關于雙縮脲法的試驗器材相關介紹
1. 試劑: (1)標準蛋白質溶液:用標準的結晶牛血清清蛋白(BSA)或標準酪蛋白,配制成10mg/ml的標準蛋白溶液,可用BSA濃度1mg/ml的A280為0.66來校正其純度。如有需要,標準蛋白質還可預先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量,計算出其純度,再根據其純度,稱量配制成標準蛋白質溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制,酪蛋白用0.05N NaOH配制。 (2)雙縮脲試劑:稱以1.50克硫酸銅(CuSO4·5H2O)和6.0克酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6·4H2O),用500毫升水溶解,在攪拌下加入300毫升10% NaOH溶液,用水稀釋到1升,貯存于塑料瓶中(或內壁涂以石蠟的瓶中)。此試劑可長期保存。若貯存瓶中有黑色沉淀出現,則需要重新配制。 2. 器材: 可見光分光光度計、大試管15支、旋渦混合器等。......閱讀全文
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1. 試劑: (1)標準蛋白質溶液:用標準的結晶牛血清清蛋白(BSA)或標準酪蛋白,配制成10mg/ml的標準蛋白溶液,可用BSA濃度1mg/ml的A280為0.66來校正其純度。如有需要,標準蛋白質還可預先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量,計算出其純度,再根據其純度,稱量配制成標準蛋白質溶液。
雙縮脲法的試驗原理簡介
雙縮脲(NH2CONHCONH2)是兩個分子脲經180℃左右加熱,放出一個分子氨后得到的產物。在強堿性溶液中,雙縮脲與二價銅離子形成紫色絡合物,稱為雙縮脲反應。凡具有兩個酰胺基或兩個直接連接的肽鍵,或能夠以一個中間碳原子相連的肽鍵,這類化合物都有雙縮脲反應。 紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成
關于雙縮脲法的名詞解釋
雙縮脲反應產生的紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。 雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅,而氫氧化鉀僅僅是為了提供堿性環境,因此它可被其他堿,如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀,可延長試劑的使用壽命。
關于雙縮脲反應的鑒定相關內容介紹
由于蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此也能與銅離子在堿性溶液中發生雙縮脲反應,且顏色深淺與蛋白質的含量的關系在一定范圍內符合比爾定律,而與蛋白質的氨基酸組成及分子量無關,故可用雙縮脲法測定蛋白質的含量(借助分光光度計可減小誤差)。 雙縮脲反應主要涉及肽鍵,因此受蛋白質特異性影響較
關于蛋白定量的分析方法雙縮脲法的簡介
雙縮脲法是一個用于鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個堿性的含銅試液,呈藍色,由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制。當底物中含有肽鍵時(多肽),試液中的銅與多肽配位,配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反
簡述雙縮脲法的操作方法
1、標準曲線的測定:取12支試管分兩組,分別加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升的標準蛋白質溶液,用水補足到1毫升,然后加入4毫升雙縮脲試劑。充分搖勻后,在室溫(20~25℃)下放置30分鐘,于540nm處進行比色測定。用未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照液。取兩組測定的平均值
雙縮脲反應的配制雙縮脲試劑的注意事項
雙縮脲試劑由NaOH溶液(0.1g/mL)和CuSO4溶液(0.01g/mL)配制而成,配制比例為5:1。但是雙縮脲試劑不用現配現用,先加入NaoH營造堿性環境,再加入CuSO4。這是與斐林試劑不同的地方。
蛋白質濃度測定(雙縮脲法)實驗介紹
?實驗原理測定蛋白質的定量方法有很多,目前常用的有凱氏定氮法;比色法主要包括雙縮脲法、Folin-酚試劑法及 染料結合法;紫外分光光度法等雙縮脲(Biuret)法:在堿性溶液中,雙縮脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)與二價銅離子作用形成紫紅色的絡合物,這一反應稱雙縮脲反應。凡分子中含二個或二個以
雙縮脲法血清總蛋白測定實驗
實驗方法原理凡分子中含有兩個甲酰胺基(-CONH2-)的化合物都能與堿性銅溶液作用,形成紫紅色化合物這一反應稱雙縮脲反應蛋白質分子中有許多肽健(-CONH2-)都能起此反應,而且各種血漿蛋白顯色程度基本相同.實驗步驟一、實驗操作:按表進行混勻,置25℃30min。(37℃10min)在波長540nm
蛋白質濃度測定(雙縮脲法)
實驗概要1.掌握本實驗方法的原理和操作2.掌握標準工作(A—C)曲線的制作3.熟悉蛋白質定量測定的幾種常用方法實驗原理測定蛋白質的定量方法有很多,目前常用的有凱氏定氮法;比色法主要包括雙縮脲法、Folin-酚試劑法及 染料結合法;紫外分光光度法等雙縮脲(Biuret)法:在堿性溶液中,雙縮脲(H2N
雙縮脲法血清總蛋白測定實驗
實驗方法原理 凡分子中含有兩個甲酰胺基(-CONH2-)的化合物都能與堿性銅溶液作用,形成紫紅色化合物這一反應稱雙縮脲反應蛋白質分子中有許多肽健(-CONH2-)都能起此反應,而且各種血漿蛋白顯色程度基本相同.實驗步驟 一、實驗操作:按表進行混勻,置25℃30min。(37℃10min)在波長540
蛋白質濃度測定(雙縮脲法)
實驗原理測定蛋白質的定量方法有很多,目前常用的有凱氏定氮法;比色法主要包括雙縮脲法、Folin-酚試劑法及 染料結合法;紫外分光光度法等雙縮脲(Biuret)法:在堿性溶液中,雙縮脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)與二價銅離子作用形成紫紅色的絡合物,這一反應稱雙縮脲反應。凡分子中含二個或二個以上
雙縮脲試劑用法
雙縮脲試劑: 成分:0.1g/ml?NaOH(甲液)和0.01g/ml?CuSO4(乙液). 用法:向待測液中先加入2ml甲液,搖勻,再向其中加入3~4滴乙液,搖勻.如待測中存在蛋白質,則呈現紫色.
測量蛋白質的方法雙縮脲法
當脲被小心地加熱至150-160攝氏度時,可由兩個分子間脫去一個氨分子而生成二縮脲,也叫雙縮脲,雙縮脲與堿及少量硫酸銅溶液作用生成紫紅色的配合物,此反應稱為雙縮脲反應。由于蛋白質分子中含有肽鍵,與雙縮脲結構相似,故也能呈現此反應而生成紫紅色配合物,在一定條件下其顏色深淺與蛋白質含量成正比,據此可用吸
雙縮脲反應的作用
雙縮脲反應通常是用以測量肽和蛋白質的種顏色反應:一般含兩個或更多肽鍵的化合物即可與堿性CuSO4溶液生成紫紅色或藍紫色的復合物,稱為雙縮脲反應。利用這個反應可測定蛋白質的含量。應用雙縮脲反應、紅外光譜分析及X線衍射法等均可證明蛋白質分子中肽鍵的存在,蛋白質分子中的多肽鏈可被酸、堿或蛋白酶水解成為氨基
雙縮脲反應的簡介
兩分子尿素(NH2-CO-NH2)加熱至180℃左右生成雙縮脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)并放出一分子氨。雙縮脲在堿性環境中能與Cu2+結合生成紫紅色配合物,此反應稱為雙縮脲反應。蛋白質分子中有肽鍵,其結構與雙縮脲相似,也能發生此反應。可用于蛋白質的定性或定量測定。任何蛋白質或者蛋白質水
雙縮脲反應的概念
雙縮脲反應是肽和蛋白質所特有的,而為氨基酸所沒有的一種顏色反應。一般分子中含有兩個氨基甲酰基(即肽鍵:-CO-NH-)的化合物與堿性溶液作用,生成紫色或者藍紫色的絡合物。
蛋白質定量檢測方法——雙縮脲法
雙縮脲法是一個用于鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個堿性的含銅試液,呈藍色,由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制。當底物中含有肽鍵時(多肽),試液中的銅與多肽配位,配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋
蛋白質濃度測定(雙縮脲法)實驗
實驗原理測定蛋白質的定量方法有很多,目前常用的有凱氏定氮法;比色法主要包括雙縮脲法、Folin-酚試劑法及 染料結合法;紫外分光光度法等雙縮脲(Biuret)法:在堿性溶液中,雙縮脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)與二價銅離子作用形成紫紅色的絡合物,這一反應稱雙縮脲反應。凡分子中含二個或二個以上
雙縮脲反應的基本內容介紹
雙縮脲反應是肽和蛋白質所特有的,而為氨基酸所沒有的一種顏色反應。一般分子中含有兩個氨基甲酪基(即肽鍵:-CO-NH-)的化合物與堿性溶液作用,生成紫色或者藍紫色的絡合物。 在堿性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC-NH-CONH2)與銅離子(Cu2+)作用,形成紫紅色絡合物(該物質的分子結
什么是雙縮脲反應?
雙縮脲反應是肽和蛋白質所特有的,而為氨基酸所沒有的一種顏色反應。一般分子中含有兩個氨基甲酰基(即肽鍵:-CO-NH-)的化合物與堿性溶液作用,生成紫色或者藍紫色的絡合物。
蛋白質含量的定量測定——雙縮脲法(Biuret法)
實驗原理具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應。在堿性溶液中雙縮脲與銅離子結合形成復雜的紫好色復合物。而蛋白質及多肽的肽鍵與雙縮脲的結構類似,也能與Cu2+形成紫紅色絡合物,其最大光吸收在540nm處。其顏色深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質的分子量及氨基酸的組成無關,該法測定蛋白質的濃度范圍
雙縮脲反應的操作特點
由于蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此也能與銅離子在堿性溶液中發生雙縮脲反應,且顏色深淺與蛋白質的含量的關系在一定范圍內符合比爾定律,而與蛋白質的氨基酸組成及分子量無關,故可用雙縮脲法測定蛋白質的含量(借助分光光度計可減小誤差)。雙縮脲反應主要涉及肽鍵,因此受蛋白質特異性影響較小。且使
雙縮脲法皮尼克法測定蛋白質
1 原理: 雙縮脲在堿性條件中,能與CuSO4結合成紅紫色的絡合物。pro分子中含有肽鏈與雙縮脲結構相似,也呈此反應。本法直接用于測定像小麥粉等固體試樣的pro含量。但作為銅的穩定劑,酒石酸鉀鈉比甘油好些。小麥粉中的pro能直接地一邊抽出一邊進行定量。 2 試劑 ⑴甘油作為穩定劑:取10m
蛋白質含量測定法雙縮脲法
本法系依據蛋白質分子中含有的兩個以上肽鍵在堿性溶液中與Cu2+形成紫紅色絡合物,在一定范圍內其顏色深淺與蛋白質濃度呈正比,以蛋白質對照品溶液作標準曲線,采用比色法測定供試品中蛋白質的含量。 本法快速、靈敏度低,測定范圍通常可達1~10mg。本法干擾測定的物質主要有硫酸銨、三羥甲基氨基甲烷緩沖液
雙縮脲試劑是什么配制的
先將雙縮脲試劑A加入組織樣液,振蕩均勻(必須營造堿性環境),再加入雙縮脲試劑B,搖蕩均勻。如果組織里含有蛋白質,那么會看到溶液變成紫色。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。蛋白質的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡合成紫紅色的化合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。 雙縮脲(NH
凱氏定氮儀與雙縮脲法的比較分析
蛋白質是生命的物質基礎,是有機大分子,是構成細胞的基本有機物,是生命活動的主要承擔者。雖然蛋白質在副食中含量較高,且并不是我們每天熱量的主要來源,但是我們卻離不開蛋白質。由于蛋白質是直接參與人體生理活動的物質,是人體必需的營養物質,所以無論是在糧食、乳制品還是飲料中人們對蛋白質的要求都是十分高的。因
雙縮脲反應的定義和表現式
在堿性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H?NOC-NH-CONH?)與銅離子(Cu2?)作用,形成紫紅色絡合物(該物質的分子結構式見圖),該反應即雙縮脲反應。銅溶液作用,就會形成紫色或藍紫色絡合物。注:除-CO-NH-有此反應外,酰胺基(-CO-NH?)、亞甲基(-CH?-)、亞氨基(-NH-)、(-C
雙縮脲法測蛋白質中該如何校正實驗結果
具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應。在堿性溶液中雙縮脲與銅離子結合形成復雜的紫紅色復合物。而蛋白質及多肽的肽鍵與雙縮脲的結構類似,也能與銅離子形成紫紅色配位化合物,其最大光吸收在540nm處。其顏色深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質的相對分子質量及氨基酸的組成無關,該法測定蛋白質的濃度范圍
斐林試劑和雙縮脲試劑的對比
斐林試劑和雙縮脲試劑都由NaOH溶液(斐林試劑中還有酒石酸鉀鈉)和CuSO4溶液組成,但二者有如下三點不同:(1)溶液濃度不同CuSO4溶液稱為斐林試劑乙,其濃度為0.05 g/mL;CuSO4溶液稱為雙縮脲試劑B,其濃度為0.01 g/mL。(2)使用原理不同斐林試劑是新配制的溶液,它在加熱條件下