克隆化酵母DNA的操作實驗——整合性轉化
實驗材料酵母實驗步驟1. 將待研究的基因亞克隆到YIP質粒。 2. 用限制性內切酶在克隆化基因內部切開，使質粒線性化。 3. 用1~10 μg DNA加上擔體DNA轉化適合的菌株，通過質粒上帶的標記進行選擇，在選擇培養基上純化幾個轉化子，制備DNA，應用Southern 雜交確證整合是否發生在所期望的位點，并且測定是否發生了多重整合。注意事項如果沒有單限制性酶切位點，可以在此區域用一個或多個酶消化產生一個缺口，但缺口兩邊須具有足夠的同源序列。......閱讀全文
克隆化酵母DNA的操作實驗——整合性轉化
實驗材料酵母實驗步驟1. ?將待研究的基因亞克隆到YIP質粒。?2. ?用限制性內切酶在克隆化基因內部切開，使質粒線性化。?3. ?用1~10 μg DNA加上擔體DNA轉化適合的菌株，通過質粒上帶的標記進行選擇，在選擇培養基上純化幾個轉化子，制備DNA，應用Southern 雜交確證整合是否發生在
克隆化酵母DNA的操作實驗
實驗材料?酵母實驗步驟 ? 將待研究的基因亞克隆到YIP質粒。2.? 用限制性內切酶在克隆化基因內部切開，使質粒線性化。3.? 用1~10 μg DNA加上擔體DNA轉化適合的菌株，通過質粒上帶的標記進行選擇，在選擇培養基上純化幾個轉化子，制備DNA，應用Southern 雜交確證整合是否發生在所期
克隆化酵母DNA的操作實驗——穿梭質粒
實驗材料酵母實驗步驟1. ?構建其必需基因的染色體拷貝已被破壞的單倍體菌株，及帶有完整的必需基因和URA3選擇標志的YEp質粒。2. ?將必需基因亞克隆到YCp載體（帶有URA3以外的選擇標志），取約10~20 μg 用羥胺或其他技術進行誘變。3. ?轉化至步驟1的菌株中，在添加了尿嘧啶的省卻成分平
克隆化酵母DNA的操作實驗——基因置換技術
實驗材料酵母實驗步驟一、整合性破壞1. ?將基因的內部片段亞克隆到YIP載體。2. ?在此內部片段中將質粒線性化。3. ?繼續整合性轉化步驟3（見基本方案1）。二、基因破壞一步法1. ?將合適的選擇性基因亞克隆到目的基因上，必要時，可在亞克隆的同時引入一個缺失。2. ?采用合適的限制性位點，從步驟1
克隆化酵母DNA的操作實驗——質粒缺口修復
實驗材料酵母實驗步驟1. ?將目的基因亞克隆到YRp質粒，通過基因內的兩個限制性位點在基因中創造一個缺口區，在缺口兩側留下≥100~250 bp 的同源區，凝膠電泳純化質粒骨架大片段。?2. ?用1~10 μg?缺口質粒DNA轉化待拯救的含突變等位基因的酵母菌株，通過YRp質粒上的選擇基因進行選擇，
酵母轉化實驗
實驗材料酵母菌株質粒儀器、耗材YPD 平板SC-ura平板產孢子平板實驗步驟展開
酵母轉化實驗
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰儀器、耗材?搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟 1.? 在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。?2.? 轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD
將DNA導入酵母細胞實驗_乙酸鋰轉化
實驗材料待轉化的酵母菌株試劑、試劑盒YPD培養基YPAD培養基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培養基高純無菌水l0×TE緩沖液pH 7.5無菌10×乙酸鋰儲液：1 mol L乙酸鋰pH 7.5 (用稀乙酸調pH)過濾除菌DNA ：高分子質量單鏈載體DNA和待轉化DNA50% (m V) PE
將DNA導入酵母細胞實驗_電穿孔轉化
實驗材料待轉化的酵母菌株試劑、試劑盒 1 mol L 二硫蘇糖醇（DTT過濾除菌并儲存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇選擇平板儀器、耗材電穿孔儀：如Bio-Rad公司的帶脈沖控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm間隙的一次性電穿孔槽（
酵母轉化實驗_乙酸鋰轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰儀器、耗材搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟1. ?在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。?2. ?轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD培養基，然后
酵母轉化實驗_電穿孔轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒二硫蘇糖醇山梨醇儀器、耗材電穿孔儀器電擊池水浴鍋實驗步驟1. ?實驗前兩天，將轉化用酵母菌株的單菌落接種于5 ml YPD培養基中，30℃過夜培養至飽和。?2. ?轉化前一天晚上，在裝有500 ml YPD培養基的2 L 無菌燒瓶中接種適量的過夜培養液，于30℃劇烈搖動培養過
酵母轉化實驗_原生質體轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG選擇性再生瓊脂儀器、耗材水浴鍋離心機分光光度計培養箱實驗步驟1. ?在實驗前2天，將轉化用酵母菌株的單菌落接種到5 ml YPD培養基中，于30℃培養過夜（如果酵母菌株是溫度敏感的應在低溫下培養）。2. ?轉化前一天晚上，從5 ml 過夜培養
重組DNA的轉化實驗原理和操作步驟
實驗目的制備出感受態細胞，把體外重組的DNA引入受體細胞，使受體菌具有新遺傳性，并從中選擇出轉化子。實驗原理感受態就是細菌吸收轉化因子的生理狀態，只有發展為感受態的細胞才能穩定攝取外來的DNA分子。pUC18的LacZ基因區域當有DNA片段插入時，LacZ基因失活，轉化進入大腸桿菌并在含有IPTG和
DNA的轉化實驗
體外通過基因工程手段所構建的含目的基因的重組質粒，選用轉化和篩選技術， 可獲得含重組的陽性克隆。在此陽性克隆中，DNA可在生物體系中大量擴增，繁殖， 保存以及表達目的基因的產物，這是ＰＣＲ體外擴增DNA所不能替代的。配合DNA重組技術，所獲得的，不同目的需要的陽性菌株已廣泛應用于科研，醫藥生產和生物
酵母轉化
·?????????Yeast Transformation?(Gietz Lab)LiAc/SS-DNA/PEG Transformation·?????????Yeast Transformation?(Breeden Lab)LiAc method·?????????Large-Scale Y
質粒－DNA－的轉化實驗
實驗方法原理轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受體細胞一般
質粒－DNA－的轉化實驗
實驗方法原理 轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受
酵母轉化實驗_單鏈高分子量的擔體DNA制備
實驗材料DNA試劑、試劑盒TE酚氯仿乙酸鈉乙醇儀器、耗材超聲波發生器實驗步驟1. ?將DNA溶于pH8.0的1×TE緩沖液，終濃度為10 mg/ml。于4℃攪拌過夜。?2. ?用一個大的超聲探頭，在75%的滿功率下超聲處理DNA 30 s，以降低DNA溶液的粘度。取1 μg DNA在0.8%瓊脂糖凝
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗_LiAc轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒腺嘌呤亮氨酸LiAc儀器、耗材YEA 平板實驗步驟1. 在 YEA 平板上培養細胞直到長成可見單菌落。2. 接種單菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等營養缺陷互補物的 YEA 或 PM 培養基中，于允許溫度以 200 r/min 振蕩培養防止酵母菌沉積
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗
非洲粟酒裂殖酵母的LiAc轉化法 非洲粟酒裂殖酵母的電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 腺嘌呤亮氨酸LiAc儀器、耗材 YEA 平板實驗步驟 1. 在 YEA 平板上培養細胞直到長成可見單菌落。2. 接種單菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等營養缺陷互補物的 YEA 或 PM 培養基中，于允許溫度以 200 r/min 振蕩培養防止酵
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗
非洲粟酒裂殖酵母的LiAc轉化法非洲粟酒裂殖酵母的電穿孔轉化法實驗材料細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒腺嘌呤 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
酵母實驗操作方案（2)
附錄一 培養基 LB： Tryptone 10g 1% Yeast Extract 5g 0.5% NaCl 5g 0.5% 【Agar】 15g 1.5%（固體培養基另加） dH2O稀釋至1L，高壓滅菌 YPD： Yeast Extract 10g 1%
酵母實驗操作方案（1)
一．質粒酶切及線性化1）用維特潔日常型小量DNA純化試劑盒抽提9KSF2，可得到較純的質粒10μg/3ml菌液，終體積80ul。2）線性化質粒使用80μl酶切體系9KSF2質粒 70μl內切酶（SacI， SalI， BglⅡ） 2μl10 x buffer 8μl3）酶切3－16小時，一般3小時即
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒三梨糖醇儀器、耗材PM 或 YE 培養基實驗步驟1. 用 PM 或 YE 培養基培養細胞，至滴度到每毫升 1X107?個細胞。2. 用冰冷的過濾除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗細胞 3 遍，以降低細胞的導電性。3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重懸細胞，使滴度
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒PEG3350儀器、耗材YPAD 液體培養基渦旋振蕩器實驗步驟1. 將菌株接種 100 ml 的 YPAD 液體培養基，30℃ 振蕩培養過夜，使細胞滴度達到每毫升 1X108?到 2X108?個細胞。2. 3000 g 離心 5 分鐘沉淀細胞，用 100 ml 滅菌水洗兩遍，
DNA轉化實驗指導4
2B.??Transformation?1.?????Preparation of electrocompetent DH5a?cells:??autoclave 4 baffled 1 liter flasks containing 500 mL LB.??Remove a 1 mL aliquo
DNA轉化實驗指導5
2C.??Notes on Transformation?1.?????Bacto tryptone and yeast extract can cause allergic reactions.?2.?????All containers used to handle the bacteria (