制備克隆實驗
試劑、試劑盒ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱水浴箱實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mmol/L，溶于水中）X-gal(100 mg/ml，溶于二甲基甲酰胺)2. 酶和酶緩沖液平末端限制酶（5U), 比如，SrfⅠ限制性內切酶（Stratagene)連接緩沖液，l0X(250 mmol/LTris-HCl、pH7.5，100 mmol/L 氯化鎂，100mmol/LDTT,200ug/ml BSA)T4DNA 連接酶（4U)3. 核酸和寡核苷酸平末端插入物（100ng/ul)克隆載體（10ng/ul)4. 培養基(1)SOC 培養基（每升用量：20 g tryptone，5 g 酵母提取物，0.5 gNaCl，加水到 900 m......閱讀全文
制備克隆實驗
試劑、試劑盒?ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材?FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱 水浴箱實驗步驟?一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mm
制備克隆實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP -巰基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 連接緩沖液 T4DNA 連接酶 平末
制備克隆實驗
試劑、試劑盒ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱水浴箱實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mmol/L
單克隆抗體上清制備實驗——大量制備
實驗材料目的雜交瘤試劑、試劑盒完全 DMEM-10 培養液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）儀器、耗材250 ml 無菌錐形離心管轉瓶培養裝置850 cm2 旋轉培養瓶175 cm2 組織培養瓶實驗步驟1. 重復基本方案 1 步驟 1，并按 1:10 分傳到終體積為 1
單克隆抗體的制備實驗
單克隆抗體的制備實驗可以用于：（1）將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞雜交， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體；（2）該技術是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。實驗方法原理單克隆抗體技術(monoclo
單克隆抗體上清制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 目的雜交瘤試劑、試劑盒 完全 DMEM-10 培養液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）儀器、耗材 50 ml 無菌錐形離心管175 cm2 組織培養瓶實驗步驟 1. 將雜交瘤置于一個盛有完全 DMEM-10 培養基的 175 cm2 組織培養瓶中
單克隆抗體上清制備實驗
與多克隆抗血清相比，采用單克隆抗體（MAb）的最主要的優勢就是有可能得到大量的特異性單克隆抗體可供應用。MAb 制劑通常包括雜交瘤上清、由接種了雜交瘤的小鼠制備的腹水，以及純化的 MAb。雜交瘤上清容易制備，特別是用于制備大量不同的 MAb , 但其中 MAb 的濃度則相對較低。為得到純化的制劑，可
單克隆抗體腹水制備實驗
實驗方法原理 高滴度的單克隆抗體的制備可以通過在小鼠的腹腔內接種能產生 MAb 的雜交瘤細胞，從而產生腹水來獲得。腹水可收集幾次，經熱滅活、滴定后儲存。實驗材料 裸鼠（6～8 周齡 無特定病原體／注射了鼠鼠雜交瘤細胞的同系宿主）目的雜交瘤試劑、試劑盒 完全DMEM-10培養液（含10mmol／L H
單克隆抗體上清的制備實驗
實驗材料 雜交瘤試劑、試劑盒 完全培養基儀器、耗材 培養箱轉子離心機實驗步驟 1. ?將雜文瘤置于一個盛有完全DMEM-10培養基的175 cm2組織培養瓶中，置37 ℃CO2培養箱中，直至生長旺盛適于分傳。2. ?按1：10的比例將細胞分傳到一個新的175 cm2的培養瓶中，加入完全DMEM-10
兔多克隆抗血清的制備實驗
實驗材料 抗原試劑、試劑盒 PBS乙醇儀器、耗材 注射針頭注射器培養箱實驗步驟 1. ?取2 ml 的弗氏完全佐劑加到2 ml 的溶于PBS的純化抗原中，使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液，接上22G注射針頭，排出注射器中的氣泡。?2. ?將兔子敢在固定架上，用一只手抓住兔的頸背部毛皮，另一只
單克隆抗體的腹水制備實驗
實驗材料 雜交瘤細胞試劑、試劑盒 完全DMEM-10HEPES丙酮酸鈉PBS儀器、耗材 注射針頭離心管轉子離心機實驗步驟 1. ?用20G或22G的注射針，小鼠腹膜內注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接種細胞。?2. ?在175 cm2培養瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸鈉培
單克隆抗體的腹水制備實驗
實驗材料雜交瘤細胞試劑、試劑盒完全DMEM-10HEPES丙酮酸鈉PBS儀器、耗材注射針頭離心管轉子離心機實驗步驟1. ?用20G或22G的注射針，小鼠腹膜內注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接種細胞。?2. ?在175 cm2培養瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸鈉培養液，進
單克隆抗體上清的制備實驗1
實驗材料雜交瘤試劑、試劑盒完全培養基儀器、耗材培養箱轉子離心機實驗步驟1. ?將雜文瘤置于一個盛有完全DMEM-10培養基的175 cm2組織培養瓶中，置37 ℃CO2培養箱中，直至生長旺盛適于分傳。2. ?按1：10的比例將細胞分傳到一個新的175 cm2的培養瓶中，加入完全DMEM-10培養液到
單克隆抗體上清的制備實驗2
實驗材料抗體試劑、試劑盒PBS儀器、耗材離心機離心管實驗步驟1. ?同備擇方案1中大規模制備MAb上清的步驟1~4，但等細胞長到合適的密度時就應收獲細胞，或者是在細胞生長的平臺期收獲。?2. ?將細胞倒入無菌的250 ml 錐形離心管中，于4℃ 250 g 離心15 min，棄上清。?3. ?置細胞
單克隆抗體上清的制備實驗——單抗上清大量制備
實驗材料抗體試劑、試劑盒DMEM-10乙醇儀器、耗材離心機培養瓶轉子實驗步驟1. ?重復基本方案1步驟1，按1：10分傳到終體積100 ml 的完全DMEM-10/HEPES中。?2. ?準備傳代細胞時，應將175 cm2培養瓶中的內容物（100 ml）轉移到—個850 cm2旋轉培養瓶中，另加15
多克隆抗體制備
1. 免疫動物：兩只新西蘭兔?2. 佐劑：首先用完全弗氏佐劑（CFA），后用不完全弗氏佐劑（IFA）。?3. 免疫原：蛋白或KLH偶聯的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。?4. 免疫：用生理鹽水稀釋免疫原，然后與相應的佐劑進行1:1混合。抗原和佐劑完全混合形成穩定的乳劑，將該乳劑在兔子雙肩周圍
多克隆抗體的制備
多克隆抗體的制備?1. 器材：?剪刀（剪兔毛用）一把、彎頭眼科手術鑷子（游離血管用）一把、直頭眼科手術剪（剪血管用）一把，手術刀架，手術刀片，注射器(1ml、10ml，25ml)附針頭，兔子固定架，滅菌三角燒瓶(200ml)或平皿（直徑 18cm）、彎頭止血鉗四把，直頭止血鉗兩把，手術縫合線，塑
抗磷酸肽的多克隆抗體制備實驗
實驗材料用磷酸肽-BSA 交聯物免疫過的兔的粗制血清試劑、試劑盒PBS／疊氮化物MgCl2儀器、耗材分光光度計透析袋填裝有 BSA-瓊脂糖親和介質的柱子填裝有磷酸酪氨酸親和介質的柱子填裝有同種非磷酸肽親和介質的柱子填裝有同源的磷酸肽親和介質的柱子填裝有陽性-篩選的磷酸肽親和介質的柱子實驗步驟1. 將
抗磷酸肽的多克隆抗體制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 用磷酸肽-BSA 交聯物免疫過的兔的粗制血清試劑、試劑盒 PBS／疊氮化物MgCl2儀器、耗材 分光光度計透析袋填裝有 BSA-瓊脂糖親和介質的柱子填裝有磷酸酪氨酸親和介質的柱子填裝有同種非磷酸肽親和介質的柱子填裝有同源的磷酸肽親和介質的柱子填裝有陽性-篩選的磷酸肽親和介質的
兔多克隆抗血清的制備實驗——耳動脈放血
實驗材料抗原試劑、試劑盒PBS乙醇儀器、耗材注射針頭注射器培養箱實驗步驟1. ?準備用于放血的家兔（見基本方案）?2. ?將靠近家兔頭部的半只耳朵托在梅指和食指上，用中指和無名指彎曲剩余的半只耳朵使之下垂，以便使血液隨重力下流，用一個18G注射用針頭（不帶注射器）沿著兔耳中動脈進針，針尖指向兔耳根部
多克隆抗體制備實驗_弗氏佐劑免疫法
抗原通常是由多個抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機體，由一個B淋巴細胞接受該抗原所產生的抗體稱之為單克隆抗體（Monclone antibody）。由多種抗原決定簇刺激機體，相應地就產生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機體內所產生的抗體就是多克隆抗體；除了抗原決定
單克隆抗體上清制備實驗——大量制備雜交瘤或細胞系
實驗步驟1. 同備擇方案 1 中大規模制備 MAb 上清的步驟 1～4，但等細胞長到合適的密度時就應收獲細胞，或者是在細胞生長的平臺期收獲。2. 將細胞倒入無菌的 250 ml 錐形離心管中，于 4℃ 250 g 離心 15 min, 棄上清，置細胞沉淀于冰上。3. 將 10 瓶細胞沉淀用 4℃ 的
抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 融合后的候選雜交瘤細胞系BSA 交聯的同種磷酸肽BSA 交聯的同種非磷酸肽BSA 交聯的非同種磷酸酪氨酸肽BSA 交聯的同源磷酸肽試劑、試劑盒 篩選稀釋液陰性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫前血清）陽性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫后血清）儀器、耗材 HT 培養基96
YAC克隆的分析實驗——制備YAC－DNA進行Southern印跡分析
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒AHCSCESCEMTris·ClEDTATE乙酸甲RNase A異丙醇NaCl儀器、耗材培養箱離心管轉子實驗步驟1. ?接種一個紅色的含YAC克隆的酵母菌落于盛有20 ml AHC培養基的250 ml 三角燒瓶中，在旋轉搖床上30℃ 250 r/min 振蕩培養24 h。
抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 融合后的候選雜交瘤細胞系 BSA 交聯
抗磷酸肽的單克隆抗體制備實驗
實驗材料融合后的候選雜交瘤細胞系BSA 交聯的同種磷酸肽BSA 交聯的同種非磷酸肽BSA 交聯的非同種磷酸酪氨酸肽BSA 交聯的同源磷酸肽試劑、試劑盒篩選稀釋液陰性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫前血清）陽性對照（用于制備雜交瘤系的小鼠的免疫后血清）儀器、耗材HT 培養基96 孔聚苯乙烯組織培養板
單克隆抗體腹水制備實驗——雜交瘤細胞接種
實驗方法原理高滴度的單克隆抗體的制備可以通過在小鼠的腹腔內接種能產生 MAb 的雜交瘤細胞，從而產生腹水來獲得。腹水可收集幾次，經熱滅活、滴定后儲存。實驗材料裸鼠（6～8 周齡 無特定病原體／注射了鼠鼠雜交瘤細胞的同系宿主）目的雜交瘤試劑、試劑盒完全DMEM-10培養液（含10mmol／L HEPE
多克隆抗體的制備步驟
實驗概要本實驗通過兔免疫制備了多克隆抗體。主要試劑生理鹽水（或PBS）弗氏完全佐劑（Freund’s complete adjuvant，FCA）弗氏不完全佐劑（Freund’s incomplete adjuvant， FIA）二甲苯，酒精棉，脫脂棉，2% NaN3主要設備剪刀（剪兔毛用）一把、彎
多克隆抗體的制備步驟
實驗試劑生理鹽水（或PBS）弗氏完全佐劑（Freund’s complete adjuvant，FCA）弗氏不完全佐劑（Freund’s incomplete adjuvant， FIA）二甲苯，酒精棉，脫脂棉，2% NaN3實驗設備剪刀（剪兔毛用）一把、彎頭眼科手術鑷子（游離血管用）一把、直頭眼科
單克隆抗體的制備
實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加