USE誘變實驗
實驗材料 帶 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態 帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態 試劑、試劑盒 退火緩沖液 貯存液 合成緩沖液 噬菌體 T4DNA 連接酶 噬菌體 T4DNA 聚合酶或測序酶 單一位點的限制性內切核酸酶 瓊脂糖凝膠 誘變引物 選擇引物 質粒 DNA 儀器、耗材 7......閱讀全文
USE－誘變實驗
實驗材料 帶 mutS 表型（例如BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態試劑、試劑盒 退火緩沖液貯存液合成緩沖液噬菌體 T4DNA 連接酶噬菌體 T4DNA 聚合酶或測序酶單一位點的限制性內切核酸酶瓊脂糖凝膠誘變引物選擇引物質粒 DNA儀器、耗材 70°C
USE－誘變實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 帶 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態 帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態 試劑、試劑盒
USE－誘變實驗
本方法中，兩條寡核苷酸引物雜交到變性重組質粒 DNA 雙鏈的同一條鏈上。一條引物（誘變引物）攜帶一個擬引進靶 DNA 序列的突變，第二條引物攜帶一個能破壞質粒單一限制酶位點的突變。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料帶 mutS 表型（
誘變－PCR－實驗
誘變 PCR 最大的優勢是以一種沒有偏好的方式引入了各種類型的突變，而不是獲得高水平的單一的擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Nati
誘變－PCR－實驗
試劑、試劑盒?氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高純度的脫氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物瓊脂糖凝膠用溴化乙錠染色儀器、
誘變－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿 異戊醇 乙醇 礦物油或者一個蠟珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突變 PCR 緩沖液
定點誘變實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 TE寡核苷酸引物質粒dNTPDNA聚合酶氯仿石蠟油無水乙醇儀器、耗材 離心管熱循環儀離心機實驗步驟 1. ?利用突變區兩側的限制性內切酶位點將待誘變的DNA片段亞克隆進高拷貝數的載體中。?2. ?用小量制備的質粒提取模板DNA，用TE緩沖液重懸100 ng DNA至終濃
定點誘變實驗
基本方案 利用PCR引物點突變 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
Use－of－Micropipets
A. Gilson-style Pipetmen Micropipets (and similar models)We primarily use the Gilson micropipets in the core course labs. We have four sizes identifie
Use－of－a－Hemacytometer
A hemacytometer (also spelled hemocytometer) is an etched glass chamber with raised sides that will hold a quartz coverslip exactly 0.1 mm above the c
酵母菌細胞的誘變實驗——甲乙硫醚誘變
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD磷酸鈉緩沖液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸鈉儀器、耗材試管搖床離心機平板實驗步驟1. ?將過夜培養的待誘變酵母菌株轉接于5 ml YPD培養基，于30℃繼續培養。檢查細胞密度，記錄并調整到2×108細胞/ml。2. ?轉移1 ml 的菌懸液到無菌的離心管中。高速離心5~10
酵母菌細胞的誘變實驗——紫外光誘變
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD刀豆氨酸儀器、耗材紫外光殺菌燈紫外光放射量測定器實驗步驟1. ?將過夜培養的酵母菌培養液接種到5 ml YPD培養基中，于30℃培養。離心5~10 s，用1 ml 無菌水重懸沉淀細胞，重復洗滌1次，再用1 ml 無菌水重懸。?2. ?檢查細胞密度，記錄數據后將細胞密度調
USE－OF－THE－LIGHT－MICROSCOPE
USE OF THE LIGHT MICROSCOPEEach time the microscope is to be used it should be set up correctly to give a good image. Most often users forget to adjus
區域特異性誘變實驗
區域特異性誘變 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 可在長達3‘的克隆化DNA片段上產生大量的隨機分布的核苷酸替換突變，在將DNA克隆到一個可用來分離單鏈DNA的載體后，用各種可造
區域特異性誘變實驗
區域特異性誘變實驗，用于（1）基因誘導改造（2）基因的特定表達（3）臨床抗腫瘤等靶點的發揮。實驗方法原理可在長達3‘的克隆化DNA片段上產生大量的隨機分布的核苷酸替換突變，在將DNA克隆到一個可用來分離單鏈DNA的載體后，用各種可造成特定堿基損傷的化學試劑處理。實驗材料DNA試劑、試劑盒乙酸鈉亞硝酸
DNA的接頭分區誘變實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 霧水乙醇EDTAT4 DNA連接酶TENaCl儀器、耗材 培養箱水浴鍋實驗步驟 1. ?用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在質粒的目的區域產生一嵌套式的5’或3端'缺失突變體。首先在目的序列附近用一限制酶使質粒線性化，在用Bal 31消化時，應確定其切割效
DNA的接頭分區誘變實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒 霧水乙醇 EDTA T4 DNA連接酶 TE
區域特異性誘變實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?乙酸鈉亞硝酸鈉TE無水乙醇dNTP反轉錄酶RNA酶洗脫液溴化乙錠儀器、耗材?水浴鍋培養箱實驗步驟 1.? 用限制性內切核酸酶消化DNA以獲得目的DNA片段，將靶片段雙向克隆到M13噬菌體載體或含有M13復制起始子的質粒載體中。從100 ml 感染細抱培養物中提取單鏈DN
DNA的接頭分區誘變實驗
Linker scanner mutations （接頭分區突變）：體外在限制性片段加上位點，使兩個DNA分子發生重組產生，結果在重組的位點加上連接序列。實驗材料DNA試劑、試劑盒霧水乙醇EDTAT4 DNA連接酶TENaCl儀器、耗材培養箱水浴鍋實驗步驟1. ?用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核
Use－of－the－GUS－Reporter－Gene
One of the most important considerations in the expression of heterologous proteins in plants is the choice of promoter. The study of promoter act
Use－of－Transmission－Electron－Microscopy
?Use of Transmission Electron MicroscopyOverviewA protocol describing the use of Zeiss EM9-S transmission electron microscopy is presented.?MaterialZe
定點誘變實驗——基本方案
定點突變是指通過聚合酶鏈式反應（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因組，也可以是質粒）中引入所需變化（通常是表征有利方向的變化），包括堿基的添加、刪除、點突變等。定點突變能迅速、高效的提高DNA所表達的目的蛋白的性狀及表征，是基因研究工作中一種非常有用的手段。實驗材料DNA試劑、試劑盒TE寡核
誘變物質的微核測定實驗
實驗方法原理：微核（micronuclei)簡稱（MCN）是真核類生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經輻射或化學藥物的作用而產生的。在細胞間期，微核呈圓形，游離于主核之外，大小應在主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣，也具有伍萬DNA的能力。一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲
簡并寡核苷酸誘變實驗
小段DNA序列中產生大量突變 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌 試劑、試劑盒
誘變物質的微核測定實驗
實驗方法原理 微核（micronuclei)簡稱（MCN）是真核類生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經輻射或化學藥物的作用而產生的。在細胞間期，微核呈圓形，游離于主核之外，大小應在主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣，也具有伍萬DNA的能力。一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲
簡并寡核苷酸誘變實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS無水乙醇儀器、耗材 水浴鍋離心機分光光度計實驗步驟 1. ?設計寡核苷酸，其3‘端含有由8個核苷酸組成的回文結構，且包含某一限制性內切酶的識別位點；如果可能的話，5’端也應有一含某個限制性內切酶位點的序列。中間區段則應含目
誘變物質的微核測定實驗
1、了解微核測定的方法與意義2、尋找新的測試系統及新的更安全有效的植物誘變劑實驗方法原理微核（micronuclei)簡稱（MCN）是真核類生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經輻射或化學藥物的作用而產生的。在細胞間期，微核呈圓形，游離于主核之外，大小應在主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學反應性
簡并寡核苷酸誘變實驗
本方法的一個重要特點就是將單鏈的簡并寡核苷酸轉變成同源雙鏈分子后直接克隆進常規載體。由于不同的寡核苷酸可通過其3’末端的回文結構雜交，因此，寡核苷酸實際上起互為引物的作用，在大腸桿菌DNA聚合酶I klenow片段作用下延伸。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS
酵母菌細胞的誘變實驗
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD磷酸鈉緩沖液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸鈉儀器、耗材?試管搖床離心機平板實驗步驟 1.? 將過夜培養的待誘變酵母菌株轉接于5 ml YPD培養基，于30℃繼續培養。檢查細胞密度，記錄并調整到2×108細胞/ml。2.? 轉移1 ml 的菌懸液到無菌的離心管中。高速離心5
CREATION－AND－USE－OF－YOUR－INFECTIOUS－VECTOR
實驗概要CREATION AND USE OF YOUR INFECTIOUS VECTOR實驗步驟Day 1? ? ? ? 1. Plate 5 x 105 293T cells in 6 cm2 dishes containing 5 mL of media. (This can be scal