精確修飾位點譜圖庫的建立與磷酸化蛋白質組的DIA解析3
結果顯示，從 DIA 數據中提取、定量到 6401 條可信的磷酸化肽，占譜圖庫磷酸化肽總數（6505 條）的 98.4%（圖 5）。磷酸化肽的豐度和離子化效率普遍較低，本實驗如此高的解析成功率表明，基于 Orbitrap 的 DIA 數據具有極高的譜圖質量和出色的靈敏度。 圖5. DIA可靠解析的磷酸化肽占譜圖庫總數的98.4% 進一步對 6401 條磷酸化肽 XIC 色譜峰面積的三針重現性進行統計。將每條肽的母離子和子離子峰面積分別加和，選取兩者中重現性最好（即 CV 值最低）的結果用于定量。一般認為，峰面積 CV 值 < 20% 時定量結果可靠、準確。統計結果顯示，峰面積 CV 值 < 20% 的磷酸化肽占總數的 86.9%（圖 6）。如此高的重現性說明 Orbitrap DIA 不僅具有出色的靈敏度，同時具有優越的重現性，勝任復雜的翻譯后修飾定量。 ......閱讀全文
精確修飾位點譜圖庫的建立與磷酸化蛋白質組的－DIA－解析3
結果顯示，從 DIA 數據中提取、定量到 6401 條可信的磷酸化肽，占譜圖庫磷酸化肽總數（6505 條）的 98.4%（圖 5）。磷酸化肽的豐度和離子化效率普遍較低，本實驗如此高的解析成功率表明，基于 Orbitrap 的 DIA 數據具有極高的譜圖質量和出色的靈敏度。??圖5. DIA可
精確修飾位點譜圖庫的建立與磷酸化蛋白質組的－DIA－解析1
引言 數據非依賴采集（Data-Independent Acquisition, DIA）是當前最熱門的質譜采集技術之一，它以非目標的方式將質量范圍分為若干窗口，依次并循環采集窗口內所有母離子的二級碎片[1,2]。DIA 與 SRM 類似，也是基于子離子（transition）定量，相比
精確修飾位點譜圖庫的建立與磷酸化蛋白質組的－DIA－解析2
2. 磷酸化樣本的 DDA 鑒定、可信度篩選和譜圖庫建立磷酸化樣本信息和色譜質譜參數見實驗條件部分。3 針 DDA 數據按磷酸化檢索流程使用 Proteome Discoverer 2.0 軟件搜庫鑒定（S/T/Y+79.966 Da），并使用 ptmRS 模塊對位點打分（圖 2-1）。搜庫完成
布魯克發布PaSER重磅更新，強大新算法支持diaPASEF
布魯克PaSER? 2022軟件加入TIMS DIA-NN模塊，具有處理dia-PASEF?數據的能力 創新的TIMScore算法支持dda-PASEF數據和dia-PASEF庫，與TIMS DIA-NN相結合，僅需35分鐘梯度即可從200ng K562裂解液中鑒定約9000種蛋白質組 TI
上科大水雯箐博士：DIA－常用軟件及分析流程－|－WeOmics－G21
“Westlake Proteomics Series” (WeOmics)系列研討會?由西湖大學Guomics實驗室，西湖實驗室iMarker實驗室，CN-HUPO，The Proteomic Navigator of the Human Body (π-HuB) Project共同舉辦，并由西湖
數據非依賴采集DIA－解決方案（四）
Skyline 軟件Skyline 軟件是華盛頓大學 MacCoss 教授實驗室開發的目標蛋白質組學分析軟件（https://skyline.gs.washington.edu），是 DIA/SWATH 數據處理的權威工具，由于功能全面、性能強大而受到普遍認可，是目前使用最廣泛的 DIA/S
用蛋白質組學方法繪制磷酸化位點圖譜
方案1 用帶有 Fe(Ⅲ) 和 Ga(Ⅲ)的 IMAC 純化磷酸化多肽 方案2 在 MALDI 分析之前或之后對磷酸化多肽進行堿性磷酸酶處理 方案3 結合固定化金屬離子親和介質和 MALDI-TOF-MS 直接分析方法對磷酸化多肽進行特征分析實驗 方
創新數據非依賴性采集用于復雜基質目標蛋白質...（一）
創新數據非依賴性采集用于復雜基質目標蛋白質的定量分析摘要 數據非依賴性采集(DIA)是隨著定量蛋白質組學而建立的質譜掃描技術。DIA 能夠獲得掃描范圍內所有母離子及二級子離子信息,不會造成低豐度離子信息的丟失,同時突破了高分辨質譜二級定量的通量限制。本研究基于靜電場軌道阱Q-qIT-OT 三
4D組學新時代！更精確的磷酸化修飾組學
離子淌度分離概念的引入使得蛋白質組學進入了4D新時代。4D蛋白質組學是在3D分離即保留時間（retention time）、質荷比（m/z）、離子強度（intensity）這三個維度的基礎之上增加了第四個維度，離子淌度（mobility）的分離（圖1），進而大幅度的提高掃描速度和檢測靈敏度，帶來蛋白
解析糖基化修飾及位點分析
經常聽到糖基化修飾，今天帶大家一探究竟。什么是糖基化修飾呢？糖基化是在糖基轉移酶的控制下，蛋白質或脂質附加上糖類的過程，發生于內質網和高爾基體。糖基化修飾是一類非常重要的翻譯后修飾，大部分膜蛋白和分泌蛋白均為糖蛋白，糖基化修飾不僅影響蛋白質的空間構象、活性、運輸和定位，同時在信號轉導、分子識別，
布魯克發布新型4DProteomics?－timsTOF技術
A. 基于人工智能的TIMSquant?軟件，實現CCS-enabled非標記定量，可擴展到成千上萬的樣本； B. midia-PASEF?采集模式，早期能夠用在超靈敏的 timsTOF Ultra 上進行免疫肽組學和蛋白質翻譯后修飾（PTMs）研究，實現在dia-PASEF中的類似DDA母離
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
捕集離子淌度質譜帶來磷酸化蛋白質組研究新的深度
Yasushi Ishihama 教授 京都大學分子與細胞生物分析實驗室 2021年1月發表于www.ddw-online.com 目前，在蛋白質生物化學和蛋白質組學相關研究中，質譜（MS）已廣泛應用于鑒定和表征蛋白質。且隨著技術的不斷發展，質譜已經實現了更高的覆蓋深度、更快的分析速度和更
磷酸化位點分析實驗磷酸化位點的確定
磷酸肽的化學測序 磷酸肽的質譜分析 源后衰變 用酶和化學方法去磷酸化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸化位點的確定也使用一
磷酸化位點分析實驗磷酸化位點的確定
實驗方法原理 磷酸化位點的確定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白質被純化，如果可能蛋白質要均一；磷蛋白被特異性的化學或酶反應切斷、產生肽混合物，其中含有一到兩個磷酸肽不同之處在干其分離磷酸肽的策略是為了確定氨基酸序列，定位肽段內磷酸化的殘基。上面所述的分離方法， 2D-PP 作圖、 HPLC 或 l
黃超蘭Cell發文－絕對定量質譜揭示CD3ε的多重信號轉導功能
2020年7月29日，北京大學醫學部精準醫療多組學研究中心黃超蘭團隊，中科院上海生化與細胞所許琛琦團隊、美國加州大學圣地亞哥分校惠恩夫團隊，聯手在Cell上發表了題為“Multiple signaling roles of CD3ε and its application in CAR-T cell
一小時DDA鑒定DIA定量4000個Hela蛋白（一）
引言數據非依賴性的掃描模式（data-independent acquisition, DIA）是近幾年來發展的一種新的質譜數據采集方式[1]。它的理念是用二級碎片離子進行蛋白相對/絕對定量。 DIA 掃描模式中，超高分辨質譜對特定質量范圍內的所有母離子進行碎裂，采集所有母離子的碎片離子，并
為什么蛋白質保守絲氨酸位點是其磷酸化位點
磷酸化位點一般有絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸。其中，絲氨酸和蘇氨酸是最常見的磷酸化位點，因為其結構末端含有羥基，羥基很活潑，可以與磷酸基團結合。磷酸化的過程就是傳遞磷酸基團。所以說，蛋白質中如果某個絲氨酸很保守的話，很大程度上就是磷酸化位點。
為什么蛋白質保守絲氨酸位點是其磷酸化位點
磷酸化位點一般有絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸。其中，絲氨酸和蘇氨酸是最常見的磷酸化位點，因為其結構末端含有羥基，羥基很活潑，可以與磷酸基團結合。磷酸化的過程就是傳遞磷酸基團。所以說，蛋白質中如果某個絲氨酸很保守的話，很大程度上就是磷酸化位點。
一小時－DDA－鑒定－DIA－定量－4000－個－Hela－蛋白（一）
引言數據非依賴性的掃描模式（data-independent acquisition, DIA）是近幾年來發展的一種新的質譜數據采集方式[1]。它的理念是用二級碎片離子進行蛋白相對/絕對定量。DIA 掃描模式中，超高分辨質譜對特定質量范圍內的所有母離子進行碎裂，采集所有母離子的碎片離子，并快
一小時－DDA－鑒定－DIA－定量－4000－個－Hela－蛋白（二）
500 ng Hela 細胞裂解液用相同的色譜柱，相同的色譜梯度，將 QE HF 切換至 DIA 掃描模式進行 3 次 DIA 數據采集。在一次掃描循環中，目標母離子質核比范圍 400–1000，四極桿的隔離窗口為 12 Da，包含 50 次 MS/MS 掃描。每一張 MS/MS 譜圖中
上海植物逆境中心建立植物基因組精確定點修飾技術
中科院上海植物逆境生物學研究中心朱健康課題組近日通過模仿和改造微生物中的一種抵御外源侵染的防護機制，成功開發出一種能對植物基因組進行精確定點修飾的技術，從而使高效植物分子改良性狀成為可能。這一適用于植物的CRISPR/Cas技術就像一把剪刀可以對基因組任意感興趣的位置進行編輯，它的成功開發將革命
一文了解質譜確定磷酸化位點
電噴霧質譜儀為英國Micromass公司的電噴霧四極桿正交加速飛行時間串聯質譜儀Q-TOF2。配備毛細管液相色譜和納升噴霧源。鍍金屬鈀的硼硅酸鹽電噴霧針（palladiμm-coated borosilicate electrospray needle）(Protana, Odense, Den
一小時DDA鑒定DIA定量4000個Hela蛋白（二）
Skyline 中嵌入的 mProphet 軟件會根據同一肽段的多個子離子峰的 feature 進行打分。 Feature 包括子離子共流出峰形、保留時間偏差、 dotp 值、信噪比等。為了區分假陽性的子離子峰， mProphet 可以建立 decoy 庫，也可以將打分排名第二的肽段作為decoy，
2020CMSS精彩繼續，質譜揭開生命組學與藥代的神秘面紗
分析測試百科網訊 2020年9月15日，2020年中國質譜學會質譜網絡研討會（2020CMSS）進行到第二天，由北京生命科學研究所董夢秋研究員、中國科學院生態環境研究中心汪海林研究員、同濟大學田志新教授、中國醫學科學院藥物研究所張金蘭研究員；吉林大學藥物代謝研究中心顧景凱教授、軍事醫
數據非依賴采集DIA－解決方案（二）
二、特點與優勢?數據非依賴采集（DIA）：? 采集所有離子及碎片譜圖，不丟失任何信息，重現性好；? 數據易于追溯，即使目前的水平無法發現某些蛋白/ 化合物，未來可以回溯；? 無需優化方法，對于易降解樣品可以即刻采集，獲得數據后再深入挖掘；? 基于碎片離子（即母子離子對）定量，選擇性好，與 SRM/M
魯克在－timsTOF－4D蛋白質組學和表觀蛋白質組學平臺上擴展
在蛋白質組論壇| EuPA 2022，布魯克公司（納斯達克股票代碼：BRKR）宣布擴展了更深層次的蛋白質組學和表觀蛋白質組學覆蓋的能力，包括使用創新的 TIMScore 算法增強磷酸肽分析，該算法現在是基于 GPU 的新 PaSER 2022 平臺的一部分。新的 TIMScore 算法利用機器學
顛覆認知，“質”的飛躍：Orbitrap－Astral革新修飾組學研究
翻譯后修飾（Post-translational modifications，PTMs）是指對翻譯后的蛋白質進行共價加工的過程，在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團，可以改變蛋白質的理化性質，進而影響蛋白質的空間構像、活性狀態、亞細胞定位、折疊及其穩定性以及蛋白互作。 隨著對一些疾病逝行深入的研