Folin酚試劑法測定蛋白質含量
一、 目的 掌握Folin-酚法測定蛋白質含量的原理和方法,熟悉分光光度計的操作。 二、原理 Folin-酚試劑法包括兩步反應:第一步是在堿性條件下,蛋白質與銅作用生成蛋白質-銅絡合物;第二步是此絡合物將磷鉬酸-磷鎢酸試劑(Folin 試劑)還原,產生深藍色(磷鉬藍和磷鎢藍混合物),顏色深淺與蛋白質含量成正比。此法操作簡便,靈敏度比雙縮脲法高100 倍,定量范圍為5~100μg 蛋白質。Folin 試劑顯色反應由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用。此外,不同蛋白質因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強度稍有不同。 三、實驗材料、主要儀器和試劑 1.實驗材料 綠豆芽下胚軸(也可用其它材料如面粉) 2.儀器 (1)722 型(或721 型)分光光度計 (2)4 000r/min 的離心機 (3)分析天平 (4)容量瓶(50......閱讀全文
Folin酚試劑法測定蛋白質含量
一、 目的 掌握Folin-酚法測定蛋白質含量的原理和方法,熟悉分光光度計的操作。 二、原理 Folin-酚試劑法包括兩步反應:第一步是在堿性條件下,蛋白質與銅作用生成蛋白質-銅絡合物;第二步是此絡合物將磷鉬酸-磷鎢酸試劑(Folin 試劑)還原,產生深藍色(磷鉬藍和磷鎢
蛋白質含量的測定:Folin酚試劑法(Lowry法)和考馬斯...
蛋白質含量的測定—Folin-酚試劑法(Lowry法)和考馬斯亮藍法 1.學習Folin-酚法測定蛋白質含量的原理和方法。 2. 進一步掌握分光光度法——求標準曲線、準確測定未知樣品、正確使用儀器。 ? 原理 ? 蛋白質濃度可以從它們
folin酚試劑法測定蛋白質含量的原理
此法的顯色原理與雙縮脲法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深藍色的原因是:在堿性條件下,蛋白質中的肽鍵與銅結合生成復合物。 Folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產生深藍色(
folin酚試劑法測定蛋白質含量的注意事項
進行測定時,加Folin—酚試劑時要特別小心,因為該試劑僅在酸性pH條件下穩定,但上述還原反應只在pH=10的情況下發生,故當Folin一酚試劑加到堿性的銅—蛋白質溶液中時,必須立即混勻,以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑 被破壞之前,還原反應即能發生。 此法也適用于酪氨酸和色氨酸的定量測定。[1]
有哪些因素可干擾Folin酚測定蛋白質含量
酚類、檸檬酸、硫酸銨、Tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素(0.5%),硫酸納(1%),硝酸納(1%),三氯乙酸(0.5%),乙醇(5%),乙醚(5%),丙酮(0.5%)等溶液對顯色無影響,但這些物質濃度高時,必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液,只須加濃碳酸鈉—氫氧化鈉溶液,
關于Folin酚法應用試劑的介紹
試劑 (1)試劑甲(A,B): (A) 10克 Na2CO3,2克 NaOH和0.25克酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6·4H2O)。溶解于500毫升蒸餾水中。 (B) 0.5克硫酸銅(CuSO4·5H2O)溶解于100毫升蒸餾水中,每次使用前,將50份(A)與1份(B)混合,即為試劑甲。
Folin酚試劑法的優缺點有哪些
優點:靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多。缺點:費時間較長,要精確控制操作時間,標準曲線也不是嚴格的直線形式,且專一性較差,干擾物質較多。對雙縮脲反應發生干擾的離子,同樣容易干擾folin-酚反應(Lowry反應)。而且對后者的影響還要大得多。
福林酚試劑法如何測定蛋白質含量
lowry法一般測量含量少于5微克的物質,耗費時間長約40-60分鐘.操作要嚴格計時;顏色深淺隨不同蛋白質變化,靈敏度高biuret法適用于1-20mg.用于快速測定.約20-30分鐘,但不太靈敏;由于不同蛋白質顯色相似,因此靈敏度比folin-酚試劑法差的很遠
蛋白質含量測定實驗——folin—酚試劑法
蛋白質含量測定實驗可以用于:(1)測定蛋白質濃度;(2)檢測所提取的蛋白質含量。實驗方法原理這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難(現在已可以訂購),近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即f
Folin酚法的實驗所需試劑與器材
試劑(1)試劑甲(A,B):(A) 10克 Na2CO3,2克 NaOH和0.25克酒石酸鉀鈉?(KNaC4H4O6·4H2O)。溶解于500毫升蒸餾水中。(B) 0.5克硫酸銅(CuSO4·5H2O)溶解于100毫升蒸餾水中,每次使用前,將50份(A)與1份(B)混合,即為試劑甲。(2)試劑乙:在
酚試劑(Lowry)法測血清蛋白質含量
一、 相關理論1、 血清(漿)蛋白質是血清(漿)固體成分中含量最多、組成復雜、功能廣泛的一類化和物。2、 血清(漿)蛋白質的分類:目前已研究的有300 余種,已分離提純的有100 余種,大部分在肝臟合成。1) 鹽析法可將血漿蛋白分為白蛋白(Albumin, Alb 或A)和球蛋白(Globulin,
olin—酚試劑法(lowry法)測蛋白質含量
一、實驗原理這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難(現在已可以訂購),近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生
Folin酚法的實驗原理
這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難(可訂購),逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深藍色的原因是:在堿性條件
蛋白質的定量測定——福林酚法(Folin—酚試劑法)
實驗原理 Folin—酚試劑法最早是由Lowry確定的測定蛋白質濃度的基本方法。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這個方法的優點是靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多,缺點是費時較
血清免疫球蛋白的提取分離、純化及鑒定4
V 蛋白質含量測定一、雙縮脲法測定蛋白質濃度(一)目的了解并掌握雙縮脈法測定蛋白質濃度的原理和方法。(二)原理具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應,在堿性溶液中蛋白質與硫酸銅形成紫色絡合物,在 540nm 處有最大吸收。在一定濃度的范圍內,蛋白質濃度與雙縮脲反應所呈的顏色深淺成正比,可用比色
鴨源性核酸PCR熒光探針試劑盒Folin-酚試劑法操作分析
一、鴨源性核酸PCR-熒光探針試劑盒Folin-酚試劑法目前實驗室較多用用Folin-酚法測定蛋白質含量,此法的特點是靈敏度高,較雙縮脲高兩個數量級,較紫外法略高,操作稍微麻煩,反應約在15分鐘有zui大顯色,并zui少可穩定幾個小時,其不足之處是干擾因素較多,有較多種類的物質都會影響測定結果的準確
關于Folin酚法的相關介紹
Folin-酚法(Lowry法)最靈敏的蛋白質測定方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難,近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。最早由Lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。
概述Folin酚法的實驗原理
這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難(可訂購),逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。 此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深藍色的原因是:在
Folin酚法的用途和功效
Folin-酚法(Lowry法)最靈敏的蛋白質測定方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難,近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。最早由Lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。
福林酚比色法原理
原理蛋白質與福林(Folin)-酚試劑反應,產生藍色復合物。作用機理主要是蛋白質中的肽鍵與堿性銅鹽產生雙縮脲反應,同時也由于蛋白質中存在的酪氨酸與色氨酸同磷鉬酸-磷鎢酸試劑反應產生顏色。呈色強度與蛋白質含量成正比,是檢測可溶性蛋白質含量最靈敏的經典方法之一。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
動物肝臟RNA的制備(苯酚法)和純度測定(二苯胺顯色法...1
動物肝臟RNA的制備(苯酚法)和純度測定(二苯胺顯色法和紫外吸收法原理細胞內大部分RNA 均與蛋白質結合在一起,以核蛋白的形式存在。因此分離RNA時必須使RNA 與蛋白質解離,并除去蛋白質。除去蛋白質的方法主要有:(1)用氯仿-辛醇混合液劇烈振蕩,使蛋白質變性。(2)在冷的2mol/L鹽酸胍溶液
地衣酚顯色法測定RNA含量
原理?核糖核酸與濃鹽酸共熱時,即發生降解,形成的核糖繼而轉變為糠醛,后者與3,5-二羥基甲苯(地衣酚)反應呈鮮綠色,該反應需用三氯化鐵或氯化銅作催化劑,反應產物在670nm處有最大吸收。RNA在20~250μ?g范圍內,光吸收與RNA的濃度成正比。地衣酚反應特異性較差,凡戊糖均有此反應,DNA和其他
Folin酚法的實驗操作方法
標準曲線測定取16支大試管,1支作空白,3支留作未知樣品,其余試管分成兩組,分別加入0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升標準蛋白質溶液(濃度為250mg/L)。用水補足到1.0毫升,然后每支試管加入5毫升試劑甲,在旋渦混合器上迅速混合,于室溫(20~25℃)放置10分鐘。再逐管加入
福林酚法定量測定蛋白質
實驗概要本實驗用福林酚法(Folin—酚試劑法)測定了蛋白質的含量。實驗原理Folin—酚試劑法最早是由Lowry確定的測定蛋白質濃度的基本方法。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏