酵母細胞質粒分離實驗
實驗材料 酵母試劑、試劑盒 YPD儀器、耗材 接種針培養瓶搖床實驗步驟 1. 挑取幾個含質粒的酵母宿主菌菌落，接種于10 ml 非選擇性培養基，于30℃培養過夜。 2. 在非選擇性平板上于30℃培養2天以得到單菌落，大多數情況下，可以得到約200~300個單菌落（約每平板100個菌落）。 3. 通過影印到選擇性平板上以確定丟失了質粒選擇標志的菌落，于30℃培養過夜，那些可在主平板上生長的但不能在選擇性平板上生長的菌落丟失了質粒。注意事項 如果沒有其他的選擇，可以用YPD培養基，如果要保留其他不穩定遺傳標志或質粒，可以用添加了與可能丟失的選擇標志相應的營養成分的確定成分培養基。......閱讀全文
酵母細胞中質粒的加工實驗——從酵母細胞中分離質粒
利用一個假定的突變通過互補作用克隆酵母菌基因的一般方法。該突變為cdc101-1，它對酵母菌的生長來說既是隱性的又是溫度敏感的。它使酵母可以很正常地在30°C生長，而不能在37°C形成菌落。如果用一個酵母菌基因組文庫轉化cdc101-1菌株，通過分離溫度不敏感菌落，那么就可能分離到一個可以互補這種突
酵母細胞中質粒的加工實驗_穿梭質粒
實驗材料帶有一個非URA3選擇標記YCp載體試劑、試劑盒缺失成分平板+Ura含有5-FOAYCp質粒選擇性培養基的平板YPD平板YIP5載體儀器、耗材培養皿實驗步驟1) 構建染色體上重要基因被破壞的單倍體菌株以及含有完整重要基因和URA3選擇標 記的YEp或YCp質粒。2) 對于誘發突變，將重要基因
酵母細胞質粒分離實驗
在非選擇性生長條件下，大多數大腸桿菌/酵母菌穿梭載體的丟失頻率大約1%，采用本方案不易分離除去的一個質粒是內源性2 μm 質粒，2 μm DNA自發丟失的頻率約為每代10-4。實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD儀器、耗材接種針培養瓶搖床實驗步驟1. ?挑取幾個含質粒的酵母宿主菌菌落，接種于10 ml 非
酵母細胞質粒分離實驗
實驗材料 酵母試劑、試劑盒 YPD儀器、耗材 接種針培養瓶搖床實驗步驟 1. ?挑取幾個含質粒的酵母宿主菌菌落，接種于10 ml 非選擇性培養基，于30℃培養過夜。 2. ?在非選擇性平板上于30℃培養2天以得到單菌落，大多數情況下，可以得到約200~300個單菌落（約每平板100個菌落）。 3.
酵母細胞中質粒的加工實驗
定位突變質粒缺口修復技術和等位基因修復技術實驗材料酵母菌株試劑、試劑盒帶選擇標記的YRp或YCp質粒適當的限制性內切核酸酶相應選擇標記突變的酵母菌質粒標記的選擇培養基平板儀器、耗材培養皿實驗步驟1）將目的基因亞克隆到帶恰當的選擇標記的YRp或YCp質粒上。2) 在基因內部的兩個限制酶酶切位點上切割以
酵母細胞中質粒的加工實驗
實驗方法原理 在非選擇性生長條件下，大多數大腸桿菌/酵母菌穿梭載體的丟失頻率大約1%。 在本方案中含質粒的酵母菌株接種于非選擇性平板上以分離質粒并可得到單菌落。然后通過影印到選擇性平板上可以鑒別丟失了質粒的菌株實驗材料 含質粒的酵母菌株試劑、試劑盒 YPD或其他非選擇性液體培養基及平板CM缺失成分
酵母細胞質粒提取步驟和酵母細胞破壁方法
酵母細胞的細胞壁比較厚，不容易破壁，不如大腸桿菌的質粒 容易提取，最近做了些釀酒酵母的實驗，從釀酒酵母中提取質粒，現在就總結下實驗的方法和步驟。酵母細胞質粒提取 步驟1. 接種單菌落(待檢測酵母細胞)于25mLYNB(補加氨基酸 營養物)培養基中，30℃振蕩培養過夜。2.第二天取一滴菌液于進行顯微鏡
質粒的酵母直接轉化
實驗方法原理將待測基因與Gal4或LexA或其他合適蛋白的DNA結合域融合構建誘餌質粒；將誘餌質粒轉化缺乏報告基因啟動子的酵母細胞株中，選擇被轉化的酵母；再將文庫質粒轉化到酵母中實驗材料單菌落試劑、試劑盒PLATE溶液載體DNA轉化質粒DNA儀器、耗材離心管離心機實驗步驟1、 用牙簽從平板中挑取單菌
酵母質粒載體的特點
酵母質粒載體既可以在大腸桿菌復制與擴增、又可以在酵母系統中復制與擴增，故此類載體又稱為穿梭載體(shuttlevector)。在基因工程中，應用上述病毒表達載體在哺乳動物細胞中進行中、小規模的表達是十分實際的。還要有對組織培養技術十分熟悉的前提。但病毒載體的運用仍然存在技術較難、耗時間和不經濟的問題
酵母質粒載體的特點
酵母質粒載體既可以在大腸桿菌復制與擴增、又可以在酵母系統中復制與擴增,故此類載體又稱為穿梭載體(shuttlevector)。 在基因工程中,應用上述病毒表達載體在哺乳動物細胞中進行中、小規模的表達是十分實際的。還要有對組織培養技術十分熟悉的前提。但病毒載體的運用仍然存在技術較難、耗時間和不經
質粒的酵母直接轉化
1．用牙簽從平板中挑取單菌落（直徑2～3mm），轉移到1.5ml的無菌離心管中。2．將10μl載體DNA（100μg）與10μl轉化質粒DNA混合，振蕩均勻。（若轉化DNA是用未經RNA酶處理的“mini－prep DNA”方法制得，則不需加載體DNA）。3．加0.5ml PLATE溶液，振蕩。PL
酵母質粒載體的概念和分類
酵母質粒載體是基因表達載體的一種，既可以在大腸桿菌中、又可以在酵母系統中進行復制與擴增，所以也稱為穿梭載體。它分為整合載體和自我復制載體兩類。①整合載體：它帶有一個酵母URA3標志基因和大腸桿菌的復制和報告基因。②自我復制載體：該類載體在酵母中可以自我復制。
關于酵母質粒載體的基本介紹
酵母質粒載體是基因表達載體的一種,既可以在大腸桿菌中、又可以在酵母系統中進行復制與擴增,所以也稱為穿梭載體。它分為整合載體和自我復制載體兩類。 ①整合載體：它帶有一個酵母URA3標志基因和大腸桿菌的復制和報告基因。 ②自我復制載體：該類載體在酵母中可以自我復制。
酵母質粒提取離心法操作步驟
酵母質粒提取離心法操作步驟：1.接種5 mL含有酵母攜帶所需質粒的YDP培養液，將其振蕩培養在30℃16-24小時。2.取1-3ml酵母培養菌體(使用< 2×107細胞)，室溫下5000× g離心5 min。3.棄培養液，收集菌體，加入480μL Buffer SE和30μL Lyticase so
酵母菌落直接質粒轉化法
酵母菌落直接質粒轉化法1．用牙簽從平板中挑取單菌落（直徑2～3mm），轉移到1.5ml的無菌離心管中。2．將10μl載體DNA（100μg）與10μl轉化質粒DNA混合，振蕩均勻。（若轉化DNA是用未經RNA酶處理的“mini－prep DNA”方法制得，則不需加載體DNA）。3．加0.5ml PL
酵母質粒載體具備的條件有哪些？
一個理想的基因載體應該具有以下幾個基本條件： ①能在宿主細胞進行獨立和穩定的DNA自我復制,并在其DNA中插入外源基因后,仍然保持著穩定的復制狀態和遺傳特性； ②易于從宿主細胞中分離,并進行純化； ③在其DNA序列中,具有適當的限制性內切酶位點(最好是單一酶切位點)。這些位點位于DNA復制
酵母質粒載體的基本信息介紹
酵母質粒載體是基因表達載體的一種,既可以在大腸桿菌中、又可以在酵母系統中進行復制與擴增,所以也稱為穿梭載體。它分為整合載體和自我復制載體兩類。①整合載體：它帶有一個酵母URA3標志基因和大腸桿菌的復制和報告基因。由于質粒DNA與酵母基因組DNA之間發生了同源重組,在轉化的細胞中可以檢測到質粒的整
為什么質粒酵母電轉化不進去
釀酒酵母的電轉感受態制備方法和電轉化方法(1)接種工業酒精酵母至30 mL液體YEPD培養基，30度培養12 h；(2)取培養物以1%的接種量轉接到30 mL新鮮YEPD液體培養基中，30度培養8 h，使菌體達到同步生長狀態；(3)將酵母培養物置于冰上放置30 min后，6,000 r/min離心5
克隆化酵母DNA的操作實驗——穿梭質粒
實驗材料酵母實驗步驟1. ?構建其必需基因的染色體拷貝已被破壞的單倍體菌株，及帶有完整的必需基因和URA3選擇標志的YEp質粒。2. ?將必需基因亞克隆到YCp載體（帶有URA3以外的選擇標志），取約10~20 μg 用羥胺或其他技術進行誘變。3. ?轉化至步驟1的菌株中，在添加了尿嘧啶的省卻成分平
克隆化酵母DNA的操作實驗——質粒缺口修復
實驗材料酵母實驗步驟1. ?將目的基因亞克隆到YRp質粒，通過基因內的兩個限制性位點在基因中創造一個缺口區，在缺口兩側留下≥100~250 bp 的同源區，凝膠電泳純化質粒骨架大片段。?2. ?用1~10 μg?缺口質粒DNA轉化待拯救的含突變等位基因的酵母菌株，通過YRp質粒上的選擇基因進行選擇，
酵母遺傳學方法4：質粒DNA的羥基突變
質粒DNA的羥基突變1．臨用之前制備羥胺溶液，置冰上待用。2．將用氯化銫純化的10μg質粒DNA加到含500μl羥胺溶液的微型離心管。3．在37℃下培養20小時。4．加入10μl的5mol/L NaCl、50μg 1mg/ml的牛血清蛋白（BSA）和1ml無水乙醇終止反應，置－70℃沉淀DNA10分
酵母活細胞染色
實驗步驟展
細胞化學詞匯質粒表型
中文名稱：質粒表型英文名稱：plasmid phenotype定 義：由于質粒的存在而賦予宿主細胞在一定環境條件下所表現的性狀。包括對抗生素的抗性、產生抗生素、某些代謝特征和宿主控制的限制與修飾作用等。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
細胞化學詞匯質粒獲救
中文名稱：質粒獲救英文名稱：plasmid rescue定 義：一種通過構建同源輔助質粒，使攜帶外源DNA的外來質粒能與之重組而被攝入細菌的技術。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
細胞化學詞匯質粒復制
中文名稱：質粒復制英文名稱：plasmid replication定 義：質粒在宿主細胞內獨立于細菌染色體通過復制機制增加其拷貝數的過程。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
細胞化學詞匯質粒分配
中文名稱：質粒分配英文名稱：plasmid partition定 義：在原核細胞分裂過程中質粒從親代細胞進入子代細胞的過程。該行為由質粒分子上特定的編碼主動分配體系的par區段負責，其直接影響細胞分裂中質粒拷貝的分配行為。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
細胞化學詞匯嵌合質粒
中文名稱：嵌合質粒英文名稱：chimeric plasmid定 義：一種在體外通過連接不同的質粒片段而構建成的雜合質粒分子。在轉化進入宿主細胞后，會形成具有新的生物學功能的復制子。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
酵母細胞破碎實驗
實驗材料?酵母菌試劑、試劑盒?玻璃珠破菌緩沖液儀器、耗材?玻璃珠拍打器實驗步驟 1.? 培養并收集酵母菌細胞，在酵母消解酶緩沖液重懸菌體沉淀之前，測定壓緊細胞的體積，以下所有步驟均在4℃進行。2.? 用1體積的玻璃珠破菌緩沖液重懸細胞。3.? 用2體積的玻璃珠破菌緩沖液與細胞混合，加4體積冰冷的酸洗
質粒DNA導入細菌細胞實驗
實驗材料 菌落質粒DNA試劑、試劑盒 CaCl2儀器、耗材 培養基平板實驗步驟 1. ?接種一個單菌落于50 ml LB培養液中，于37°C中速搖床培養過夜（250 r/min)。2. ?往一個2 L的燒瓶中加人400 ml LB培養液，再加入4 ml過夜培養液，于37°C搖床（250 r/min）
質粒DNA導入細菌細胞實驗
CaCl2轉化法 一步法制備和轉化感受態細菌實驗 電轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 菌落 質粒DNA