菌落PCR（ColonyPCR）方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。具體方法：1、PCR混合物的制備Taq buffer（10×） 20 uldNTP（2.5 mM） 5 ulPrimer Forward（50 mM） 10 ulPrimer Reverse（50 mM） 10 ulddH 2 O 147 ulTaq（2U/ul） 8 ultotal 200 ul 將上述溶液混勻，10 ul每管分裝于200 ul PCR管中。2、常溫下隨機挑選轉化板上的轉化子，用滅菌的牙簽或槍頭挑取少量菌體，在LB瓊脂糖平板上輕點，做一拷貝；然后將沾有菌體的牙簽或槍頭置于相應的裝有PCR混合物的PCR管中洗滌數下（管子做好記號，如平板上點的......閱讀全文
菌落PCR（Colony－PCR）方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。具體方法：1、PCR混合物的制備T
菌落PCR（Colony－PCR）具體方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。具體方法：1、PCR混合物的制
Colony－PCR
Colony?PCRDavid AmbergThis procedure will work for both yeast and E. coli:Take a small colony and suspend it in 5ul of H2O in a PCR tube. Heat for 5 m
Colony－PCR
Colony PCR is useful in determining whether or not a specific colony on a plate has a sequence you desire. Primers for the specific sequence should be
Colony－PCR－Protocol
1. Pull out eight glycerol stock plates from the –80oC freezer and set on bench top to thaw. Be sure to remove the foil seal before leaving the plates
Silver:－Colony－PCR
Zymolyase Solution:Regular stock of zymolyase is 10 mg/ml diluted in water, mix by inverting, not all will go into solution (filter it) store aliquots
Bacterial－Colony－PCR
Bacterial Colony?PCRObjective:This protocol allows rapid detection of transformation success when primers are available to allow determination of corr
Endy:Yeast－Colony－PCR
MethodUsing sterile pipette tips, transfer a 1 mm colony into 50 uL of 60 U/ml Zymolyase3 uL of 1 U/mL Zymolyase stock solution47 uL of waterIncubate
Blackburn:Yeast－Colony－PCR
OverviewThis is a quick and easy yeast colony PCR protocol that does not require zymolyase step.Updated Protocol:?Blackburn Lab: Quick and Easy Yeast
菌落PCR
菌落PCR可用于：（1）重組體的篩選；（2）重組體DNA測序分析。實驗方法原理直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。實驗材料菌落樣品試劑、試劑盒dNTPPCR混合液儀器、耗材PCR儀實驗步驟1. ?PCR混合液的制備（1）
菌落PCR
實驗方法原理 直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。實驗材料 基因樣品試劑、試劑盒 dNTPPCR混合液儀器、耗材 PCR儀實驗步驟 1. ?PCR混合液的制備（1）Taq buffer（10×） 180 ul（2）dNT
菌落PCR
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。 實驗材料 菌落樣品
酵母菌落PCR方法
問：很郁悶，zui近在做電轉畢赤酵母，但是轉化完了沒有合適的篩選方法，如果提基因組的話費時費錢，而且由于我這個電轉的幾率十分低，也就有1%-10%，所以想用菌落PCR方法篩選，但酵母菌破壁很困難，如果處理不好的話基因組釋放不出來，就沒有陽性結果了。查了一些資料說用反復凍融法，是不是直接挑單菌落就行了
菌落PCR實驗
菌落PCR標簽： 菌落 PCR菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。
菌落pcr步驟
一、引言常規的PCR擴增需要進行細菌培養、質粒制備等多步操作后才能進行基因擴增,操作繁瑣耗時較長,同時在反復的操作中DNA量損失也較大,產率較低。在1989年 Gussow Clackson3建立了菌落PCR( colony PCR)法,菌落PR與我們通常的普通DNA的PCR的不同在于,直接以單個菌
Engineering－BioBrick－vectors－from－BioBrick－parts/Colony－PCR
MaterialsPCR SuperMix High FidelityVF2 primer (5''-TGCCACCTGACGTCTAAGAA-3'')VR primer (5''-ATTACCGCCTTTGAGTGAGC-3'')De
利用PCR分析酵母菌落
利用PCR分析酵母菌落 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定酵母中是否攜
利用PCR分析酵母菌落
實驗方法原理 用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定 YAC 中是否攜帶目的 DNA 序列。實驗材料 Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 標準參照物YAC 重組子的酵母菌株試劑、試劑盒 PCR 緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材
菌落PCR，快速鑒定重組質粒
質粒快速鑒定????試劑：?Protoplasting buffer:?30mM Tris-HCl, pH8.0????????????????????0.33ml/1.0M????????5mM?EDTA????????????????????????????????0.1ml/0.5M?????
什么是菌落pcr假陽性
利用菌落作為模板進行PCR擴增，驗證該菌落里是否帶有目標片段。但是由于PCR是一個級聯放大的過程，所以即使菌落中不含有目標片段，而是菌落表面沾有一部分之前連接，轉化中用的目標DNA，也會導致PCR獲得擴增條帶，從而誤認為這個菌落已經帶有了目標片段，稱之為假陽性。可以通過提質粒酶切，或者測序驗證，排除
利用PCR分析酵母菌落
利用PCR分析酵母菌落主要用于確定酵母中是否攜帶目的DNA序列。實驗方法原理用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定酵母中是否攜帶目的 DNA 序列。?實驗材料Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 標準參照物YAC 重組子的酵母
酵母遺傳學方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反應混合液：2μl??????????????????10×菌落PCR緩沖液1.2μl?????????????????25mmol/L MgCl20.4μl?????????????????10mmol/L dNTPs10pmol????????????????引物
技術和方案15－酵母菌落PCR
實驗步驟
菌落－PCR－分析克隆的重組體實驗
菌落 PCR 分析克隆的重組體實驗試劑、試劑盒溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶引物儀器、耗材無菌槍頭瓊脂糖凝膠電泳設備和試劑實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑（Stratagen
菌落－PCR－分析克隆的重組體實驗
試劑、試劑盒 溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 緩沖液 熱穩定 DNA 聚合酶引物儀器、耗材 無菌槍頭瓊脂糖凝膠電泳設備和試劑實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑（Stratagene)Tween20，10%
菌落－PCR－分析克隆的重組體實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。使用載體上的通用引物，進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用
菌落pcr會出現假陽性結果嗎
最近做酶切連接轉化，最后做鑒定時，以菌落為模板進行PCR時可以見到有目的條帶;當把菌落接種到LB液擴菌后，以菌液為模板進行PCR時卻什么東東都沒有?請問會是什么原因啊?多多指教啊!建議重新以菌落為模板進行PCR檢測，再重新以菌液為模板進行PCR檢測，因為菌落或者菌液PCR假陽性的幾率還是比較高的。但
PCR技術（十）：PCR產物克隆方法
平端連接 通常情況下，PCR產物可直接與平端載體DNA進行連接，但其連接效 率效低。因為TaqDNA聚合酶具有非模板依賴性末端轉移酶活性，能 在兩6條DNA鏈的3'末端加上一個多余的堿基，使合成的PCR產物成為 3'突出一個堿基的DNA分子。這種DNA分子的連接效率很低。由于PCR
一文知曉PCR，定量PCR，數字PCR方法選擇
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。diyi代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過
菌落PCR的操作步驟及儀器有哪些
1.取15-20ul Tris-HCl 放到編好號的0.5ml 的ep管中2.用滅菌牙簽，或槍頭，沾取少量菌體（多了效果不好）3.并將槍頭或牙簽在剛取出來的Tris-HCl中涮一下，可以看到溶液略微變渾濁4.蓋上管蓋，100C煮沸5-10min5.離心，取1-2ul上清配制PCR反應體系。如果菌體較