免疫細胞電鏡技術
免疫細胞化學技術為在細胞水平上研究免疫反應做出了貢獻，但由于光學分辨率的限制，不可能從細胞超微結構水平觀察和研究免疫反應。因此，Singer于1959年首先提出用電子密度較高的物質鐵蛋白(ferritin)標記抗體的方法，為在細胞超微結構水平研究抗原 抗體反應提供了可能。在此基礎上，相繼發展了雜交抗體技術、鐵蛋白抗鐵蛋白復合物技術、蛋白A-鐵蛋白標記技術、免疫酶技術及膠體金技術等。電子顯微鏡免疫細胞化學技術(以下簡稱免疫電鏡技術技術)區別于免疫細胞化學和常規電鏡技術主要在以下幾方面：一、組織固定與取材在這方面的要求是即要保存良好的細胞超微結構，又要注意保持組織的抗原性。因此，選用固定劑不宜過強。常用的免疫 電鏡固定劑有多聚甲醛—戊二醛混合液和過碘酸-賴氨酸—多聚甲醛液(Periodate—Lysine –Paraformaldehyde簡稱PLP液)。也有采用Bouin氏液、Zamboni氏液或4%多聚甲醛液......閱讀全文
免疫細胞電鏡技術
免疫細胞化學技術為在細胞水平上研究免疫反應做出了貢獻，但由于光學分辨率的限制，不可能從細胞超微結構水平觀察和研究免疫反應。因此，Singer于1959年首先提出用電子密度較高的物質鐵蛋白(ferritin)標記抗體的方法，為在細胞超微結構水平研究抗原?抗體反應提供了可能。在此基礎上，相繼發展了雜交抗
免疫電鏡技術
近年來，免疫學方法與電鏡技術相結合，形成了一種免疫電鏡技術(Immunoelec-tronmicroscopy，IEM)，使抗原定位達到了亞細胞水平。該技術由以下環節組成：(一) 組織準備 用于免疫電鏡檢測的組織多種多樣，所以各自在組織制備時都具有其特點。一般講，組織力新鮮并進行無活動力狀態處理，例
免疫電鏡相關技術實驗——酶標記免疫電鏡技術
實驗方法原理該技術是以酶為抗原—抗體反應的標記物，在不改變抗原抗體的免疫反應特異性，亦不降低酶活性條件下，與相應底物作用后形成不溶性的反應物。在電鏡下形成為電子散射力強的終末產物。用于免疫電鏡標記的酶有辣根過氧化物酶 (HRP)堿性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
免疫電鏡相關技術實驗—病毒顆粒免疫電鏡技術
病毒是極微小的生物體，用電鏡觀察時，由于其變形、損傷或雜質的存在，以及標本中病毒的數量有限，只靠其形態特點較難確切辨認。為了提高辨認的準確性，可應用特異性抗體，使其與病毒結合，在電鏡下可清晰地辨認特異性抗體及其結合的病毒。這種將免疫學檢測方法應用于電鏡檢查的技術就是免疫電鏡技術 (Immunoele
酶免疫電鏡技術
（一）??原理?酶免疫電鏡技術是利用酶的高效率的催化作用對其底物的反應形成不同的電子密度，借助于電子顯微鏡觀察，證明酶的存在，從而對抗原進行定位。（二）材料與試劑1．PBS液? 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。2．DAB溶液? 取5m
掃描免疫電鏡技術
實驗概要本文介紹了掃描免疫電鏡技術的具體操作步驟，掃描免疫電鏡技術可為研究細胞或組織表面的三維結構與抗原組成的關系提供可能性。實驗原理免疫電鏡技術是免疫化學技術與電鏡技術結合的產物，是在超微結構水平研究和觀察抗原、抗體結合定位的一種方法學。它主要分為兩大類：一類是免疫凝集電鏡技術，即采用抗原抗體凝集
掃描免疫電鏡技術
實驗概要本文介紹了掃描免疫電鏡技術的具體操作步驟，掃描免疫電鏡技術可為研究細胞或組織表面的三維結構與抗原組成的關系提供可能性。實驗原理免疫電鏡技術是免疫化學技術與電鏡技術結合的產物，是在超微結構水平研究和觀察抗原、抗體結合定位的一種方法學。它主要分為兩大類：一類是免疫凝集電鏡技術，即采用抗原抗體凝集
免疫電鏡相關技術實驗——膠體金標記免疫電鏡技術
實驗材料病毒試劑、試劑盒膠體金儀器、耗材電子顯微鏡實驗步驟免疫膠體金標記技術又稱免疫金染色技術 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年發現直徑為 5~50nm 的膠體金 (colloidal gold) 在電鏡下具有很高的電
免疫電鏡相關技術實驗
實驗方法原理 該方法是用電鏡直接觀察病毒抗原與相應抗體結合后形成的大分子復合物。實驗材料 病毒試劑、試劑盒 抗體儀器、耗材 電子顯微鏡實驗步驟 直接將病毒抗原與對應抗體孵育后上電子顯微鏡觀察即可。具有簡單易行，抗原和抗體用量少在該時間內即可得到結果等優點，可用于檢出病毒或進行病毒分型，并已用于臨床診
冷凍蝕刻免疫電鏡技術
實驗原理?冷凍蝕刻法(Freeze Ftching)，也稱冷凍復型法(Freeze Replica)或冷凍切斷(Freeze Fracture)，是研究生物膜結構的重要方法之一。其主要步驟首先是將樣品在液氮中冷凍，然后放到真空噴鍍儀中切斷，切斷后的切面上有細胞器，其間還有凍成洋的水分。再加熱使冰升華
冷凍蝕刻免疫電鏡技術
實驗概要本文介紹了冷凍蝕刻免疫電鏡技術，包括：冷凍蝕刻表面標記免疫電鏡技術和斷裂—標記免疫電鏡技術。實驗原理冷凍蝕刻法(Freeze Ftching)，也稱冷凍復型法(Freeze Replica)或冷凍切斷(Freeze Fracture)，是研究生物膜結構的重要方法之一。其主要步驟首先是
免疫學技術：鐵蛋白免疫電鏡技術
一、 原理免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。二、材料與試劑1．馬脾鐵蛋白2．硫酸銨3．硫酸鎘4．雙異氰酸鎘二甲苯(Metaxylene dlisocyante? XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸鹽緩沖液將
鐵蛋白免疫電鏡技術
（一）??原理?免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。（二）材料與試劑1．馬脾鐵蛋白2．硫酸銨3．硫酸鎘4．雙異氰酸鎘二甲苯(Metaxylene dlisocyante? XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸鹽
斷裂標記免疫電鏡技術（2）
)超薄切片法步驟:①至⑤同臨界點干燥法。⑥1%鋨酸，室溫固定2h，系列酒精或丙酮脫水，常規電鏡包埋。⑦切半薄片，光鏡定位合適的斷裂部位，再切超薄切片，鈾鉛染色，透射電鏡觀察。斷裂標記法目前文獻報告應用較多的是植物凝集素-膠體金免疫標記技術，常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 膠體金免疫標記技術.C
鐵蛋白免疫電鏡技術
一、 原理 免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。 二、材料與試劑 1．馬脾鐵蛋白 2．硫酸銨 3．硫酸鎘 4．雙異氰酸鎘二甲苯(Metaxylene dlisocyante? XC)以0.30Mol/L pH 9.5
斷裂標記免疫電鏡技術（1）
斷裂-標記免疫電鏡技術此法是先進行冷凍斷裂，再做免疫標記，從而可以對斷裂開的各種膜結構及胞漿斷面進行標記。(1)臨界點干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h，PBS沖洗3min×3。如為細胞懸液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝膠化，將凝膠切成2mm左右的小塊，用3
非標記抗體免疫電鏡技術
一、原理 標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
非標記抗體免疫電鏡技術
（一）??原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組
斷裂—標記免疫電鏡技術介紹
此法是先進行冷凍斷裂，再做免疫標記，從而可以對斷裂開的各種膜結構及胞漿斷面進行標記。（1）臨界點干燥法①固定：1.0%～2.5%戊二醛PBS液4℃1～2h，PBS沖洗3min×3。如為細胞懸液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝膠化，將凝膠切成2mm左右的小塊，用30%的甘油—PBS浸透
免疫鐵蛋白電鏡技術
1．基本原理 鐵蛋白的分子量460kD，為一種含鐵(約占23%)的蛋白質。直徑10―12nm。目前常用的間接免疫染色技術是應用低分子量的雙功能試劑將第二抗體與鐵蛋白相連，制備標記抗體。此復合物既保留了抗體的免疫活性，又因鐵蛋白含有2000―3000個鐵原子的致密鐵離子核心，形成四個圓形致密區，所以
免疫學技術專題：非標記抗體免疫電鏡技術
一、原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的
冷凍蝕刻表面標記免疫電鏡技術
冷凍蝕刻表面標記免疫電鏡技術(1)新鮮或固定的細胞進行直接法或間接法免疫標記。(2)PBS(pH7.5)沖洗3min×2，加入1mmol/l MgCl2蒸餾水洗洗3min×3，離心沉集細胞。(3)將細胞團置于小紙板上，入液氮冷卻的Freon中，取出入冷凍蝕刻儀中進行斷裂操作，再于-100℃蝕刻1mi
免疫電鏡術的技術特點
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色，再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
（一） 原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
免疫電鏡術的技術特點
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色，再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
免疫電鏡技術（immunoelectronmicroscopy）的染色方法
免疫電鏡技術與光鏡免疫細胞化學染色方法的基本原理和試劑準備基本相同，相關內容可參考本書第四章，這里僅介紹免疫電鏡的幾種染色方法，包括包埋前染色、包埋后染色和冰凍超薄切片免疫染色三種。1．包埋前染色 包埋前染色即在進行常規電鏡包埋處理前先行免疫組織化學染色，然后于解剖顯微鏡下將免疫反應陽性部位取出
免疫電鏡術的技術特點
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色，再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
(一) 原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的