肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降解后釋放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。實驗材料 洗脫的磷酸肽（見輔助方案 1）試劑、試劑盒 5%(V／V)異硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-10 份庚烷與 1 份乙酸乙酯混合2:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-2 份庚烷與 1 份乙酸乙酯混合 100%(m V)三氟乙酸(TFA) 電泳緩沖液(pH 1.9 200~500 cpm 32P（用去離子水稀釋 32P 正磷酸鹽配制)或 2 mg／ml PTH-磷酸酪氨酸儀器、耗材 微量離心管45℃ 水浴適用于契侖科夫計數法的閃爍計數器TLC 平板(20 cm × 20 cm 100 μm 纖維素)65℃ 烘箱或風扇實驗步驟 1. 根據候選肽段的列表確定循環數。將循環數指定為^每一循環的起始體積為 20 μl。2. 在稱為反應管（微量離心管）的管子中將......閱讀全文
肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
基本方案 手工EDMAN降解法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降解后釋放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺
肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降解后釋放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。實驗材料 洗脫的磷酸肽（見輔助方案 1）試劑、試劑盒 5%(V／V)異硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-10 份庚烷與 1 份
肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
實驗方法原理磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降解后釋放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。實驗材料洗脫的磷酸肽（見輔助方案 1）試劑、試劑盒5%(V／V)異硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-10 份庚烷與 1 份乙酸乙酯混
磷酸化位點分析實驗確定磷酸化氨基酸類型
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 蛋白樣品 實驗步驟 了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型
磷酸化位點分析實驗確定磷酸化氨基酸類型
了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型，可以限定可能的磷酸化位點，并因此簡化(對多肽鏈中磷酸化殘基的確認。磷酸化殘基類型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特異性免疫檢測確定。磷酸氨基酸分析是對肽鍵進行氣相或液相水解，此水解條件下要至少保留一段磷酸酯鍵完整。?32p標記的磷酸蛋白質或磷酸肽的水解產物與磷酸氨
磷酸化位點分析實驗確定磷酸化氨基酸類型
實驗材料蛋白樣品實驗步驟了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型，可以限定可能的磷酸化位點，并因此簡化(對多肽鏈中磷酸化殘基的確認。磷酸化殘基類型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特異性免疫檢測確定。磷酸氨基酸分析是對肽鍵進行氣相或液相水解，此水解條件下要至少保留一段磷酸酯鍵完整。?32p標記的磷酸蛋白質或
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的分離
2D-PP 分離磷酸肽 RP-HPLC 分離磷酸肽 高分辨凝膠電泳分離磷酸肽 IMAC 分離／富集磷酸肽 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的分離
實驗方法原理磷酸化分析的原理研究的最常見的磷酸化類型是絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知發生的磷酸化還有精氨酸、組氨酸和賴氨酸的亞酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。這些修飾中的其中一些是化學不穩定的，通常觀察不到，除非采取特殊的保護措施防止他們在蛋內質分離過程中消失。舉例來說，組氨酸磷酸化是一
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的分離
實驗方法原理 即使納噴 MS/MS 技術已經成功用于直接分析蛋白酶解產生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建議在質譜分析前作一些分離：(1) 磷酸肽在蛋白酶切產物中通常只占少數因此容易淹沒在低率度離子產生的總背景中，肽分離技術可濃縮分析物，因此會提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性標記并具有相同比
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的分離
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸化分析的原理研究的最常見的磷酸化類型是絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知發生的磷酸化還有精氨酸、組氨酸和賴氨酸的亞酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。這些修飾中的其中一些是化學不穩定的，通常觀察不到，除非采取特殊的保護措
環脂肽氨基酸順序的質譜測定
楊世忠 牟伯中? 呂應年 陳濤? (華東理工大學化學與制藥學院，上海 200237) 摘要：從一株枯草芽孢桿菌的培養液中分離到一種生物表面活性劑，紅外光譜、茚三酮顯色及質譜分析表明它是一種具有環狀結構的脂肽。質譜顯示脂肽的脂肪酸部分為β－羥基脂肪酸；氨基酸分析表明肽部分由4 個亮氨酸、1 個天門東
氨基酸序列測定實驗
基本方案 測定通過 SDS-PAGE 轉移到 PVDF 膜上樣品的氨基酸序列 輔助方案 準備SDS-PAGE蛋白質樣品 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
氨基酸序列測定實驗
實驗方法原理 實驗材料 分離膠和積層膠溶液還原型谷胱甘肽干粉試劑、試劑盒 4 × 凝膠緩沖液10 × 下槽緩沖液10 × 上槽緩沖液甲醇轉移緩沖液0.1%（V／V）考馬斯亮藍的 50％甲醇溶液10％（V／V）乙酸的 50％甲醇溶液儀器、耗材 微量注射器或凝膠加樣吸頭PVDF 膜小型電轉裝置自動蛋白質
對氦氖譜線位置的測定在實驗中起什么作用
氦氖激光器由放電管、共振腔、激光電源三部分組成。放電管包括放電毛細管、儲氣管和電極三部分。放電毛細管是發生氣體和產生激光的區域管內徑為1.2-1.3mm。氖氣管與放電毛細管同軸并相通。氖氣管相當于擴大了放電毛細管儲氣的體積，可緩沖因氖氣逃逸快而造成氦、氖氣壓比失調，并且對漏入的雜質氣體起稀釋作用。此
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的分離——IMAC－分離/富集磷酸肽
實驗材料蛋白樣品儀器、耗材質譜儀實驗步驟磷酸肽分析的常見困難是由磷酸化的低化學計量值導致的，樣品中相同序列肽段的磷酸肽的含量要比非磷酸化肽段含量少得多，這種情況下即使?32p標記的 2D-PP 上的點，經全蛋白質水解及 HPLC 組分收集，已經確定磷酸肽存在，用質譜技術也難以鑒定磷酸肽。數據依賴的
磷酸化位點分析實驗_磷酸肽的化學測序
實驗方法原理磷酸化位點的確定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白質被純化，如果可能蛋白質要均一；磷蛋白被特異性的化學或酶反應切斷、產生肽混合物，其中含有一到兩個磷酸肽不同之處在干其分離磷酸肽的策略是為了確定氨基酸序列，定位肽段內磷酸化的殘基。上面所述的分離方法， 2D-PP 作圖、 HPLC 或 lMAC
磷酸化位點分析實驗_磷酸肽的化學測序
實驗方法原理磷酸化位點的確定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白質被純化，如果可能蛋白質要均一；磷蛋白被特異性的化學或酶反應切斷、產生肽混合物，其中含有一到兩個磷酸肽不同之處在干其分離磷酸肽的策略是為了確定氨基酸序列，定位肽段內磷酸化的殘基。上面所述的分離方法， 2D-PP 作圖、 HPLC 或 lMAC
二次鑒別性消化法檢測磷酸肽中特定氨基酸實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 洗脫的磷酸肽
二次鑒別性消化法檢測磷酸肽中特定氨基酸實驗
實驗材料洗脫的磷酸肽試劑、試劑盒消化酶消化緩沖液2-巰基乙醇合適 pH 的電泳緩沖儀器、耗材適合于酶消化的溫度的水浴TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 維素）實驗步驟1. 在微量離心管中用 50 μl 合適的緩沖液溶解洗脫下的磷酸肽，短暫離心在管底收集所有的溶液。取 1 μl 肽溶液滴
二次鑒別性消化法檢測磷酸肽中特定氨基酸實驗
實驗方法原理 實驗材料 洗脫的磷酸肽試劑、試劑盒 消化酶消化緩沖液2-巰基乙醇合適 pH 的電泳緩沖儀器、耗材 適合于酶消化的溫度的水浴TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 維素）實驗步驟 1. 在微量離心管中用 50 μl 合適的緩沖液溶解洗脫下的磷酸肽，短暫離心在管底收集所有的溶液。
多磷酸化肽標記技術
蛋白質磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一種蛋白質翻譯后修飾，20世紀50年代以來一直被生物學家看作是一種動態的生物調節過程。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質及多
離子肽的合成過程中涉及哪些氨基酸？
丙氨酸（Alanine）：一種非極性氨基酸，常用于合成疏水性肽段。 甘氨酸（Glycine）：一種極性氨基酸，常用于合成肽鏈的連接部分。 絲氨酸（Serine）：一種極性氨基酸，可以形成磷酸酯鍵。 天冬氨酸（Aspartic acid）：一種極性氨基酸，可以形成磷酸酯鍵。 谷氨酸（Glu
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的分離——RPHPLC－分離磷酸肽
實驗材料蛋白樣品儀器、耗材質譜儀實驗步驟反相 HPLC 分段收集磷酸肽重現性好，簡單，且不需要特殊裝備。在 RP-HPLC 中，磷酸肽根據其疏水性被分離。分離后收集的組分經 Cerenkov計數檢測。對 Cerenkov計數和時間作圖，顯示具放射性活性的組分的計數。純化的磷酸肽用 MS 分析；可用不
復雜基體中目標肽的測定
本文介紹了使用Thermo Scientific公司的TSQ Quantum Ultra質譜儀進行復雜生物機體中目標肽的方法，結果表明，基于串連質譜的選擇反應監測（SRM）流程，該方法可以在具有高化合物背景的復雜基體中檢測低濃度水平肽，同時保證良好的定量準確度和精密度。 目前一般生物標
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的質譜分析
實驗方法原理用于確定磷酸肽中磷酸化位點的壓譜方法有兩種不同的基本原理。第一種方法依賴于在質譜儀條件下，如在 ESI 質譜儀的碰撞室或離子源中，或MALDI-MS 的 PSD 過程中，磷酸酯鍵的化學穩定性。因此，磷酸肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的診斷離子鑒定。第二種方式依靠檢測磷酸酯基團使肽段增加的質量數
蛋白質磷酸化的測定實驗
代謝標記 X射線片放射自顯影檢測32P標記的蛋白質 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
植物根系傷流液中氨基酸總量的測定實驗
實驗方法原理：氨基酸與水合茚三酮作用后，能產生二酮茚－二酮茚胺的取代鹽等藍紫色化合物，其顏色的深淺與氨基酸的含量成比例。測定反應產物在520nm波長處的吸光度值 ，即可計算出樣品中氨基酸的含量。實驗材料：根系傷流液試劑、試劑盒：95﹪乙醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
植物根系傷流液中氨基酸總量的測定實驗
實驗方法原理氨基酸與水合茚三酮作用后，能產生二酮茚－二酮茚胺的取代鹽等藍紫色化合物，其顏色的深淺與氨基酸的含量成比例。測定反應產物在520nm波長處的吸光度值 ，即可計算出樣品中氨基酸的含量。實驗材料根系傷流液試劑、試劑盒95﹪乙醇谷基酸氮標準母液水合茚三酮儀器、耗材分光光度計加熱設備試管試管架移液
植物根系傷流液中氨基酸總量的測定實驗
實驗方法原理 氨基酸與水合茚三酮作用后，能產生二酮茚－二酮茚胺的取代鹽等藍紫色化合物，其顏色的深淺與氨基酸的含量成比例。測定反應產物在520nm波長處的吸光度值 ，即可計算出樣品中氨基酸的含量。實驗材料 根系傷流液試劑、試劑盒 95﹪乙醇谷基酸氮標準母液水合茚三酮儀器、耗材 分光光度計加熱設備試管試
磷酸化位點分析實驗磷酸肽的分離——2DPP－分離磷酸肽
實驗方法原理即使納噴 MS/MS 技術已經成功用于直接分析蛋白酶解產生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建議在質譜分析前作一些分離：(1) 磷酸肽在蛋白酶切產物中通常只占少數因此容易淹沒在低率度離子產生的總背景中，肽分離技術可濃縮分析物，因此會提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性標記并具有相同比活