關于DNA聚合酶的歷史簡介
在50年代的中期，A. Kornberg和他的同事們就想到DNA的復制必然是一種酶的催化作用，于是決心分離出這種酶并研究其結構和作用機制。為了達到這個目的，他們分離的蛋白，然后加到體外合成系統中即 同位素標記的dNTP、Mg2+及模板DNA，經過大量的工作，于1956年終于發現了DNA聚合酶Ⅰ（DNA polymerase Ⅰ，DNA pol Ⅰ）原來稱為Kornberg酶。以后又相續發現了DNA pol Ⅱ和DNA pol Ⅲ。開始人們以為DNA pol I是細菌中 DNA復制主要的酶類，后來發現DNA pol Ⅰ的 突變株照樣可以復制，才清楚它并不是主角。現已知道在DNA復制中起主導作用的是DNA pol Ⅲ，至于pol Ⅱ的功能如今還不十分清楚。DNA聚合酶的共同特點是： ⑴需要提供合成模板；⑵不能起始新的DNA鏈，必須要有 引物提供3'－OH；⑶合成的方向都是5'→3'⑷除聚合DNA外還有其......閱讀全文
關于DNA聚合酶的歷史簡介
在50年代的中期，A. Kornberg和他的同事們就想到DNA的復制必然是一種酶的催化作用，于是決心分離出這種酶并研究其結構和作用機制。為了達到這個目的，他們分離的蛋白，然后加到體外合成系統中即 同位素標記的dNTP、Mg2+及模板DNA，經過大量的工作，于1956年終于發現了DNA聚合酶Ⅰ（
DNA聚合酶的研究歷史
1953年，沃森和克里克發表了經典論文，描述DNA的化學結構，而一些科學家對它的重要性提出了最初的質疑。兩人在論文中提出，DNA的復制原理仍有待確定。當時，美國生物化學家阿瑟·科恩伯格正在密蘇里州圣路易斯市的華盛頓大學微生物學系工作，他認可了這篇論文的重要意義。由此，他開始對機體合成核酸的過程產生了
DNA聚合酶的研究歷史
1953年，沃森和克里克發表了經典論文，描述DNA的化學結構，而一些科學家對它的重要性提出了最初的質疑。兩人在論文中提出，DNA的復制原理仍有待確定。當時，美國生物化學家阿瑟·科恩伯格正在密蘇里州圣路易斯市的華盛頓大學微生物學系工作，他認可了這篇論文的重要意義。由此，他開始對機體合成核酸的過程產生了
關于DNA聚合酶I的功能簡介
1）通過核苷酸聚合反應，使DNA鏈沿5’→3’方向延長（DNA聚合酶活性） 2）催化由3’端水解DNA鏈（3’→ 5’核酸外切酶活性，用于切除錯配的堿基） 3）催化由5’端水解DNA鏈（5’→ 3’核酸外切酶活性，用于切除引物） 4）催化由3’端使DNA鏈發生焦磷酸解 5）催化無機焦磷酸
關于T4DNA聚合酶的簡介
最近年來在枯草桿菌，鼠傷寒沙門氏桿菌等細胞及噬菌體T4、T5、T7中分離到DNA聚合酶，這里只介紹T4DNA聚合酶。T4DNA聚合酶與大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ相似，也是一條多肽鏈，分子量亦相近，但 氨基酸組成不同，它至少含有15個半胱氨酸殘基。但是，它在作用上與大腸桿菌DNApol不同；[1]它無
耐熱DNA聚合酶簡介
耐熱DNA 聚合酶(Taq DNA 聚合酶)：1969年人們從美國黃石國家森林公園火山溫泉中分離出一種嗜熱的水生真菌Thermusaquaticus,能在70~ 75C生長,從該菌分離純化得到一種耐熱的、依賴DNA 的DNA 聚合酶,簡稱Taq DNA 聚合酶。 耐熱DNA聚合酶是一種可抗高溫
DNA聚合酶I的簡介
DNA聚合酶I的二級結構以螺旋為主，可劃分為A至R共18個螺旋肽段。螺旋肽段之間由非螺旋結構連接。其中H區與I區之間的無規則結構較長，有50個氨基酸殘基，I螺旋與O螺旋之間由較大的空隙，可以容納DNA鏈，而50個氨基酸的無規結構，就像一個蓋子那樣與I、O螺旋區共同把DNA鏈包圍起來，使其向一個方
DNA聚合酶的功能簡介
DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羥基上，形成磷酸二酯鍵；而DNA連接酶是在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，不是在單個核苷酸與DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。 DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板，將單個核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的DNA鏈；而DNA連接酶是
真核生物的DNA聚合酶的簡介
真核生物的DNA聚合酶：真核生物中也具有幾種DNA聚合酶，但這些聚合酶都沒有3'→5'或5'→3'外切酶活性。其聚合反應機制與原核生物的聚合一樣。DNA聚合酶α主要負責合成引物，既能合成前導鏈的又能合成后隨鏈的，它與引發酶（primase）形成復合體，因其有引發、
高保真型耐熱DNA聚合酶的簡介
1.pfu DNA 聚合酶 是從Pyrococcus furiosis中精制而成的高保真耐高溫DNA聚合酶,它不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可校正PCR擴增過程中產生的錯誤,使產物的堿基錯配率極低。PCR產物為平端,無3'端突出
關于DNA聚合酶I的基本介紹
DNA聚合酶I（DNA-pol I），分子量109kD，為單肽鏈組成，400分子數/細胞，是原核生物的DNA聚合酶，由于發現最早命名為DNA聚合酶I，其他原核生物的DNA聚合酶，按發現的先后順序分別命名為DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶Ⅴ。
關于地塞米松的歷史簡介
1958年，Arth與Oliveto等分別合成了地塞米松，1960年Merck & Co.生產地塞米松磷酸鈉，上市的地塞米松衍生物已達12種以上。 地塞米松的化學結構為潑尼松龍的B環9α位引入氟原子，D環16α位引入甲基；9α氟及16α甲基均使其抗炎活性顯著增強，而16α甲基則顯著地降低了地塞
關于DNA雙螺旋的歷史發現介紹
1953年4月25日，克里克和沃森在英國雜志《自然》上公開了他們的DNA模型。經過在劍橋大學的深入學習后，兩人將DNA的結構描述為雙螺旋，在雙螺旋的兩部分之間，由四種化學物質組成的堿基對扁平環連結著。他們謙遜地暗示說，遺傳物質可能就是通過它來復制的。這一設想的意味是令人震驚的：DNA恰恰就是傳承
關于裂隙燈的歷史簡介
1911年瑞典的眼科學家Gullstrand發明了著名的眼科檢查儀器“裂隙燈”(Slit lamp)，1920年vogt加以改進使其功能更加完善，成為了今天的裂隙燈藍本。 1950年中國開始研制裂隙燈，1967年上海醫用光學儀器廠率先試制成功。同年蘇州醫療器械廠亦成功的設計制造出了裂隙燈，并且
關于干燥技術的歷史簡介
二次世界大戰以后，軍隊和政府開始廣泛地進行有關脫水食品的實驗。當時，人們對于脫水食品的味道和營養就有了更大的期望，大家都指望有一種更好的方法，使食品保存得更長久一些，同時，人們對食用方便性也有了更高的要求，既要保存原味、質地，又要保留營養成份，但是，人們的要求又與科學技術所能達到的水平有一定的距
關于PCR技術的歷史簡介
Khorana (1971)等最早提出核酸體外擴增的設想：“經DNA變性，與合適的引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，并不斷重復該過程便可合成tRNA基因。” 但由于當時基因序列分析方法尚未成熟，熱穩定DNA聚合酶尚未報道以及引物合成的困難，這種想法似乎沒有實際意義。加上70年代初分子克隆技術的
關于端粒的發現歷史簡介
科學家們在尋找導致細胞死亡的基因時，發現了一種叫端粒的存在于染色體頂端的物質。端粒本身沒有任何密碼功能，它就像一頂高帽子置于染色體頭上。 在新細胞中，細胞每分裂一次，染色體頂端的端粒就縮短一次，當端粒不能再縮短時，細胞就無法繼續分裂了。這時候細胞也就到了普遍認為的分裂100次的極限并開始死亡。
DNA聚合酶的功能
1）通過核苷酸聚合反應，使DNA鏈沿5’→3’方向延長（DNA聚合酶活性）[1] 2）催化由3’端水解DNA鏈（3’→ 5’核酸外切酶活性，用于切除錯配的堿基）[1] 3）催化由5’端水解DNA鏈（5’→ 3’核酸外切酶活性，用于切除引物）[1] 4）催化由3’端使DNA鏈發生焦磷酸解
DNA聚合酶的特性
DNA聚合酶有多種，E.coli就有三種。通常DNA聚合酶具有以下共同特點：?①需要DNA模板，因此這類酶又稱為依賴DNA的DNA聚合酶；②需要RNA或DNA作為引物(primer)，即DNA聚合酶不能從頭催化；?③催化dNTP加到引物的3'-OH末端，其速率為1000nt/min，因而DN
DNA聚合酶的應用
E.coli的DNA pol Ⅰ涉及DNA損傷修復，在半保留復制中起輔助的作用。DNA polⅡ在修復損傷中也具有重要的作用。DNA polⅢ是一種多亞基的蛋白質，在DNA新鏈的從頭合成中起復制酶的作用。復制的忠實性問題會影響到翻譯的精確性，這種忠實性主要依賴于堿基的特異性配對。據估計每個堿基對將有
DNA聚合酶的發現
在50年代的中期，A. Kornberg和他的同事們就想到DNA的復制必然是一種酶的催化作用，于是決心分離出這種酶并研究其結構和作用機制。為了達到這個目的，他們分離的蛋白，然后加到體外合成系統中即 同位素標記的dNTP、Mg2+及模板DNA，經過大量的工作，于1956年終于發現了DNA聚合酶Ⅰ（
DNA聚合酶的功能
[1] 聚合作用：在引物RNA'-OH末端，以dNTP為底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個將核苷酸 加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。 酶的專一性主要表現為新進入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對時才有 催化作用。dNTP進入結合位點后，可能使酶的 構象發生變化，促進3&
DNA聚合酶的定義
真核細胞有5種DNA聚合酶，分別為DNA聚合酶α（定位于胞核，參與復制引發，不具有5'－3'外切酶活性及3'－5'外切酶活性，有5'－3'聚合酶活性），β（定位于核內，參與高保真度復制，不具有5'－3'外切酶活性，其中疑似存在5&#
DNA聚合酶的用途
聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶擴增的PCR產物，3'末端總是帶有1個非模板依賴型的突出堿基，而這個堿基幾乎總是A，因為Taq酶對dATP具有優先聚合活性，故可用T載體克隆。
DNA聚合酶的特性
原核生物大腸桿菌DNA聚合酶DNA聚合酶最早在E.coli中發現，到目前為止已確定有5種類型，分別為DNA聚合酶Ⅰ、DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶V，都與DNA鏈的延長有關。?其中DNA聚合酶I、Ⅱ、Ⅲ研究得比較明確。DNA聚合酶Ⅰ是1956年由Arthur Kombe
DNA聚合酶的概述
DNA聚合酶（DNA polymerase）是 細胞復制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA為復制模板，從將DNA由5'端點開始復制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具備模板、 引物、dNTP 等的情況下）及其相輔的活性。 真核細胞有5種DNA
DNA聚合酶的缺點
缺點無3'→5'閱讀校正功能，在PCR擴增過程可引起錯配，30次循環錯配率約0.25%。措施:選擇高保真Taq酶，如Pfu。原因:Pfu具有3'→5'外切酶活性。注意:Pfu擴增產物為平末端。
DNA聚合酶的種類
原核生物大腸桿菌DNA聚合酶DNA聚合酶最早在E.coli中發現，到目前為止已確定有5種類型，分別為DNA聚合酶Ⅰ、DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶V，都與DNA鏈的延長有關。其中DNA聚合酶I、Ⅱ、Ⅲ研究得比較明確。?DNA聚合酶Ⅰ是1956年由Arthur Kombe
DNA聚合酶的特性
良好的熱穩定性;70℃ 2h，殘留90%活性;93℃ 2h，殘留60%活性;94℃ 2h，殘留40%活性。5'→3'聚合酶活性，對dATP有優先聚合活性;5'→3'外切酶活性;無3'→5'外切酶活性。
關于聚合酶連式反應的簡介
聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction PCR) 又稱為無細胞克隆系統或特異性DNA 序列體外引物定向酶促擴增法，是基因擴增技術的一次重大革新。PCR 是利用單鏈寡核苷酸引物對特異DNA 片段進行體外快速擴增的一種方法。該反應是一個指數式反應，可在短時間內使極微量的目