形成的
凝膠遷移（Gel－Shift）實驗操作方法1
1.探針的標記：（1） 如下設置探針標記的反應體系：待標記探針 （1.75pmol/微升） 2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer （10X） 1微升Nuclease-Free Water 5微升[γ-32P]ATP（3,000Ci/mmol at 10mCi/ml）
Southern印跡雜交實驗原理和方法1
實驗原理核酸分子雜交技術是分子生物學領域中最常用的具體方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內切限制酶分析的結果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。但為了進一
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
細胞凋亡：流式細胞儀檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 要分析的細胞在FACS緩沖液中試劑、試劑盒 FACS緩沖液冰冷的100%乙醇（如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇）1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙錠（PI)的PBS儀器、耗材 流式細胞儀實驗步驟 1)凋亡刺激后，從培養液中沉淀所要分析的細胞，同樣沉淀一
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以： 鑒定細胞凋亡形態； 可以準確的進行凋亡細胞的計數； 可以進行特異的定性分析和定量分析。 實驗原理 細胞凋亡時，在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變，這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變最具特征
細胞凋亡：流式細胞儀檢測實驗
用次GoZG1 DNA峰值計算細胞凋亡 用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞 通過TUNEL組織切面中的凋亡細胞的原位雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
實驗方法原理 其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變最具特征性，主要包括以下幾個方面：?1. ?細胞核的改變?由于凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染