逆轉錄聚合酶鏈反應(RTPCR,rtpcr)
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)可以:(1)分析基因的轉錄產物;(2)獲取目的基因;(3)合成cDNA探針;(4)構建RNA高效轉錄系統。實驗方法原理逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增,而獲得目的基因或檢測基因表達。......閱讀全文
逆轉錄聚合酶鏈反應(RTPCR,rtpcr)
逆轉錄-聚合酶鏈反應?(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)可以:(1)分析基因的轉錄產物;(2)獲取目的基因;(3)合成cDNA探針;(4)構建RNA高效轉錄系統。實驗方法原理逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Tran
逆轉錄聚合酶鏈反應(RTPCR,rtpcr)
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA,再以cDNA為模板進行PCR擴增,從而獲得目的基因或檢測基因表達。
逆轉錄聚合酶鏈反應(RTPCR,rtpcr)
實驗方法原理逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR
逆轉錄聚合酶鏈反應(RTPCR,rtpcr)
實驗方法原理 逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板
逆轉錄聚合酶鏈反應(RTPCR,rtpcr)注意事項
注意事項1.在實驗過程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中,注意避免mRNA的斷裂;?2. 為了防止非特異性擴增,必須設陰性對照;?3.內參的設定:主要為了用于靶RNA的定量。常用的內參有G3PD(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)、β-Actin(β-肌動蛋白)等。其目的在于避免
逆轉錄聚合酶鏈反應
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增,而獲得
逆轉錄聚合酶鏈反應
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增,而獲得
逆轉錄聚合酶鏈反應所需試劑
1.RMA提取試劑2.第一鏈cDNA合成試劑盒3.dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM4.Taq DNA聚合酶
逆轉錄聚合酶鏈反應的原理
組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA.再以cDNA為模板進行PCR擴增,而獲得目的基因或檢測基因表達.RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級,使一些極為微量RNA樣品分析成為可能.該技術主要用于:分析基因的轉錄產物,
逆轉錄聚合酶鏈反應的技術應用
RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級,使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用于:分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統。
逆轉錄聚合酶鏈反應實驗方法
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增,而獲得
實時逆轉錄聚合酶鏈反應的簡介
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增,而
逆轉錄聚合酶鏈反應實驗方法
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增
逆轉錄聚合酶鏈反應的操作步驟
1. 總RNA的提取:見相關內容。2. cDNA第一鏈的合成:試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售,其原理基本相同,但操作步驟不一。現以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 試
逆轉錄聚合酶鏈反應實驗方法
?逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增,而獲
逆轉錄聚合酶鏈反應的注意事項
1. 在實驗過程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中,注意避免mRNA的斷裂。2. 為了防止非特異性擴增,必須設陰性對照。3. 內參的設定:主要為了用于靶RNA的定量。常用的內參有G3PD(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)、β-Actin(β-肌動蛋白)等。其目的在于避免RNA定
逆轉錄聚合酶鏈反應中文實驗方法
逆轉錄-聚合酶鏈反應?逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板
實時逆轉錄聚合酶鏈反應的操作步驟
1. 總RNA的提取:見相關內容。 2. cDNA第一鏈的合成:試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售,其原理基本相同,但操作步驟不一。現以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthes
實時逆轉錄聚合酶鏈反應的注意事項
1、在實驗過程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中,注意避免mRNA的斷裂。 2、為了防止非特異性擴增,必須設陰性對照。 3、內參的設定:主要為了用于靶RNA的定量。常用的內參有G3PD(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)、β-Actin(β-肌動蛋白)等。其目的在于避免R
逆轉錄聚合酶鏈反應的方法及應用介紹
中文名稱逆轉錄聚合酶鏈反應英文名稱reverse transcription PCR;RT-PCR定 義先將RNA通過逆轉錄酶的作用合成與之互補的DNA鏈,再以該鏈作模板進行聚合酶鏈反應擴增特定RNA序列的方法。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
反轉錄聚合酶鏈反應(RTPCR)診斷禽流感
近年來發展的RTPCR分子診斷技術具有高度的敏感性和特異性,可大大縮短對AIV病毒的檢出時間,克服了傳統的禽流感診斷技術的缺點,為禽流感早期快速診斷提供子敏感、快速、實用的方法。1986年,Perdue用聚合酶鏈反應(PCR)診斷禽流感,從接種雞胚到出結果僅用時36h。趙建梅等在傳統一步法RT-PC
逆轉錄聚合酶鏈式反應(RTPCR)
實驗概要提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增,而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級,使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用于:分析基因
逆轉錄聚合酶鏈反應的合成cDNA引物的選擇
1. 隨機六聚體引物:當特定mRNA由于含有使反轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時,可采用隨機六聚體引物這一不特異的引物來拷貝全長mRNA。用此種方法時,體系中所有RNA分子全部充當了cDNA第一鏈模板,PCR引物在擴增過程中賦予所需要的特異性。通常用此引物合成的cDNA中96%來源于rRNA。
逆轉錄聚合酶鏈反應中cDNA產量的很低什么原因
可能的原因:1. RNA模板質量低。2. 對mRNA濃度估計過高。3. 反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足。4.?同位素磷32過期。5. 反應體積過大,不應超過50 μl。
反轉錄聚合酶鏈反應(RTPCR)方法中常見的污染問題...
反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法中常見的污染問題及對策反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)是一種體外核酸擴增技術,它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點,能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定,所以近年來RT-PCR技
定量聚合酶鏈反應
中文名稱定量聚合酶鏈反應英文名稱quantitative PCR;qPCR定 義將某種已知含量的DNA模板作為內標準進行PCR反應,對待測模板進行定量分析的方法。更靈敏的定量PCR是采用實時PCR方法。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞生物學技術(二級學科)
反向聚合酶鏈反應
中文名稱反向聚合酶鏈反應英文名稱inverse PCR;iPCR定 義用于擴增已知序列的DNA旁側未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上沒有識別位點的限制內切酶,切出包含已知DNA、而兩端帶有未知序列的區段,將切出的DNA區段環化,然后再按已知的DNA序列設計一對引物進行擴增。應用學科細胞生物學
逆轉錄PCR(RTPCR)
實驗四 逆轉錄PCR?(RT-PCR?)【實驗目的】1.了解用逆轉錄PCR?法獲取目的基因的原理。2.學習和掌握逆轉錄PCR?的技術和方法。【實驗原理】聚合酶鏈式反應(PCR)過程利用模板變性,引物退火和引物延伸的多個循環來擴增DNA序列。因為上一輪的擴增產物又作為下一輪擴增的模板,是一個指數增長的
什么是聚合酶鏈反應?
聚合酶鏈反應或多聚酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction,PCR),又稱無細胞克隆技術(“free bacteria”cloning technique),是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis 等
聚合酶鏈反應的過程
標準的PCR過程分為三步:DNA變性:(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈DNA退火:(60℃-65℃):系統溫度降低,引物與DNA模板結合,形成局部雙鏈。延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP為原料,從引物的3′端開始以從5′