DNA印跡法的實驗步驟
注意注意，操作戴手套。凝膠處理1)凝膠照相后切去包括標記帶在內的多余部分。將凝膠的一角(·點第一個樣品的一側)切去作為標記 以便于定位。精確測量凝膠大小然后將凝膠放入一個方形瓷盤中 。2)變性：將凝膠浸泡于適量的堿變性液中，室溫下變性30分鐘。期間更換變性液一次，不斷地輕輕搖動。如果先進行酸變性酸變性，則凝膠中溴酚蘭的顏色由黃變藍對于較大的DNA片段(·如大于15kb)凝膠可在堿變性前用0.25mol/L HCl預處理10分鐘使DNA片段脫嘌呤。凝膠中溴酚蘭的顏色由黃變藍后再進行堿變性。3)中和:移去瓷盤中的堿變性溶液,用雙蒸餾水漂洗凝膠兩次,然后浸泡于適量的中和液中,室溫下輕輕搖動15分鐘,更換新鮮中和液,再中和15分鐘。膜處理1)剪下一張與凝膠面積相同的硝酸纖維素膜(NCP)或尼龍膜,NL,。注意NCP也要剪去一角且不可用手觸摸,粘有油膩的膜不能被濕潤,也不能結合DNA。同時剪8,10張與NCP等大的干凈濾紙2)將NCP與3......閱讀全文
DNA印跡法的實驗步驟
注意注意，操作戴手套。凝膠處理1)凝膠照相后切去包括標記帶在內的多余部分。將凝膠的一角(·點第一個樣品的一側)切去作為標記 以便于定位。精確測量凝膠大小然后將凝膠放入一個方形瓷盤中 。2)變性：將凝膠浸泡于適量的堿變性液中，室溫下變性30分鐘。期間更換變性液一次，不斷地輕輕搖動。如果先進行酸變性酸變
DNA印跡法實驗步驟轉移的相關介紹
1)取一個較大的方形瓷盤,放一塊玻璃板于盤上,盤內加轉移液(6×SSC或10×SSC)使液面距離玻璃底面約1,2cm,玻璃板表面蓋兩張預先用轉移液浸潤的Whatman 3M ·濾紙(也可用新華濾紙),濾紙兩端浸入SSC轉移液中,用一玻璃棒將濾紙壓平,濾紙與玻璃板間不得有氣泡, 2)將瓊脂糖凝膠
DNA印跡法實驗步驟和注意事項
注意：操作戴手套。凝膠處理1)凝膠照相后切去包括標記帶在內的多余部分。將凝膠的一角(·點第一個樣品的一側)切去作為標記 以便于定位。精確測量凝膠大小然后將凝膠放入一個方形瓷盤中 。2)變性:將凝膠浸泡于適量的堿變性液中,室溫下變性30分鐘。期間更換變性液一次,不斷地輕輕搖動。如果先進行酸變性酸變性,
DNA印跡法實驗凝膠處理
1)凝膠照相后切去包括標記帶在內的多余部分。將凝膠的一角(·點第一個樣品的一側)切去作為標記 以便于定位。精確測量凝膠大小然后將凝膠放入一個方形瓷盤中 。 2)變性：將凝膠浸泡于適量的堿變性液中，室溫下變性30分鐘。期間更換變性液一次，不斷地輕輕搖動。如果先進行酸變性酸變性，則凝膠中溴酚蘭的顏
DNA印跡法的實驗器材和試劑
器材 1、電熱真空干燥箱 2、硝酸纖維素濾膜或尼龍膜 3、大方瓷盤、帶蓋方盤、玻璃板 4、濾紙、吸水紙、保鮮膜、蠟膜Parafilm、一次性手套等 5、刀片、刻度吸管、鑷子、剪刀、lkg重物 二、材料 電泳分離DNA的瓊脂糖凝膠 試劑 1、酸變性液:0.25mol/L HCl， 用
DNA印跡法實驗膜處理的介紹
1)剪下一張與凝膠面積相同的硝酸纖維素膜(NCP)或尼龍膜,NL,。注意NCP也要剪去一角且不可用手觸摸,粘有油膩的膜不能被濕潤,也不能結合DNA。同時剪8,10張與NCP等大的干凈濾紙 2)將NCP與3,4張濾紙依次漂浮于盛有雙蒸餾水的帶蓋方盤中,使水自然從NCP的下面向上浸潤,待其完全浸濕
免疫印跡法實驗的操作步驟
一蛋白質樣品獲得：細菌誘導表達后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞，真核細胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃，13,000r離心15min。取上清液作為樣品。二電泳：制備電泳凝膠，進行SDS-PAGE。三轉移：（半干式轉移）1、電泳結束后將膠條割至合適大小，用轉膜緩沖液平
DNA印跡法的實驗的注意事項
1,操作時戴手套,嚴禁用手接觸凝膠和硝酸纖維素膜,2,轉移時,濾紙與膜、膜與凝膠、凝膠與濾紙橋之間均不能有氣泡,否則影響DNA轉移,3,凝膠易碎,操作時應格外小心,4,硝酸纖維素膜上的DNA固定非常重要,固定不好時DNA·在雜交過程中會脫落下來,烤膜溫度過高,膜脆性增加,易碎,5,大片段DNA轉移效
DNA印跡法的定義
Southern印跡法(Southern Blot)是將基因組 DNA經限制性內切酶酶解、瓊脂糖凝膠電泳分離,使DNA片段按分子量大小排列在瓊脂糖凝膠上。經堿處理凝膠使DNA變性(使雙鏈DNA變成單鏈),通過具有一定鹽離子濃度溶液的毛細管作用,將凝膠中變性的單鏈DNA片段原位地吸印到硝酸纖維素濾膜或
DNA－印跡法的概念
中文名稱DNA 印跡法英文名稱Southern blotting定 義DNA經酶切和凝膠電泳分離后轉移至尼龍膜或硝酸纖維素薄膜上，用探針進行雜交后分析目的DNA片段的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
Southern－印跡實驗——印跡法
Southern印跡法是將DNA片段從電泳凝膠中轉移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此該膜半永久性地重現出凝膠電泳的帶型。實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOH
DNA－印跡法的技術特點
中文名稱DNA 印跡法英文名稱Southern blotting定 義DNA經酶切和凝膠電泳分離后轉移至尼龍膜或硝酸纖維素薄膜上，用探針進行雜交后分析目的DNA片段的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
DNA印跡法的技術原理
這種方法最初是由Southern于1975年建立的。方法中DNA轉移的方式和復印的過程一樣，比較準確地保持了特異DNA順序在電泳圖譜中的位置，也可將變性的凝膠負壓干燥后與特定的DNA探針進行原位雜交。它把電泳分離和雜交結合起來，不但能檢測出特異的DNA序列片段,而且能進行定位和測定分子量。即先以電泳
Western－Blot(免疫印跡法)實驗方法步驟
Western Blot(免疫印跡法)主要包括以下4個基本步驟：n?????樣品制備n??? ?電泳分離n??? ?蛋白的膜轉移n??? ?免疫雜交與顯色――蛋白檢測溶液和試劑n??? 1X 磷酸鹽緩沖液(PBS)n??? Modified RIPA bufferTris-HCl: 50 mM, p
DNA印跡法所需儀器試劑
儀器1電熱真空干燥箱?2硝酸纖維素濾膜或尼龍膜?3大方瓷盤、帶蓋方盤、玻璃板?4濾紙、吸水紙、保鮮膜、蠟膜Parafilm、一次性手套等?5刀片、刻度吸管、鑷子、剪刀、lkg重物?材料電泳分離DNA的瓊脂糖凝膠試劑1 酸變性液:0.25mol/L HCl, 用分析純的鹽酸12Mol/L稀釋?2堿變性
DNA印跡（Southern－Blot)實驗
【實驗原理】DNA印跡是1975年由英國Southern創建的。其基本原理是：DNA分子經限制性核酸內切酶酶切后，由瓊脂糖凝膠電泳將所得 DNA片段按分子質量大小分離，然后將DNA片段變性，并使凝膠中的單鏈DNA片段轉移到尼龍膜、硝酸纖維素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA 片段
DNA印跡法的起源和原理
這種方法最初是由Southern于1975年建立的。方法中DNA轉移的方式和復印的過程一樣,比較準確地保持了特異DNA順序在電泳圖譜中的位置,也可將變性的凝膠負壓干燥后與特定的DNA探針進行原位雜交。它把電泳分離和雜交結合起來,不但能檢測出特異的DNA序列片段,而且能進行定位和測定分子量。即先以電泳
關于DNA印跡法的基本介紹
Southern印跡法(Southern Blot)是將基因組 DNA經限制性內切酶酶解、瓊脂糖凝膠電泳分離，使DNA片段按分子量大小排列在瓊脂糖凝膠上。經堿處理凝膠使DNA變性（使雙鏈DNA變成單鏈），通過具有一定鹽離子濃度溶液的毛細管作用，將凝膠中變性的單鏈DNA片段原位地吸印到硝酸纖維素濾
DNA斑點和狹線印跡實驗——多樣抽濾法
斑點和狹線印跡實驗，可用于檢測被印跡的1DNA制品中靶序列的相對豐度。主要應用（1）遺傳病診斷；（2）DNA圖譜分析；（3）檢測樣品中的DNA及其含量；（4）PCR產物分析。實驗方法原理斑點和狹線印跡是一種將混合的未經分離的面定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上進行雜交分析的技術。實驗材料DNA試劑、試劑盒S
免疫印跡法實驗的操作步驟和注意事項
操作步驟 一蛋白質樣品獲得：細菌誘導表達后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞，真核細胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃，13,000r離心15min。取上清液作為樣品。 二電泳：制備電泳凝膠，進行SDS-PAGE。 三轉移：（半干式轉移） 1、電泳結束后將膠條
DNA印跡法所需的儀器試劑介紹
1電熱真空干燥箱?2硝酸纖維素濾膜或尼龍膜?3大方瓷盤、帶蓋方盤、玻璃板?4濾紙、吸水紙、保鮮膜、蠟膜Parafilm、一次性手套等5刀片、刻度吸管、鑷子、剪刀、lkg重物 二、材料 電泳分離DNA的瓊脂糖凝膠
DNA印跡法的注意事項介紹
1、操作時戴手套,嚴禁用手接觸凝膠和硝酸纖維素膜, 2、轉移時,濾紙與膜、膜與凝膠、凝膠與濾紙橋之間均不能有氣泡,否則影響DNA轉移, 3、凝膠易碎,操作時應格外小心, 4、硝酸纖維素膜上的DNA固定非常重要,固定不好時DNA·在雜交過程中會脫落下來,烤膜溫度過高,膜脆性增加,易碎, 5
DNA印跡法的基本原理
這種方法最初是由Southern于1975年建立的。方法中DNA轉移的方式和復印的過程一樣，比較準確地保持了特異DNA順序在電泳圖譜中的位置，也可將變性的凝膠負壓干燥后與特定的DNA探針進行原位雜交。它把電泳分離和雜交結合起來，不但能檢測出特異的DNA序列片段,而且能進行定位和測定分子量。即先以
DNA印跡雜交分析實驗
放射標記法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案適合于用100~1 000 bp 長的放射性標記的DNA探針對Southern轉印、斑點及狹線印跡進行雜交分析。 ?
DNA印跡雜交分析實驗
實驗方法原理?本方案適合于用100~1 000 bp 長的放射性標記的DNA探針對Southern轉印、斑點及狹線印跡進行雜交分析。實驗材料?DNA試劑、試劑盒?SDSSSC儀器、耗材?水浴鍋培養箱實驗步驟 ? 用6×SSC潤濕帶有固定了的DNA的膜。2.? 將膜的DNA面朝上置于雜交管中，ATP溶
免疫印跡法試驗操作步驟
一蛋白質樣品獲得:細菌誘導表達后,可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞,真核細胞加勻漿緩沖液,機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃,13,000r離心15min。取上清液作為樣品。二電泳:制備電泳凝膠,進行SDS-PAGE。三轉移:(半干式轉移)1、電泳結束后將膠條割至合適大小,用轉膜緩沖液平
基于－PCR－的－DNA－斑點印跡實驗
對于高通量的篩選，推薦使用幾個熱循環儀廠家提供的 96 孔或 384 孔 PCR 板，或者使用單個的管子。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗方法原理dNTP ，PCR 緩沖液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨芐液體培養基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR
基于－PCR－的－DNA－斑點印跡實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 dNTP ，PCR 緩沖液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨芐液體培養基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 產物微量滴定板，尼龍膜，紫外交聯裝置，96 孔或 384 孔復制器，熱循環儀，PCR 管或反應板
基于－PCR－的－DNA－斑點印跡實驗
實驗方法原理 dNTP ，PCR 緩沖液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨芐液體培養基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 產物微量滴定板，尼龍膜，紫外交聯裝置，96 孔或 384 孔復制器，熱循環儀，PCR 管或反應板試劑、試劑盒 dNTP PCR 緩沖液聚合酶混合液嵌套引物LB-氨芐
DNA斑點和狹線印跡實驗
多樣抽濾法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 斑點和狹線印跡是一種將混合的未經分離的面定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上進行雜交分析的技術。