免疫酶細胞化學實驗技術4
三、ICC在細胞功能研究中的應用 形態學研究目的之一是揭示組織細胞結構特征及其功能意義。利用ICC顯示給與細胞增殖標記物，是組織細胞學研究中形態和功能相結合的重要手段之一。目前常用的細胞增殖標記物有4種，Brdu (5—bromo—2--deoxyuridine), DNA polymerase α,PCNA （Proliferating cell nuclear antigen）,Ki—67 等，相對應的4種單克隆抗體均有商品出售。因組織細胞內無內源性Brdu存在，所以Brdu應用較廣。Brdu為胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細胞培養加入，而后利用抗Brdu單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。 筆者在觀察大鼠小腸上皮細胞增殖、代謝時，一次腹腔注射Brdu（Sigma）4mg/150～200g體......閱讀全文
免疫酶細胞化學實驗技術4
三、ICC在細胞功能研究中的應用 形態學研究目的之一是揭示組織細胞結構特征及其功能意義。利用ICC顯示給與細胞增殖標記物，是組織細胞學研究中形態和功能相結合的重要手段之一。目前常用的細胞增殖標記物有4種，Brdu (5—bromo—2--deoxyuridine), DNA polymerase
免疫酶細胞化學實驗技術
免疫酶細胞化學免疫酶細胞化學是免疫細胞化學（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗體特異反應存在的前提條件下，借助于酶細胞化學的手段，檢測某種物質（抗原/抗體）在組織細胞內存在部位的一門新技術：即預先將抗體與酶連結，再使其與組織內特異抗原反應，經細胞化學染色
免疫酶細胞化學實驗技術2
（四）染色原理及步驟 1．基本原理 酶標抗體與熒光色素標記抗體的染色相同，亦分直接法和間接法。直接法是將酶直接標記在每一抗體上，間接法是將酶標記在第二抗體上，檢測組織細胞內的特定抗原物質。間接法所用的第一抗體是對組織細胞內某種抗原的特異性抗體（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而絕大數單克隆
免疫酶細胞化學實驗技術3
一、對照實驗 1．吸收實驗 應用尚無文獻報告的抗血清/自己制備的抗血清進行ICC染色時，需用相應的抗原吸收抗血清后，再孵育標本，判斷結果的可信性（結果應為陰性）。常用的吸收實驗分固相吸收和液相吸收兩種（見本書第一章 ），對于不能形成沉淀，難以用離心沉降法分離的一些小分子多肽類抗原，以固相吸收為佳
細胞免疫化學：免疫酶標技術
1） 直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％?H2O2（或1％?H2O2?甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色
細胞化學技術4
6、基本實驗過程 用于大分子合成過程研究的放射自顯影技術： 同位素標記示蹤化合物→注入動物體內→ 取下器官或組織→切片→ 涂乳膠膜→自顯影→顯影和定影→染色→觀察 用于大分子定位研究的放射自顯影技術： 組織固定包埋→切片 ↓ 細胞化學反
免疫細胞化學技術觀察細胞成分實驗
實驗方法原理免疫細胞化學是在細胞化學技術的基礎上，吸收免疫學的理論和技術發展起來的一項技術，其基本原理是用熒光素或酶等標記物或顯色物標記特異性抗體，通過免疫學中的抗原抗體反應與細胞內的相應抗原結合，形成帶有熒光素或顯色物的抗原抗體復合物，因此可用熒光顯微鏡或普通光學顯微鏡觀察到復合物的存在，達到檢測
免疫細胞化學技術觀察細胞成分實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 免疫細胞化學是在細胞化學技術的基礎上，吸收免疫學的理論和技術發展起來的一項技術，其基本原理是用熒光素或酶等標記物或顯色物標記特異性抗體，通過免疫學中的抗原抗體反應與細胞內的相應抗原結合，形成帶有熒光素或顯色物的抗原抗體復合物，因
酶細胞化學技術的實驗方法介紹
樣品制備酶細胞化學的一個重要問題是既要保存好細胞內酶的活性，又要保存好細胞的結構，因此選擇適當的固定劑種類、濃度、固定的方式和時間是細胞化學技術的一個關鍵問題。光鏡樣品固定多選用中性福爾馬林或多聚甲醛,4℃、24小時，常規的石蠟包埋切片可以滿足相當一部分酶的細胞化學要求；電鏡樣品固定通常用0.5～2
電鏡酶細胞化學實驗
實驗方法原理 電鏡酶細胞化學反應分兩步：①細胞內酶在一定條件下與底物進行初級酶反應（形成初級產物）；②應用捕捉劑與初級產物反應形成電子致密物質。電鏡酶細胞化學捕捉方法很多，最常用于水解酶類的為金屬鹽沉淀法和應用于氧化還原酶類的為嗜鋨物質形成法。金屬鹽沉淀法原理是酶反應初級產物與重金屬結合形成不溶解的
酶細胞化學技術介紹
將細胞內的酶與底物相互作用， 再將酶反應的產物作為反應物質，在酶的作用部位進行捕捉，使其在顯微鏡下具有可見性。這種在酶作用下產生反應產物， 經捕捉反應來間接證明酶定位的反應稱為酶的細胞化學反應。
免疫酶組織化學技術
免疫酶組織化學技術 1．酶標直接法和間接法 Nakane(1966)將辣根過氧化物酶(HRP) 標記在抗體免疫球蛋白分子上，創建了酶標記免疫組化的直接法、間接法和橋法。 2．PAP法 Stemberger(1969)在酶橋法的基礎上，建立了非標記抗體法，先將HRP免
免疫電鏡相關技術實驗——酶標記免疫電鏡技術
實驗方法原理該技術是以酶為抗原—抗體反應的標記物，在不改變抗原抗體的免疫反應特異性，亦不降低酶活性條件下，與相應底物作用后形成不溶性的反應物。在電鏡下形成為電子散射力強的終末產物。用于免疫電鏡標記的酶有辣根過氧化物酶 (HRP)堿性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
免疫熒光細胞化學技術
免疫熒光細胞化學技術免疫熒光細胞化學是現代生物學和醫學中廣泛應用的技術之一，是由Coons等（1950）建立，經過近43年的發展，免疫熒光技術與形態學技術相結合發展成免疫熒光細胞（或組織）化學。它與親合化學技術如葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素與卵白素、植物血凝素（ConA等）相結合拓寬了領域；與激
酶細胞化學技術的概念
將細胞內的酶與底物相互作用， 再將酶反應的產物作為反應物質，在酶的作用部位進行捕捉，使其在顯微鏡下具有可見性。這種在酶作用下產生反應產物， 經捕捉反應來間接證明酶定位的反應稱為酶的細胞化學反應。
免疫酶細胞化學技術中的雙PAP法檢測微量抗原
在復合物體系中連接更多的PAP復合物，來進一步放大抗原，從而使靈敏度更為增強，適用于檢測微量抗原。實驗方法：?將固定后的標本用PBS漂洗；2.?于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用來密封內源性過氧化物酶；3.?PBS漂洗2次，每次3min；4.?在室溫下用二抗的正常血
免疫細胞化學和免疫熒光實驗
載玻片/蓋玻片處理聚醚酰亞胺或多聚賴氨酸在室溫下包被蓋玻片1小時。無菌水沖洗蓋玻片（3次 ，每次5分鐘）。可將蓋玻片干完全干燥，并在紫外光下消毒至少4小時。在玻片上種植細胞，或準備細胞離心涂片器，或做好涂抹準備。磷酸鹽緩沖液（ PBS ）進行簡短的沖洗。第一步：細胞固定用預冷的甲醇、丙酮（ 1-10
電鏡酶細胞化學實驗——樣品制備
目前電鏡能定位的酶主要有三類，它們是水解酶、氧化酶、轉移酶。通過電鏡酶細胞化學技術間接證明酶的存在，可定性研究細胞的標志酶，以及在正常和病理狀態下酶的改變與疾病之關系。實驗方法原理電鏡酶細胞化學反應分兩步：①細胞內酶在一定條件下與底物進行初級酶反應（形成初級產物）；②應用捕捉劑與初級產物反應形成電子
免疫熒光細胞化學技術3
四、熒光圖像的記錄方法 熒光顯微鏡所看到的熒光圖像，一是具有形態學特征，二是具有熒光的顏色和亮度，在判斷結果時，必須將二者結合起來綜合判斷。結果記錄根據主觀指標，即憑工作者目力觀察。作為一般定性觀察，基本上可靠的。隨著技術科學的發展，在不同程度上采用客觀指標記錄判斷結果，如用細胞分光光度計，圖像
免疫熒光細胞化學技術2
四、熒光抗體的保存 以0～4℃或-20℃低溫保存，防止抗體活性降低和蛋白變性。最好加入濃度為1：5000～10000的硫柳汞或1：1000～5000的疊氮鈉防腐，小量分裝如0.1～1ml，真空干燥后更易長期保存。[NextPage] 第三節 免疫熒光細胞化學染色方法 一、標本制作 可制作涂片
大鼠白細胞介素4（IL4）酶聯免疫分析
大鼠白細胞介素4（IL-4）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用???????目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿，細胞上清及相關液體樣本中白細胞介素4（IL-4）的含量。實驗原理：???本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白細胞介素4（IL-4）水平。用純化的大鼠白細胞介素4抗體包被微
大鼠白細胞介素4（IL4）酶聯免疫分析
大鼠白細胞介素4（IL-4）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用???????目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿，細胞上清及相關液體樣本中白細胞介素4（IL-4）的含量。實驗原理：???本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白細胞介素4（IL-4）水平。用純化的大鼠白細胞介素4抗體包被微
酶免疫細胞化學染色操作指南1
一、材料和試劑1、玻片：須用免疫組化專用玻片，或用2%多聚賴氨酸包被處理玻片。2、5-10%正常山羊血清封閉液，用PBS配。3、3%牛血清白蛋白（BSA），用PBS配。4、0.01M pH7.4 PBS5、1% BSA-PBS（含0.05% Tween20）6、AEC底物（1）底物緩沖液（20X）
酶免疫細胞化學染色操作指南2
2、加3% H2O2，細胞片20ul/孔，培養板100ul/孔，使充分覆蓋住細胞。3、室溫10分鐘后，甩掉 H2O2，用PBS輕輕淋洗2分鐘。用濾紙吸干細胞周圍水份，96孔在濾水紙上扣干，但注意保持細胞濕潤。三、封閉細胞片用5-10%正常山羊血清（20ml/孔），細胞板用2-5%BSA（PBS配制）
免疫細胞化學法的技術特點
免疫細胞化學是將免疫學基本原理與細胞化學技術相結合所建立起來的新技術，根據抗原與抗體特異性結合的特點，檢測細胞內某種多肽、蛋白質及膜表面抗原和受體等大分子物質的存在與分布。
免疫細胞化學（immunocytochemistry）技術的分類
1）按標記物質的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標法和免疫金銀法等。 2）按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。 3）按結合方式
免疫細胞化學法的技術分類
①直接法：用標記抗體與抗體中的相應抗原直接結合，操作方法簡便，特異性高，但敏感性較差，此法可用于檢定未知抗原；②間接法：先用未標記的具有特異性的第一抗體與樣品中的相應抗原結合，然后再以標記的第二抗體與特異性的第一抗體結合；第二抗體是用第一抗體作為抗原注入另一動物體內誘導產生的抗體，然后再結合以標記物
猴白細胞介素4（IL4）酶聯免疫分析（ELISA）
猴白細胞介素-4（IL-4）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用???????目的：本試劑盒用于測定猴血清，組織及相關液體樣本中白細胞介素4（IL-4）的含量。實驗原理：??本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中猴白細胞介素-4（IL-4）水平。用純化的猴白細胞介素-4（IL-4
人白細胞介素4（IL4）酶聯免疫分析（ELISA）
人白細胞介素-4（IL-4）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用???????目的：本試劑盒用于測定人血清，組織及相關液體樣本中白細胞介素4（IL-4）的含量。實驗原理：??本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素-4（IL-4）水平。用純化的人白細胞介素-4（IL-4
非標記抗體免疫酶組織化學實驗
實驗方法原理 首先用酶免疫動物制備成效價高、特異性強的抗酶抗體。在特異性抗體與抗酶抗體之間利用第二抗體作「橋梁」，將它們連接起來，再將酶結合在抗酶抗體上，經顯色顯示抗原的定位。其基本流程為：抗原+特異性抗體 → 第二抗體（橋抗）→ 抗 HRP 抗體 → HRP → DAB+H2O2（顯色）。因為橋抗