ELISPOT方法檢測分泌細胞因子的細胞
實驗步驟基本方案材 料包被緩沖液洗液：含 0.25% (v/v) Tween 20 的 PBS 溶液阻斷緩沖液：含 5 % (m/V) BSA 或 FCS 的 PBS 溶液VRPMMO 完全培養基（或其他適宜培養基）分泌細胞因子的細胞（小鼠或人的）絲裂原，抗原或其他促細胞因子分泌的刺激物帶有標記物的細胞因子特異性二抗展開......閱讀全文
ELISPOT方－法－檢－測－分－泌－細－胞－因－子－的－細－胞
實驗步驟基本方案材 料包被緩沖液洗液：含 0.25% (v/v) Tween 20 的 PBS 溶液阻斷緩沖液：含 5 % (m/V) BSA 或 FCS 的 PBS 溶液VRPMMO 完全培養基（或其他適宜培養基）分泌細胞因子的細胞（小鼠或人的）絲裂原，抗原或其他促細胞因子分泌的刺激物帶有標記物的
B－細－胞－分－泌－抗－體－的－檢－測
實驗步驟基 本 方案材 料外周 血 單 個 核 細 胞（P B M C ; 單 元 8.1)RPMI- 5 和 RPMI-IO 完全培養基P W M 溶液9 6 孔 平 底 培 養 板（Costar)1 . 計 數 PBMC (附錄 3A ) ， 用 RPMI-5 完全培養基調整濃度至 4 X 10
PCR－檢－測－細－胞－因－子－m－R－N－A－的表達
實驗步驟基 本 方 案 定 量 IL -2 mRNA表達水平材 料內參照：轉 錄 質 粒 載 體（含有臨床生物檢測標本相關的c D N A )胍鹽溶液50 U/ul RNasin5 X 反轉錄酶緩沖液0.5m g / m l olig (d T )16l m g /m l 乙酰化的B S A4d N
B－細－胞－功－能－的－增－殖－檢－測－方－法
實驗步驟基 本 方 案 抗 I g M 與 L P S 刺激的 B 細胞增殖材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)純化的靜息 B 細 胞（單 元 2. 5)，采 用 Percoll 梯度離心制備V D M E M -10 完全培養基山羊抗 IgM (JacksonImmunoresearch) 或
細－胞－毒－性－T－淋－巴－細－胞－的－誘－導－及－檢－測
實驗步驟基 本 方 案 1 從 C TL 前體中誘導細胞毒性注意：反應細胞應根據抗原的種類選擇是否需要進行體內致敏。材 料反應細胞來源：未致敏的或者體內致敏的小鼠脾臟細胞（見輔助方案 1 和 2致敏培養基刺激細胞來源：未修飾或半抗原修飾的小鼠脾臟細胞（見輔助方案 3)R P M I -1 0 完全培
流－式－細－胞－儀－檢－測－全－血－的－人－淋－巴－細－胞
實驗步驟基本方案材 料（打 V 項 目 見 附 錄 1)全血，通 常 用 E D T A 抗凝P B S ，有 或 無 0.1% (m /V ) 疊氮鈉，過濾除菌單 克 隆 抗 體（標記的，未標記的或生物素化的），通過滴定確定最佳工作濃度間 標 二 抗（僅用于未標記的一抗）F T T C 標記的鏈霉
P－C－R－檢－測－人－T－細－胞－受－體－基－因－的－表－達
實驗步驟?基 本 方 案 PCR檢 測 人 T 細胞受體基因的表達展
干細胞的鑒定實驗——流－式－細－胞－儀－檢－測－分－析－技－術
實驗步驟流 式 細 胞 儀 檢 測 分 析 技 術實 驗 材 料(1) 不同來源的干細胞，細胞數不少于 5xl0?5?個/管。(2) 熒光標記的抗體或抗體及熒光二抗。(3)PBS。實 驗 步 驟(1) 將 細 胞 用 PBS 充分洗滌后重懸于 5000 PBS 中，如果細胞收集和鑒定不能同天完成，可
BrdU－檢－測－丁－細－胞－和－B－細胞增殖
實驗步驟基本方案材 料實驗動物0.8m g / m l B r d U (Sigma) 水 溶 液（口 服用）或 4m g / m l B r d U P B S 溶 液（注射用)P B S ， p H 7. 40.15mo l / L 冰冷的 NaCl冰 冷 的 9 5 % 乙醇多聚甲醛固定液D
巨－噬－細－胞－一－氧－化－氮－的－檢－測
實驗步驟基本方案材料展開
小－鼠－巨－噬－細－胞－的－表－型－檢－測
實驗步驟基 本 方 案 直 標 法 檢 測 小 鼠 巨 噬 細 胞 的 表 型材料Sorvall RT 6000B 離心機I . 準 備 4 只 12m m X 75m m 試管，將試管編號為 1?4。每 管 中 加 入 2 X IO7個細胞/ml細胞懸液 50ul。2.每管加入 3 mg/ml 阻
NK/L－A－K－細－胞－殺－傷－活－性－的－檢－測
實驗步驟基 本 方案?51C r 釋 放 法檢 測 NK/LA K 細胞殺傷活性材 料展
巨－噬－細－胞－抗－腫－瘤－活－性－的－檢－測
實驗步驟基本方案 [111In] 釋放法檢測巨噬細胞對腫瘤細胞的殺傷作用材 料輔助方案 [111In ] 標記腫瘤靶細胞材 料展開
磁－珠－法－分－離T－細－胞－和－B－細胞
實驗步驟基 本 方 案 1 用 AUTOMACS 系 統 進行 總 T 細胞、 CD4?+細 胞 或 CD8+T細胞的自動分離材 料小鼠HBSS 洗滌緩沖液基 本 方 案 2 使 用 AUTOMACS 系 統 進 行 B 細胞的自動分選材 料小鼠HBSS 洗滌緩沖液MACS 緩沖液CD45R (B2
P－C－R－檢－測－小－鼠－T－細－胞－受－體－表－達
實驗步驟?基本方案 I P C R 分析小鼠 T C R 基因表達材 料正常小鼠的組織勻漿或者是 H B S S 制備的單個細胞懸液（IO4?IO7) (附 錄 1)無菌水展開
巨－噬－細－胞－吞－噬－功－能－和－殺－傷－功－能－的－檢－測
實驗步驟基本方案1 巨噬細胞吞噬功能的檢測材 料單核/巨噬細胞：如巨噬細胞株、小鼠腹腔巨噬細胞[單元6.1，需 用 1 0 %豚蛋白胨或4 % (m /V ) 硫基乙酸鹽肉湯]，或 人 P B M C (單 元 8.1)平衡鹽溶液（balanced salt solution， BSS)細菌（如單核
小－鼠－巨－噬－細－胞－的－分－離
實驗步驟基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬細胞的分離材料小鼠，潔 凈 環 境 中 飼 養（最好置層流柜中飼養）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 鹽 肉 湯（Brewerthioglycollate medium，分離炎性腹腔巨嗤細
人－NK－T－細－胞－的－分－離－和－擴－增
實驗步驟基本方案 1 NK T 細胞的鑒定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培養基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可選）流 式 細 胞 緩 沖 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
IL－2－和－IL－4－的檢測實驗
實驗步驟基 本 方 案 采 用 CTLL- 2 細 胞 檢 測 小 鼠 IL - 2 和 IL -4材 料較 總 T C G F 和 抗 IL-4 存在時的 T C G F 單位數獲得。通過比較抗 IL-4 抗體存在下的T C G F 活性和兩種抗體都存在下的 T C G F 活性的不同來計算 IL
免－疫－復－合－物－方－法－檢－測－酪－氨－酸－蛋－白－激－酶
實驗步驟基 本 方案 酪 氨酸 蛋白 激酶 的免 疫 沉淀 和自 身 磷 酸化 檢 測以下步驟可以釆用淋巴或非淋巴細胞、原代細胞或培養的細胞系、活化或非活化的細胞。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)待檢測的細胞 冰預冷的 PBS含蛋白酶抑制劑的 I X 細 胞 裂 解 液（新鮮配置并于冰上保存
T－細－胞－克－隆－的－建－立
實驗步驟基本方案 1 產生和維持同種反應性 T h 和 CTL 克隆盡管同種反應性 T 細胞可以從未刺激的脾細胞或淋巴結細胞中產生，但如果細胞在初次混合淋巴細胞（M L C ) 中第一次被同種抗原刺激，反應細胞的得率會更高。見以下介紹。材 料同種反應性小鼠脾臟 T 細胞V H B S S (可選使用
粗糙脈胞菌順序四分子分析實驗
實驗方法原理 粗糙脈胞菌的菌株具有兩種不同的接合型(matingtype),用A、a或mt+、mt-表示。接合型是由一對等位基因控制的,并符合孟德爾分離定律。不同接合型菌株的細胞接合后可以進行有性生殖。在有性生殖過程中,不同接合型的菌絲相接觸,兩核配對,但不融合,形成雙核體,隨著雙核體菌絲的發育,子
粗糙脈胞菌順序四分子分析實驗
實驗方法原理粗糙脈胞菌的菌株具有兩種不同的接合型(matingtype),用A、a或mt+、mt-表示。接合型是由一對等位基因控制的,并符合孟德爾分離定律。不同接合型菌株的細胞接合后可以進行有性生殖。在有性生殖過程中,不同接合型的菌絲相接觸,兩核配對,但不融合,形成雙核體,隨著雙核體菌絲的發育,子囊
第?三?方?檢?測?機?構?排?名?2?0?1?3
近年來，檢測行業成為全球發展較快的行業之一，年增長在15%左右。而我國檢測行業已經接近900億元人民幣的規模，年平均增長率在20%左右。目前獲得CNAS、CMA認可的實驗室已經超過2萬余家，現經權威機構綜合評估，評選出2013年中國市場第三方檢測機構排行榜。 1、瑞士通用公證行(
淋－巴－細－胞－活－化－過－程－中－肌－醇－磷－脂－周－轉－的－分－析
實驗步驟基 本 方 案 1 通 過 道 威 克 斯（DOWEX) 離 子 交 換 層 析 分 析 [3H] 肌醇磷酸材料備 選 方 案 通 過 HPLC 方 法 分 析 [3H] 肌醇磷酸附加材料[3?H ] InsP 樣 本（見基本方案，步 驟 6) 和標準品除 氣 的 H PLC 級水2mol/
H－I－V－的－檢－測－與－分－析_H－IV－蛋白的檢測
實驗步驟?基 本 方 案 1 免 疫 印跡 法 檢測 H IV 蛋白本方案用蛋白質提取法定量測定細胞樣品中病毒蛋白的含量。用 抗 H I V -血清及 125I標記的葡萄球菌蛋白 A 來進行檢測。也 可 以 用 酶 聯 二 抗（生 物 素 化 的 抗 人 I g G 抗體）和適當的顏色指示劑（親和素
T細胞克隆的建立
基本方案 1 產生和維持同種反應性 T h 和 CTL 克隆盡管同種反應性 T 細胞可以從未刺激的脾細胞或淋巴結細胞中產生，但如果細胞在初次混合淋巴細胞（M L C ) 中第一次被同種抗原刺激，反應細胞的得率會更高。見以下介紹。材 料同種反應性小鼠脾臟 T 細胞V H B S S (可選使用）V D
醫改助力－第三方醫檢百億市場待分
2012年10月19日，國務院發布《衛生事業發展“十二五”規劃》，其中規定將大力發展非公立醫療機構，到2015年，非公立醫療機構床位數和服務量均達到醫療機構總數的20%左右。同時，醫療服務進一步下沉，將實現90%的常見病、多發病、危急重癥和部分疑難復雜疾病的診治、康復能夠在縣域內基本解
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗（三）
2.2 糖基化糖 基 化 是 一 種 常 見 的 P T M , 并 且 已 經 證 明 能 夠 影 響 酶 的 活 性 、蛋 白 質 定 位 、穩 定 性 、信 號 轉 導 、細 胞 黏 附 和 蛋 白 質 相 互 作 用 (Spiro, 2002k 目 前 已 經 發 現 在 腫 瘤 惡
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗——細－胞－培－養－基－成－分
實驗步驟2.2.5 BRL-條件培養基B R L 細胞在大鼠肝細胞培養基（BRL-CM) 中生長至匯合，用新鮮培養基更換一次 ， 3 天后收集這些培養基。所有培養基用無菌的、孔 徑 0.2um 的 P E S 濾膜過濾，特別是來自其他細胞類型的條件培養基。應該注意的是：在細胞分化研究中可能被用到的生