酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定傷寒桿菌“O”抗體
酶聯免疫吸附試驗是用酶標記的抗體（或SPA）檢測未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗介紹，酶聯葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，見圖9 1.加抗原使之吸附于固相載體（如塑料反應板） 2.洗滌加待測血清 3.洗滌加酶標記SpA 4.洗滌加酶的底物。經酶的催化產生有色產物。材料： 1.聚乙烯塑料反應板（PH9.6時可吸附蛋白Ag） 2.抗原：傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原 3.待測血清 4.凍干酶聯葡萄球菌A蛋白（HRD—proteinA）純品 5.鄰苯二胺（OPD） 6.包被液：0.05M碳酸鈉—碳酸氫鈉溶液PH9.6 7.稀釋液：10%免疫血清PBS—吐溫20，防止非特異性吸附 8.洗滌液：0.02MTrisTWeen20,......閱讀全文
酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定傷寒桿菌“O”抗體
酶聯免疫吸附試驗是用酶標記的抗體（或SPA）檢測未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗介紹，酶聯葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，見圖9?1.加抗原使之吸附于固相載體（如塑料反應板）?2.洗滌加待測血清?3.洗滌加酶標記
酶聯免疫吸附（ELISA）測定傷寒桿菌“O”抗體實驗
實驗材料 傷寒桿菌試劑、試劑盒 鄰苯二胺碳酸鈉碳酸氫鈉PBS磷酸氫二鈉檸檬酸儀器、耗材 聚乙烯塑料反應板離心機搖床培養箱實驗步驟 1. ?抗原包被取潔凈的聚苯乙烯微量反應板，于每孔內加傷寒抗原0.1毫升（用包被緩沖液稀釋，蛋白含量10微克/毫升），置37℃1小時，棄抗原液，用洗滌液3次每次3分鐘。2
酶聯免疫吸附（ELISA）測定傷寒桿菌“O”抗體實驗
測定傷寒桿菌“O”抗體酶聯免疫吸附試驗是用酶標記的抗體（或SPA）檢測未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。實驗材料傷寒桿菌試劑、試劑盒鄰苯二胺碳酸鈉碳酸氫鈉PBS磷酸氫二鈉檸檬酸儀器、耗材聚乙烯塑料反應板離心機搖床培養箱實驗步驟1. ?抗原
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)
抗體夾心 ELISA 法檢測可溶性抗原實驗方法原理該檢測方法比抗原直接結合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2?5 倍（圖 1. 1. 3)。實驗步驟一、附加材料（其他材料見基本方案）特異性抗體（單克隆或多克隆）或者來自抗血清、腹水或雜交瘤上清液（單元1.4) 中的免疫球蛋白（單元 1.5，單元
酶聯免疫吸附試驗—抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)
實驗方法原理 該檢測方法使用毫克級的純化或半純化抗原，能篩選抗血清和雜交瘤上清液中的特 異性抗體（圖1.1. 1)。Img純化抗原可用于80?800個微量滴定板的篩選。實驗步驟 一、實驗材料：顯色劑：堿性磷酸酶標記的蛋白A (Sigma公司），堿性磷酸酶標記的蛋白G (Calbiochem公司），堿
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)1
間接ELISA法檢測特異性抗體實驗實驗方法原理該檢測方法使用毫克級的純化或半純化抗原，能篩選抗血清和雜交瘤上清液中的特 異性抗體（圖1.1. 1)。Img純化抗原可用于80?800個微量滴定板的篩選。實驗步驟一、實驗材料：顯色劑：堿性磷酸酶標記的蛋白A (Sigma公司），堿性磷酸酶標記的蛋白G (
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)5
實驗步驟一、附加材料（其他材料見基本方案）抗同種型包被抗體：重鏈特異抗體（抗 μ、α、γ、б、ε）、重鏈亞類特異抗體（抗 γ1、γ2a、γ2b、γ3、γ4）或輕鏈同種型特異抗體（抗 γ和 κ）（不可結合顯色 劑中的抗體）標準同種型抗體（如已知同種型純化抗體）顯色劑：堿性磷酸酶標記抗全部免疫球蛋白重鏈
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)7
實驗方法原理本檢測方法可用來篩選細胞表面抗原的特異性抗體（圖 1.1.6）。注意：所有步驟必須在 4°C、含有 NaN3 的生理緩沖液中進行。實驗步驟一、附加材料（其他材料見基本方案）未混合的細胞樣品堿性磷酸酶標記抗體或 F（ab’）（從免疫動物中獲得的抗免疫球蛋白抗體）陽性對照抗體（即與實驗細胞反
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)2
直接競爭ELISA法檢測可溶性抗原實驗實驗方法原理該檢測方法是使用特異性抗體和毫克級純化或半純化抗原來定性或定量測定可溶性 抗原的最有效的方法（圖1.1. 2)。用抗體替換特異性的酶標抗體，就可轉為間接方法， 以種屬特異性或同種型特異性酶結合物作為第三種試劑即可檢測結合的特異性抗體 的量。試劑、試劑
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)6
實驗方法原理在測定單一細胞群體的抗原表達水平時，該檢測過程（圖1.1.5）與流式細胞分析 一樣靈敏（單元4.1、單元4. 2）。但在檢測混合細胞時，敏感性不及流式細胞分析。用生物素化的抗體替代酶標抗體，就可轉化為間接方法，而后加入親和素標記的堿性磷酸 酶再次孵育可增加敏感性。實驗步驟一、附加材料（其
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)3
雙抗體夾心ELISA法檢測特異性抗體實驗方法原理在有少量酶標特異抗體但無法獲得純化抗原時，用該檢測方法篩選特異性抗體最為有效（圖1.1.4）。另外，這種方法也可利用那些結合同一抗原的不同單克隆抗體來繪制抗原表位圖。實驗步驟一、附加材料（其他材料見基本方案）包被抗體溶液（特異性針對待測種屬免疫球蛋白的
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試
間接ELISA法檢測特異性抗體實驗 備選方案1: 直接競爭ELISA法檢測可溶性抗原實驗 備選方案 2: 抗體夾心 ELISA 法檢測可溶性抗原 備選方案3：雙抗體夾心ELISA法檢測特異性抗體 備選方案4：夾心ELISA法檢測同種型實驗
酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) ：是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后
酶聯免疫吸附測定（ELISA）
基本原理????1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原
大腸桿菌O抗原，傷寒桿菌O抗原等的制備
大腸菌群并非細菌學分類命名，而是衛生細菌領域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，這些細菌在生化及血清學方面并非完全一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產酸產氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產氣克
酶聯免疫吸附（ELISA）實驗——間接法（測抗體）
實驗方法原理圖1：間接法測抗體示意圖間接法首先用抗原包被于固相載體，這些包被的抗原必須是可溶性的，或者至少是極微小的顆粒，經洗滌，加入含有被測抗體之標本，再經孵育洗滌后，加入酶標記抗抗體，(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM)，再經孵育洗滌后，加底物顯色，底物降解的量，即為欲測抗體的量，
酶聯免疫吸附試驗(ELISA)的原理
基本原理是把抗原或抗體在不損壞其免疫活性的條件下預先結合到某種固相載體表面，測定時，將受檢樣品(含待測抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按一定程序與固相載體上的抗原抗體起反應形成抗原或抗體復合物；反應終止時，固相載體上酶標抗原或抗體被結合量(免疫復合物)即與標本中待檢抗體或抗原的量成一定比例，經洗滌去除反
酶聯免疫吸附試驗ELISA方法簡介
近二十幾年來，免疫學分析方法發展很快，特別是在使用標記了的抗原和抗體的分析技術以后，使原來許多經典的分析方法在敏感性和特異性方面都不能相比。繼50年代的免疫熒光（IFA）和60年代的放射免疫(RIA)分析技術之后，在70年代初期又建立了用酶來標記抗原或抗體的分析技術。由于酶的高效生物催化作用，一個酶
酶聯免疫吸附試驗(ELISA)C1q測定法
1 原理包被于塑料板上的固相凝聚IgG與酶聯C1q的結合受標本中免疫復合物的抑制，是一種競爭性抑制試驗。為避免標本中內源C1q的干擾，應預先用IgG免疫吸附劑將其除去。 2 材料 (1) 聚苯乙烯反應板，酶聯免疫檢測儀。 (2) 免疫吸附劑系結合有IgG的纖維素。取
斑點酶聯免疫吸附試驗(DotELISA)
Hawkes等(1982)根據某些固相載體具有較強吸附蛋白質能力的特點，研究建立了斑點酶聯免疫吸附試驗(Dot-ELISA)，目前在醫學及獸醫工作中得以廣泛應用。該試驗以硝酸纖維素薄膜(NC)作固相載體，代替了聚苯乙烯反應板，從而克服了ELISA方法中包被好的酶標板保存運送不便及檢測需儀器等缺點，
酶聯免疫吸附測定（ELISA）操作要點
1 標本的采取和保存?可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如血清、尿液），有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝
酶聯免疫吸附測定法和中和抗體試驗的區別
ELISA有的用于檢測中和抗體的，但大部分包被的抗原都不是用于檢測中和抗體，但和機體的保護力有關；中和抗體試驗主要是檢中和抗體的，兩者方法也不一樣。
酶聯免疫吸附實驗—雙抗體夾心ELISA法檢測特異性抗體
實驗步驟雙 抗 體 夾 心 ELISA 法檢測特異性抗體在有少量酶標特異抗體但無法獲得純化抗原時，用該檢測方法篩選特異性抗體最為有 效（圖 1.1. 4)。另外，這種方法也可利用那些結合同一抗原的不同單克隆抗體來繪制抗原表位圖。附 加 材 料（其他材料見基本方案）包 被 抗 體 溶 液（特異性針對待
酶聯免疫吸附（ELISA）實驗——雙抗體夾心法（測抗原）
酶聯免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各種細胞內成份的定位。（2）研究抗酶抗體的合成。（3）顯現微量的免疫沉淀反應。（4）定量檢測體液中抗原或抗體成份。實驗方法原理圖1. 雙抗體夾心法測抗原示意圖?本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體，經洗滌后加入含有抗原之待測樣品，如待檢樣品中有相應抗
沙門氏桿菌介紹（三）
? 三、微生物學診斷 （一)分離與鑒定 1．標本：根據傷寒病的病程采取不同標本，通常第1～2周取血液，第2～3周取糞便或尿液。急性腸炎取患者吐瀉物和剩余食物。敗血癥取血液作培養。 2．分離培養與鑒定：血液應先接種膽汗肉湯增菌；糞便和經離心的尿沉渣可直接接種腸道桿菌選擇性培養基。37℃經18～2
酶聯免疫吸附劑測定——ELISA檢測
近年來在食品檢驗、疾病診斷和預防的過程中ELISA檢測也日益凸現其重要作用。 酶聯免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）即采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液
斑疹傷寒病毒的其他免疫學檢查介紹
（1）斑疹傷寒病毒—被動血凝試驗（PHA）：用傷寒桿菌菌體抗原致敏紅細胞，使之與被檢血清反應，根據紅細胞凝集狀況判斷有無傷寒特異性抗體存在，國內外報道陽性率90%～98.35%，假陽性率5%左右。鮑行豪等曾報道LSP-PHA對傷寒血培養患者的檢出率為89.66%，早期病人90.02%，臨床確診者
免疫學實驗酶聯免疫吸附試驗介紹
酶聯免疫吸附試驗介紹： 酶聯免疫吸附試驗是一種酶聯免疫技術。用于檢測包被于固相板孔中的待測抗原(或抗體)。即用酶標記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應在固相載體表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，最后通過酶作用于底物后顯色來判斷結果。 顏色反應的深淺與標本中相應抗
臨床化學檢查方法介紹酶聯免疫吸附試驗介紹
酶聯免疫吸附試驗介紹： 酶聯免疫吸附試驗是一種酶聯免疫技術。用于檢測包被于固相板孔中的待測抗原(或抗體)。即用酶標記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應在固相載體表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，最后通過酶作用于底物后顯色來判斷結果。 顏色反應的深淺與標本中相應抗
酶聯免疫吸附試驗的效果測定
測定內容包括酶和抗體活性、結合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結合率。⑴ 酶與抗體的活性 常用瓊脂擴散或免疫電泳法，使抗原與抗體形成沉淀線，經PBS漂洗1天，再以蒸餾水浸泡1小時，將瓊脂凝膠片浸于酶底物溶液中著色，如果出現應有的顏色反應，再用生理鹽水浸泡，顏色仍然不褪，表示結合物既有酶