基因重組以及外源基因在大腸桿菌中的誘導表達
一、實驗目的學習和掌握基因重組以及外源基因在大腸桿菌中誘導表達的方法。二、實驗原理通過基因重組可將外源基因導入細胞，并使之進行擴增或表達。在生命科學的研究中，基因重組已經不僅是研究的目的（如基因工程的上游工程），而且日益成為一項重要的研究手段（如基因功能研究中將研究對象基因單獨分離后重組，可以研究其表達、調控過程以及功能等），所以有著不可替代的地位。本實驗通過最基本的流程進行重組操作，目的是使外源基因在大腸桿菌中進行表達；有條件的話，可以進行表達條件的優化，篩選出高效的穩定的表達工程菌。外源基因（可通過PCR，化學合成或直接從自然材料中分離方法獲得）被克隆在Lac啟動子下游，與表達質粒載體連接構成重組體，經CaCl2法轉化導入受體大腸桿菌細胞內。當培養基含有IPTG（異丙基硫代-β-D半乳糖）時，Lac啟動子被誘導而啟動其下游基因進行表達，從而在大腸桿菌細胞中產生外源基因產物。通過電泳可檢測表達產物蛋白的存在并估計其表達量，也可......閱讀全文
基因重組以及外源基因在大腸桿菌中的誘導表達
一、實驗目的學習和掌握基因重組以及外源基因在大腸桿菌中誘導表達的方法。二、實驗原理通過基因重組可將外源基因導入細胞，并使之進行擴增或表達。在生命科學的研究中，基因重組已經不僅是研究的目的（如基因工程的上游工程），而且日益成為一項重要的研究手段（如基因功能研究中將研究對象基因單獨分離后重組，可以研究其
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達4
（3）CHO細胞穩定表達系統：動物細胞瞬時表達系統中外源基因沒有穩定地整合到宿主細胞染色體中，一染色體外DNA的形式存在。因而只能瞬時表達。要使外源基因在宿主細胞中高效、穩定地表達，必須建立一個穩定表達系統，包括適宜的表達載體、有效的基因轉染、標記基因和目標基因的選擇與共擴增、受體適當的受體細胞和培
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達3
（6）遺傳標記： 從成千上萬個哺乳細胞中，檢測出極少數的含DNA重組體的轉染細胞，并鑒定已導入外源DNA是哺乳動物細胞基因表達系統的一個關鍵內容。因此，在真核生物表達載體上必須附有標記基因，才能進行篩選。常用的標記基因有：胸苷激酶基因（thymidine kinase，TK）、二氫葉酸還原酶
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達2
2.包涵體的分離與純化細胞破碎時提取細胞內產物的關鍵。對于細菌的裂解常用的有酶溶法、超聲破碎法、化學滲透法、玻璃珠研磨等。包涵體可通過超聲波、勻漿等常規的方法是菌體破碎后，離心就可得到。密度梯度離心后可得到高純度的包涵體。包涵體一般不溶于水，為了獲得可溶性的蛋白質可加入強蛋白質變性劑后使其溶解。一般
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達1
通過外源DNA的重組、克隆、以及鑒定，可以獲得所需的特異DNA克隆。外源克隆基因在某種表達載體及適宜的宿主細胞中可表達為相應的蛋白質，這就組成了外源基因的蛋白表達系統。表達后的蛋白質必須具有原來的生物學活性，這是基于正確的基因轉錄、轉錄后加工、mRNA翻譯及翻譯后修飾，同時與表達載體的結構和表達體系
外源DNA的基因特點
基因有兩個特點，一是能忠實地復制自己，以保持生物的基本特征；二是基因能夠“突變”，突變絕大多數會導致疾病，另外的一小部分是非致病突變。非致病突變給自然選擇帶來了原始材料，使生物可以在自然選擇中被選擇出最適合自然的個體。含特定遺傳信息的核苷酸序列，是遺傳物質的最小功能單位。除某些病毒的基因由核糖核酸（
外源基因的誘導表達
1．目的了解外源基因在原核細胞中表達的特點和方法。2．原理外源基因克隆在含有lac啟動子的表達系統中。先讓宿主菌生長，lac I產生的阻遏蛋白與lac操縱基因結合抑制下游的外源基因轉錄。向培養基中加入誘導物IPTG（異丙基硫代-b-D-半乳糖），解除抑制使外源基因大量表達。表達的蛋白可經SDS-
外源基因轉化的用途
利用外源基因轉化已經產生了轉基因學科，利用重組DNA技術可以將以前沒有的新特性引入生物體。通過轉基因創造的生物體很多，從細菌到哺乳動物，包括綿羊和猴子，它們有多種用途：用于研究發育遺傳學、疾病過程和基因調控等。轉基因動物可以生產藥物，并增加牛奶或肉類的產量。來自轉基因動物的組織和器官可以用于輸血和移
細胞化學詞匯外源基因
中文名稱：外源基因英文名稱：exogenous gene定 義：經轉基因步驟導入受體細胞的基因。應用學科：遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
外源基因轉移技術介紹
外源基因的轉移：基因轉移（gene transfer）是將外源基因導入細胞內，其轉移方法較多，常用的要有下列幾類：1）化學法：將正常基因DNA（及其拷貝）與帶電荷物質和磷酸鈣、DEAE－葡萄糖或與若干脂類混合，形成沉淀的DNA微細顆粒，直接傾入培養基中與細胞接觸，由于鈣離子有促進DNA透過細胞有作用
關于外源基因的基本介紹
將外源基因導入生物體的過程稱為轉化。這可以自然發生，也可以人為發生。人工轉化轉染方法包括：（a）化學方法，有磷酸鈣沉淀法、DEAE -葡聚糖絡合和脂質介導的DNA轉化法；（b）物理方法，包括電穿孔、微注射和基因槍法；（c）重組法，比如利用病毒作為載體。 細菌、植物和動物的基因轉化具有重要的研究
外源基因的概念和功能特點
中文名稱外源基因英文名稱exogenous gene定 義經轉基因步驟導入受體細胞的基因。應用學科遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
外源基因在真核細胞表達技術
生化方法l??????磷酸鈣介導的質粒DNA轉染真核細胞1.??????轉染前24 h，通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60 mm組織培養皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃溫箱孵育20～24 h。轉染前1 h換液。2.?????
外源基因在真核細胞表達技術
生化方法*?磷酸鈣介導的質粒DNA轉染真核細胞轉染前24 h，通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60 mm組織培養皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃溫箱孵育20～24 h。轉染前1 h換液。2.按照下屬方法制備磷酸鈣-DNA沉淀：
外源基因在原核細胞表達技術
原核細胞l??????用IPTG誘導啟動子在大腸桿菌中表達克隆化基因?含重組表達載體的大腸桿菌菌株的構建1.??????PCR修飾或限制性內切酶消化分離DNA片段，片段5’端和3’端帶有與IPTG誘導表達載體對應的限制酶位點。2.??????含靶cDNA/基因的DNA片段與表達載體連接。3.????
分子遺傳學詞匯外源基因
中文名稱：外源基因英文名稱：exogenous gene定 義：經轉基因步驟導入受體細胞的基因。應用學科：遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
外源基因在原核細胞表達技術
原核細胞*用IPTG誘導啟動子在大腸桿菌中表達克隆化基因?含重組表達載體的大腸桿菌菌株的構建1.PCR修飾或限制性內切酶消化分離DNA片段，片段5’端和3’端帶有與IPTG誘導表達載體對應的限制酶位點。2.含靶cDNA/基因的DNA片段與表達載體連接。3.重組質粒轉化有lacIq?等位基因的大腸桿菌
外源基因進入細胞主要方法介紹
外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法、脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和
外源基因人工轉化轉染的方法
將外源基因導入生物體的過程稱為轉化。這可以自然發生，也可以人為發生。人工轉化轉染方法包括：（a）化學方法，有磷酸鈣沉淀法、DEAE -葡聚糖絡合和脂質介導的DNA轉化法；（b）物理方法，包括電穿孔、微注射和基因槍法；（c）重組法，比如利用病毒作為載體。
外源基因在真核細胞中的表達系統
1. 真核生物表達的優越性和必要性① 真核生物具有轉錄后加工系統，可識別并刪除基因中的內含子，剪切加工為成熟mRNA.②具備完善的翻譯后加工系統，可進行糖基化、乙酰化等修飾，使蛋白形成正確的天然構型，因而真核生物表達系統產生的蛋白更接近天然狀態，有利于其功能、生物活性的研究。③某些真核細胞可將基因表
外源基因在原核細胞中的表達系統
外源基因在原核細胞中表達是基因工程操作中最初取得成功的途徑。1 原核生物基因表達的特點同所有的生命過程一樣，外源基因在原核細胞中的表達包括兩個主要過程:即 DNA轉錄成mRNA和 mRNA翻譯成蛋白質。與真核細胞相比，原核細胞的表達有以下特點:①原核生物只有一種RNA 聚合酶(真核細胞有三種)識別原
基因重組應用——轉基因技術
基因重組中轉基因技術的理論基礎來源于進化論衍生來的分子生物學。基因片段的來源可以是提取特定生物體基因組中所需要的目的基因，也可以是人工合成指定序列的DNA片段。基因重組DNA片段被轉入特定生物中，與其本身的基因組進行重組，再從重組體中進行數代的人工選育，從而獲得具有穩定表現特定的遺傳性狀的個體。該技
基因重組的應用——基因診斷
通過使用基因芯片分析人類基因組，可找出致病的遺傳基因。癌癥、糖尿病等，都是遺傳基因缺陷引起的疾病。醫學和生物學研究人員將能在數秒鐘內鑒定出Z終會導致癌癥等的突變基因。借助一小滴測試液，醫生們能預測藥物對病人的功效，可診斷出藥物在ZL過程中的不良反應，還能當場鑒別出病人受到了何種細菌、病毒或其他微生物
基因重組和DNA重組區別
基因重組是由于不同DNA鏈的斷裂和連接而產生DNA片段的交換和重新組合，形成新DNA分子的過程。 在人類的生殖細胞中發現的46條染色體發生在生物體內基因的交換或重新組合。基因重組是生物遺傳變異的一種機制，包括同源重組、位點特異重組、轉座作用和異常重組四大類。DNA重組指DNA分子內或分子間發生的遺傳
首個基因重組人源化單克隆抗體藥物上市
人民網北京7月13日電 (記者施芳)在科技部和863計劃“十五”、“十一五”的連續支持下，經過8年努力，我國第一個基因重組人源化單克隆抗體藥物——泰欣生(尼妥珠單抗)，已經獲得國家藥監局的新藥證書、生產批文和GMP認證，投入批量工業化生產，于近日成功上市。 多年來，抗體人源化一直是我國抗體技術攻關
基因重組和基因突變區別
1、基因突變是基因的從無到有，突變產生新基因。基因重組是原有基因的重新組合，產生的是新基因型。2、發生的時間：基因重組發生的時期是：減數分裂中四分體時期同源染色體的非姐妹染色單體之間的局部交換和減數diyi次分裂后期非同源染色體的而重新組合；基因突變發生的時間是在有絲分裂和減數分裂的間期。
基因重排與基因重組的區別
基因重排：通過基因的轉座，DNA的斷裂錯接而使正常基因順序發生改變基因重組: 是由于不同DNA鏈的斷裂和連接而產生DNA片段的交換和重新組合，形成新DNA分子的過程。也就是說,,基因重排是一個基因內DNA排列發生改變,,而使這個基因改變了,如出現新的基因就是靠這種方法,而基因重組卻是幾個不同基因互相
基因重組和基因重排的區別
基因重排：通過基因的轉座，DNA的斷裂錯接而使正常基因順序發生改變。基因重排是一個基因內DNA排列發生改變,而使這個基因改變了,如出現新的基因就是靠這種方法基因重組: 是由于不同DNA鏈的斷裂和連接而產生DNA片段的交換和重新組合，形成新DNA分子的過程。基因重組卻是幾個不同基因互相改變位置,而使的
基因重組的定義
重組（recombination） 雜交后代的個體中出現了親代所沒有的基因組合的現象。
基因重組的簡述
基因重組是由于不同DNA鏈的斷裂和連接而產生DNA片段的交換和重新組合，形成新DNA分子的過程。1974年波蘭斯吉巴爾斯基（Waclaw Szybalski）稱基因重組為合成生物學，1978年他在《基因》期刊中寫道：限制酶將帶領我們進入合成生物學的新時代。