酵母感受態細胞制備實驗——試劑盒制備法
實驗方法原理酵母化學感受態細胞制備試劑是一種通過化學處理，高效快速制備釀酒酵母化學感受態細胞，用于長期凍存以備后續轉化的產品。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒YPD培養基酵母化學感受態細胞制備試劑盒儀器、耗材離心管冰箱冷凍管保溫冰盒實驗步驟一、挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落（4℃放置不超過3周的也可以），接種到裝在50 mL 離心管中的10 mL的自備的YPD培養基中。 二、30℃搖晃培養，搖床速度250 rpm/分鐘，直到OD600達到0.6-1.0（相當于0.6-1x107細胞/mL）。 三、室溫3 000 rpm離心5 min，棄上清得酵母細胞沉淀。 四、新鮮制備適量的酵母感受態制備工作液。對10 mL酵母需要5.25 mL的工作液，其配制方法是：將4.75 mL制備液A、0.25 mL制備液B和0.25 mL制備液C加入到一個無菌的離心管中后充分震蕩混勻即可。酵母感受態制備工作液可放室溫待用。&nb......閱讀全文
酵母感受態細胞制備實驗——試劑盒制備法
實驗方法原理酵母化學感受態細胞制備試劑是一種通過化學處理，高效快速制備釀酒酵母化學感受態細胞，用于長期凍存以備后續轉化的產品。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒YPD培養基酵母化學感受態細胞制備試劑盒儀器、耗材離心管冰箱冷凍管保溫冰盒實驗步驟一、挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落（4℃放置不超過3周的也可以），接
酵母感受態細胞制備實驗
化學法 試劑盒制備法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 感受態是受體最容易接受外源DNA片段并實現轉化的一種生理狀態，用對應化學物質處理細胞后，細胞逐漸形成感受態細胞并
感受態制備：酵母感受態細胞制備實驗
酵母感受態細胞制備可以：（1）用于建立酵母轉化體系；（2）用于酵母表達系統構建；（3）用于酵母其他分子生物學研究。實驗方法實驗材料釀酒酵母 試劑、試劑盒YPDA液體培養基 蒸餾水 甘油 二甲基亞砜 儀器、耗材培養皿 離心機 離心管 冰箱 實驗步驟一、試劑與耗材 1. ?試劑?細菌用-酵母提取物（Fi
酵母感受態細胞制備實驗——化學法
酵母感受態細胞制備可應用于：（1）建立酵母轉化體系；（2）酵母表達系統構建；（3）酵母其他分子生物學研究。實驗方法原理感受態是受體最容易接受外源DNA片段并實現轉化的一種生理狀態，用對應化學物質處理細胞后，細胞逐漸形成感受態細胞并進行轉化。化學法簡單，快速，穩定，重復性好，廣泛用于外源基因的轉化。實
酵母菌RNA制備實驗—poly（A）+法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒酚氯仿異戊醇儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟一、熱酸酚方案（基本方案1）1. ?TES及酸酚溶液的體積增加到4 ml。2. ?操作時使用50 ml 聚丙烯離心管。3. ?將得到大約10 mg RNA。?二、玻璃珠方案（備擇方案1）1. ?將體積增加到15 ml
酵母蔗糖酶的制備實驗——研磨法
蔗糖酶( inver tase ) (β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶) ( fructofuranoside fructohydrolase ) ( EC. 3 . 2 . 1 . 26 ) 特異地催化非還原糖中的α-呋喃果糖苷鍵水解, 具有相對專一性。不僅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖, 也能催化棉
快速制備酵母DNA法
實驗概要本實驗制備了酵母轉化質粒，快速從轉化酵母菌中分離了用于Southern分析的基因組DNA。主要試劑2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
酵母菌RNA制備實驗—玻璃珠法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒酚氯仿異戊醇儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟1. ?培養并收集酵母菌細胞，冷凍細胞沉淀。2. ?用300 μl RNA緩沖液中重懸細胞沉淀。?3. ?加1體積冷的酸洗玻璃珠（體積與約200 μl 水相等）、300 μl 的用RNA緩沖液平衡的25：24 ：1酚/
酵母感受態細胞的制備需要注意什么
感受態細胞可以存儲在-80°C長達一年，沒有轉化潛能的損失。然而, 瞬間凍結在液氮或-80°C冰箱是不建議的。感受態細胞需要在冷凍保護劑中，像哺乳動物細胞一樣緩慢地冷凍。1. 使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存。2. 用紙片等將盒子里的細胞管隔開，分成多個小格子。3. 復蘇過程中，在37°C解凍細
酵母蔗糖酶的制備實驗
研磨法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蔗糖酶( inver tase ) (β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶) ( fructofuranosidefructohydrol
酵母菌RNA制備實驗
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 TES酸性酚氯仿乙酸鈉乙醇儀器、耗材 離心管離心機搖床實驗步驟 1. ?酵母細胞在10 ml 培養基中生長至指數中期（OD600=1.0）。?2. ?將培養液轉移到50 ml，離心管，于4℃，1 500 g 離心3 min。?3. ?棄上清，菌體沉淀用1 ml 冰冷的水
感受態制備：農桿菌感受態細胞制備實驗
農桿菌感受態細胞制備實驗農桿菌感受態細胞制備可以：（1）用于建立農桿菌轉化體系；（2）用于農桿菌表達系統構建；（3）用于農桿菌其他分子生物學研究。實驗方法氯化鈣法電轉農桿菌感受態實驗方法原理在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一種特
農桿菌感受態細胞制備實驗
氯化鈣法 電轉農桿菌感受態 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一
農桿菌感受態細胞制備實驗
農桿菌感受態細胞制備可用于：（1）建立農桿菌轉化體系；（2）農桿菌表達系統構建；（3）農桿菌其他分子生物學研究。實驗方法原理在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態。農桿菌的感受態可用CaCl2處理而誘導產生。將正在生長
感受態細胞CaCl2制備法
原理：轉化(Transformation )：將外源DNA?分子引入受體細菌，使之獲得新的遺傳性狀。受體細菌一般是限制修飾系統缺陷的變異株，不含限制性內切酶和甲基化酶的突變體(R-,M-)，可以容忍外源DNA 分子進入體內并穩定地遺傳給后代。受體細胞經過一些特殊方法，如電擊或CaCl2 、RbCl/
感受態細胞的制備[電轉化法]
體外連接的DNA重組分子導入合適的受體細胞才能大量增殖。為了提高受體菌攝取外源DNA的能力，提高轉化效率以獲得更多的轉化子，人們摸索出了不同的方法處理細菌，使其處于感受態。目前主要采用電轉化法和CaCl2法將外源DNA導入受體細胞中，并需要相應地制備電轉化感受態細胞和CaCl2感受態細胞。實驗目的：
酵母菌DNA制備實驗1
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟1. ?注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。?2. ?將1.5 ml 的過夜培養物轉移
酵母提取物的制備實驗
實驗方法原理酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論的振蕩玻璃珠研磨，是最簡便的方法之一。這對于小體積（如＜1mL的）和數升體積都很有效。經相差顯微鏡檢測，細胞破碎率一般＞95%。實驗材料新鮮培養的酵母細胞
酵母原生質體制備實驗
原生質體由原生質分化形成，具體包括細胞膜和膜內細胞質及其他具有生命活性的細胞器。植物和動物的如細胞核、線粒體和高爾基體等，而細菌如核糖體、擬核等。實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD酵母消解緩沖液山梨醇抽提緩沖液貯存緩沖液液氮儀器、耗材搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟1. ?將酵母菌接種于YPD培養基（
酵母菌DNA制備實驗2
實驗材料酵母試劑、試劑盒TERNA酶乙酸銨無水乙醇儀器、耗材離心機培養箱玻璃培養管實驗步驟1. ?在18 mm×150 mm 無菌玻璃培養管或17 mm×100 mm 無菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培養基過夜培養酵母菌至靜止期。2. ?培養物室溫下在臺式離心機上1 200 g 離心5 min
酵母提取物的制備實驗
實驗方法原理 酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論的振蕩玻璃珠研磨，是最簡便的方法之一。這對于小體積（如＜1mL的）和數升體積都很有效。經相差顯微鏡檢測，細胞破碎率一般＞95%。實驗材料 新鮮培養的酵母
酵母提取物的制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論
大腸稈菌感受態細胞的制備實驗——感受態制備
感受態的細胞可以攝入外部溶液中的DNA，而常態的細胞卻不能，所以要轉化質粒DNA進入大腸桿菌必須首先制備感受態的大腸桿菌細胞。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒CaCl2水儀器、耗材震蕩儀三角瓶試管離心管離心機實驗步驟1、取1%大腸桿菌E.coli接種于含2 ml LB培養基的試管中，37 ℃振蕩培養過夜
酵母DNA微量制備
實驗概要本實驗介紹了分別從40ml和5ml酵母培養液中制備酵母DNA的操作流程。實驗步驟1. 酵母DNA微量制備(40ml)?? 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量(過夜)。?? 2) 將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS-
大腸桿菌感受態細胞的制備實驗——氯化鈣法
實驗方法原理帶有外源DNA 的重組質粒，在體外構建后，導入宿主細胞，隨著細胞的大量復制、繁殖，才能夠有機會獲得純的重組質粒DNA，該過程稱之為轉化過程。受體細胞經過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl 等化學試劑）的處理后，細胞膜的通透性發生變化，能容許外源DNA 的載體分子通過。實驗材料E. c
釀酒酵母培養基的制備實驗
試劑、試劑盒 酵母提取物蛋白胨葡萄糖偏硫酸腺嘌呤瓊脂水儀器、耗材 錐形瓶實驗步驟 1. 在 1 L 的帶螺旋蓋的瓶中或錐形瓶中將下面的成分溶于 500 ml 水中，置于振蕩器上。酵母提取物 6.0 g，蛋白胨 12.0 g，葡萄糖 12.0 g，偏硫酸腺嘌呤 60.0 mg，瓊脂 10.0 g，加水
釀酒酵母培養基的制備實驗
YPAD培養基的制備 SC培養基 SC選擇培養基混合物的制備 用于檢測酵母中β-半乳糖苷酶活性的培養 用于篩選針對URA3表型的培養基 ? ? ? ? ? ?
釀酒酵母培養基的制備實驗
YPAD培養基的制備 SC培養基 SC選擇培養基混合物的制備 用于檢測酵母中β-半乳糖苷酶活性的培養 用于篩選針對URA3表型的培養基 ? ? ? ? ? ?
感受態制備：枯草芽孢桿菌感受態細胞的制備實驗
枯草芽孢桿菌感受態細胞的制備可以：（1）用于建立枯草芽孢桿菌轉化體系；（2）用于其基因改造；（3）用于提高枯草芽孢桿菌生產性能相關研究。實驗方法化學法化學改進法實驗材料枯草芽孢桿菌168 試劑、試劑盒SPI 培養基 EGTA SPII 培養基 檸檬酸鈉 EGTA 氫氧化鈉 KH2PO4 K2HPO4
感受態細胞的制備
感受態細胞的制備1.挑取適當菌株的E.coli?單菌落接種于2ml SOB培養液中，37℃搖床過夜。2.取0.5-1ml過夜培養的菌液轉種到50ml SOB中，18℃劇烈震蕩，直到A600達到0.6。3.將培養物轉移到50ml離心管中，4℃ 4,000rpm/min離心10min。同時在冰浴上配置T