核酸蛋白轉移電泳及雜交（SouthernBlot、NorthernBlot和...2
(10)倒去預雜交液，加入含探針的雜交液封口，42℃ 6h或過夜。 (11)取出轉移膜，按以下條件洗膜 1×SSC，0.1%SDS室溫2×15分鐘 0.25SSC，0.1%SDS,42℃ 2×15分鐘，氣中干燥。 (12)將雜交后的膜曝光于X光片，暗盒中放射自顯影2～7天，-70℃。 (13)X片顯影、定影，然后讀片 結果分析：此雜交技術可以對基因結構進行分析。雜交陰性帶的大小，分布規律及根據帶條信號強度測量其含量。 二、RNA Northern Blot及雜交 此法是將RNA分子在變性瓊脂糖凝膠中可相互分離，隨后將RNA轉移至硝酸纖維素濾膜上，用放射性標記的探針進行DNA-RNA雜交，此法是研究 RNA(特別是mRNA)的主要方法之一，可測量RNA的含量和大小。 1、配液：Northern 預雜交液：12.5m 1mol/l K3PO4 pH7.4 125ml......閱讀全文
核酸蛋白轉移電泳及雜交（Southern－Blot、Northern－Blot和...2
(10)倒去預雜交液，加入含探針的雜交液封口，42℃ 6h或過夜。 (11)取出轉移膜，按以下條件洗膜 1×SSC，0.1%SDS室溫2×15分鐘 0.25SSC，0.1%SDS,42℃ 2×15分鐘，氣中干燥。 (12)將雜交后的膜曝光于X光片，暗盒中放射自顯影2～
核酸蛋白轉移電泳及雜交（Southern－Blot、Northern－Blot和...1
一、DNA Southern Blot及雜交 本技術可用于基因組DNA特定序列定位，尤其可分析某些基因的限制性內切酶長度多態性，對遺傳性疾病的早期基因診斷、產前診斷或基因變異等方面的研究有應用價值，其過程包括：樣品DNA內切酶水解、水解片斷的瓊脂糖凝膠電泳分離、分離后水解片斷的轉移(固定)、特異
核酸雜交技術(Northern－Blot、Southern－Blot和探針標記）
（一）Southern Blot原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進
Northern－Blotnorthern雜交
Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose GelThe gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electroph
Southern－blot雜交鑒定
1）取10ul待測DNA，于一定濃度的瓊脂糖凝膠上進行電泳。(20mL,1.0%凝膠,)2) 凝膠用溴化乙錠染色，切掉凝膠四周多余部分，并在凝膠的一角作一記號, 拍照記錄電泳結果(拍照時, 凝膠旁放一尺子)。3) 雜交用膠的制備 (做以下步驟兩組合一)A.將凝膠浸沒入30mL 0.25mol/L H
核酸蛋白轉移電泳及雜交
一、DNA Southern Blot及雜交?本技術可用于基因組DNA特定序列定位，尤其可分析某些基因的限制性內切酶長度多態性，對遺傳性疾病的早期基因診斷、產前診斷或基因變異等方面的研究有應用價值，其過程包括：樣品DNA內切酶水解、水解片斷的瓊脂糖凝膠電泳分離、分離后水解片斷的轉移(固定)、特異性D
Southern－Blot雜交的原理、步驟及應用
原理Southern印跡雜交技術是分子生物學領域中最常用的具體方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原 則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方 法的靈敏性，綜合凝膠電泳和 核酸內切限制酶分析的結果，便可繪制出DNA分子的限制圖
Northern－Blot
Northern Blot Northern Blot ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 20XMOPS 緩沖液 20
Northern－Blot
試劑、試劑盒 20XMOPS 緩沖液 20XSSC 50XDenhardt 液 雜交液 10%SDS儀器、耗材 水平電泳裝置 水浴 硝酸纖維素膜或尼龍膜 3 MM 濾紙 紫外交聯儀 雜交管 雜交爐 [32P] 標記的 DNA 或 RNA 探針實驗步驟 一、材料與設備1) 水平電泳裝置2) 水浴3)
Southern－Blot
1. Run gel (0.8 -1.0% agarose is best). For yeast chromosomal Southerns, digest 20 μg DNA. Use 50 ml minigel for most purposes. Photograph gel, but mi
Northern－blot實驗操作步驟（2）
二、將變性RNA轉移至硝酸纖維素濾膜電泳完畢后，可立即將乙醛酰RNA自瓊脂糖凝膠轉移至硝酸纖維素濾膜，有以下幾種轉移方法：毛細管洗脫法、真空轉移法和電印跡法。毛細管洗脫法如下所述， 真空轉移法和印跡法則按有關儀器生產廠家產品說明書進行。盡管有人認為在轉移前對瓊脂糖凝膠進行預處理實屬不必（Th
原位雜交和核酸雜交是一種嗎
核酸雜交方法是一種分子生物學的標準技術,用于檢測DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）.經典的核酸雜交方法是將DNA或RNA先轉移并固定到硝酸纖維素或尼龍膜上,與其互補的單鏈DNA或RNA探針用放射性或非放射性標記,在膜上雜交時,探針通過氫鍵與其互補的靶序列結合,洗去未結合的游離探針后,經放射自顯影
免疫印跡法和免疫捕獲法的區別
免疫印跡實驗和酶聯免疫的區別如下：免疫印記一般是要把檢測的樣品轉到膜上,再用抗體檢測酶聯免疫一般是把抗體固定在支持物上,再與要檢測的樣品反應,目標物就會與抗體結合而留在支持物上。WB所檢測的一般是抗原，而Elisa抗原抗體都可以檢測。WB只能用抗體去檢測你的蛋白樣品。ELISA可以固定抗原也可以固定
Northern－blot技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳 這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳， 因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳 這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳， 因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot實驗
Northern blot技術 Northern Blot ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，
Northern－Blot技術
[儀器、試劑、材料]（一）儀器恒溫水浴箱，電泳儀，凝膠成像系統，真空轉移儀，真空泵，UV 交聯儀，雜交爐，恒溫搖床，脫色搖床，漩渦振蕩器，分光光度計，微量移液器，電爐（或微波爐），離心管，燒杯，量筒，三角瓶，等。?（二）材料總RNA樣品或mRNA樣品，探針模板DNA(25 ng)，尼龍膜（三）試劑N
Protocol－of－Northern－blot
Protocol of Northern blot質粒的轉化和擴增質粒的鑒定目的基因片段的切割3.1樣品雙酶切(175μl水解體系)DW 115μlBuffer B(10×) 17.5μlBaM H 15μlPst I 17μlDNA(MMP-9) 16μlBSA 4.5μl37℃水浴，3h。3.2
Northern－blot實驗
實驗方法原理 Northern blot的基本概述是將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，用放射性或非放射性標記DNA或RNA特異性探針對固定于固相膜上的mRNA進行雜交，洗膜去除非特異性結合雜交信號，經放射自顯影或現色反應，對雜交信號進行分析。將雜交的m
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Genomic－Southern－Blot
SolutionsProtocol:Digest 5-10 μg genomic DNA overnight with restriction enzyme of choice.Run digested gDNA on 0.8% TAE gel with marker (with no ethidi
Southern－blot實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線
Southern－blot實驗
Southern blot可應用于：（1）檢測重組DNA；（2）分析DNA樣品中是否有與探針序列同源的DNA片段；（3）驗證檢測片段的分子量大小。實驗方法原理具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠
Southern－blot實驗
實驗方法原理?互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的，可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA，也可以是細胞總DNA 或總RN
Northern－blot實驗方法
Northern blot 是一種通過檢測RNA的表達水平來檢測基因表達的方法，通過northernblot的方法可以檢測到細胞在生長發育特定階段或者脅迫或病理環境下特定基因表達情況。Northern blot 首先通過電泳的方法將不同的RNA分子依據其分子量大小加以區分，然后通過與特定基因
western－blot－的原理及操作步驟
原理Western Blot與Southern印跡雜交或Northern印跡雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素膜NC膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
酶聯免疫電泳轉移分析法
該法是分析蛋白質的一種新方法，由southern blot衍化而來，后者是由Southern E.M. 所創建，即將在瓊脂糖凝膠中電泳后的DNA，原位吸附于硝酸纖維素膜上，再用放射性同位素如32P等標記的單鏈RNA或DNA探針，與板上的核酸分子雜交，從而達到分析DNA中基因位置和順序的目的。以后
Northern－Blot實驗儀器試劑和方法步驟（2）
7.探針的制備1.在1.5ml離心管中配制以下反應液：模板DNA(25 ng) 1ulRandom Primer 2ul滅菌水 11ul總體積：14ul2.95°C加熱3分鐘后，迅速放置于冰冷卻5min。3.在離心管中按下列順序加入以下溶液：10×Buffer 2.5uldNTP Mixtu