提取的基因組DNA有降解如何解決
選取的材料不新鮮或反復凍融,采集材料后未及時處理或未低溫保存:陳舊血液或不新鮮的材料中,細胞凋亡導致DNA降解,或者低溫保存的樣品經反復凍融導致細胞破碎,內源性核酸酶降解DNA,因此應該選用新鮮的材料樣品,不能及時處理則低溫保存,運輸過程中應該使用干冰: 1 ) 未能有效的抑制內源性核酸酶的作用: 某些DNase含量豐富的動植物組織樣品應在液氮中研磨或勻漿,研磨過稱中隨時補充液氮,并在樣品未完全解凍之前加入含有抑制核酸酶作用的裂解液。 2 ) 操作過于劇烈導致 DNA 被機械打斷: 預處理的樣品應該加入細胞裂解以后,所有操作應該盡量柔和,避免劇烈振蕩。......閱讀全文
基因組DNA的提取
基因組DNA的提取概 述? 基因組DNA的提取通常用于構建基因組文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用基因組DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中, 可用玻棒將其取出,而小分
基因組DNA的定義
中文名稱基因組DNA英文名稱genomic DNA定 義組成生物基因組的所有DNA。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)
基因組DNA的提取
第一節 概 述DNA的提取通常用于構建文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中,可用玻棒將其取出,而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部,
純化DNA實驗_基因組DNA的快速純化
試劑、試劑盒尾部緩沖液蛋白酶 K儀器、耗材離心管玻璃棒實驗步驟第 1 天1. 大約 1.5 cm 長的尾部活檢樣品放在一個 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部緩沖液的小離心管中,加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K,在 55℃ 振搖溫育過夜。尾部緩沖液(配 25 ml)50 mmol/L
血基因組DNA提取實驗——血基因組DNA-試劑盒提取法
血基因組DNA提取可用于:(1)從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細胞、培養細胞、病毒和線粒體中提取DNA;(2)用于后續測序、遺傳信息學等研究。實驗方法原理采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)從抗凝全血中得到基因組DNA。實驗材料抗凝全血試劑、試劑盒血基因組DNA 試劑盒儀
植物基因組DNA的RFLP
實驗概要本實驗介紹了植物基因組DNA的RFLP多態性分析的原理及操作步驟。通過本實驗可了解不同植物或同一植物不同個體之間基因組DNA順序的差異性,掌握DNA限制性酶切片段長度多態性研究的基本方法。實驗原理DNA多態性是指DNA堿基順序的差異性。這種差異性不僅存在于不同的植物之間,也存在于同一種植物的
小鼠肝基因組DNA制備
原理DNA 以核蛋白形式存在于細胞核中,制備 DNA 的原則是既要將 DNA 與蛋白質、脂類和糖類等分離,又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及鏈霉蛋白酶 E 的應用使這兩個原則得到了保證。蛋白酶K 或鏈霉蛋白酶 E 均為廣譜蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。
血基因組DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)從抗凝全血中得到基因組DNA。 實驗材料 抗凝全血
基因組DNA的快速純化
第 1 天1. 大約 1.5 cm 長的尾部活檢樣品放在一個 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部緩沖液的小離心管中,加 35 μl 10 mg/ml蛋白酶 K,在 55℃ 振搖溫育過夜。尾部緩沖液(配 25 ml)50 mmol/L Tris,pH 8??????????????????????
細菌基因組DNA提取實驗
細菌基因組DNA提取可應用于:(1)獲得細菌基因組DNA;(2)作為PCR模板;(3)用于測序、遺傳信息分析等。實驗方法原理本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0x109?細菌中獲得多至20 ug 的基因組DN
細菌基因組DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0x109 細菌中獲得多至20 ug 的基因組DNA。用于PCR、Southern 印跡分析、RAPD
細菌基因組DNA提取實驗
實驗方法原理 本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0×109 細菌中獲得多至20 μg 的基因組DNA。用于PCR、Southern 印跡分析、RAPD、RFLD 等分子生物學實驗。實驗材料 細菌培養物
關于土壤基因組DNA提取
土壤樣品含有大量的微生物,其中絕大部分的微生物都是無法直接培養進行繁殖和研究。從土壤樣品中提取?DNA?是研究土壤微生物zui為有效的方法。目前從土壤樣品中提取微生物?DNA?的方法主要有直接法和間接法。直接法是指把土壤樣品放在裂解液中,經過有效的破壁方法使微生物的DNA?全部釋放到裂解液中,然后再
血基因組DNA提取實驗
實驗方法原理 本試劑盒采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)從抗凝全血中得到基因組DNA。適用于從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細胞、培養細胞、病毒和線粒體中提取DNA。實驗材料 抗凝全血試劑、試劑盒 血基因組DNA 試劑盒儀器、耗材 96孔深孔板96圓孔板96孔DNA制備板
擬南芥基因組DNA的提取
實驗概要本實驗介紹了用CTAB法提取擬南芥基因組DNA。主要試劑CTAB提取液(2%CTAB,50mMEDTA,50mM Tris-HCl,PH 8.0,0.84M NaCI,0.05%巰基乙醇),氯仿,無水酒精,70%的酒精主要設備1.5 mL離心管,65℃水浴鍋,高速離心機,研缽實驗材料擬南芥葉
細胞化學詞匯基因組DNA
中文名稱:基因組DNA英文名稱:genomic DNA定 義:組成生物基因組的所有DNA。應用學科:生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)
小鼠肝基因組DNA制備
原理DNA 以核蛋白形式存在于細胞核中,制備 DNA 的原則是既要將 DNA 與蛋白質、脂類和糖類等分離,又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及鏈霉蛋白酶 E 的應用使這兩個原則得到了保證。蛋白酶K 或鏈霉蛋白酶 E 均為廣譜蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。
血基因組DNA提取實驗——血基因組DNA大量試劑盒提取法
實驗方法原理本試劑盒采用獨特的兩相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DN的目的。適合從5 ml 的抗凝人或哺乳動物全血,或500 ul 抗凝鳥類或兩棲動物全血中獲得多至250 ug 的基因組DNA。實驗材料抗凝全血試劑、試劑盒血基因組DNA大量試劑盒儀器、耗材DNA
哺乳動物中制備基因組DNA實驗——制備DNA
在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素,以保證DNA的完整性,為后續的實驗打下基礎。一般真核細胞基因組DNA有107-9bp,可以從新鮮組織、培養細胞或低溫保存的組織細胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞,隨后用酚抽提而實現的。實驗材料動物組織試劑、
基因組DNA的得率較低或者無基因組DNA原因及解決方法
1 ) 樣品材料老化或者反復凍融導致 DNA 含量下降: 應選擇新鮮的材料樣品,如新鮮血液、新鮮菌液、剛離體的動物組織或幼嫩的植物組織等,不能立即處理的樣品應放入液氮或-70℃低溫保存,以免DNA降解。 2 ) 樣品破壁或者裂解不完全, DNA 未充分釋放: 動植物樣品應在液氮中充分研磨
植物組織制備基因組DNA實驗
氯化銫法 CTAB法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中, 可用玻棒將其取出,而小分子DNA則
基因組DNA的純化與回收
實驗概要質粒、噬菌體等經酶切,電泳;PCR產物經電泳后,常常需要對一些DNA電泳片段進行回收和純化,用于亞克隆、探針標記、測序等。DNA回收和純化常用方法有壓碎法、低融點瓊脂糖法、凍融法等,也有現成的試劑盒供應。主要試劑酚、氯仿、NaAc、無水乙醇、TE、Tris-HCl飽和酚、異丙醇、低融點瓊脂糖
怎樣對基因組DNA質量檢測
怎樣對基因組DNA質量檢測用凝膠電泳看,有沒有質白質和RNA等物質的污染,還可以測OD,用OD260/280來判斷,當OD260/OD280< 1.8,表示蛋白質含量較高當OD260/OD280> 2.0,表示RNA含量較高當OD260/OD280=1.2.0,表示DNA較純
真核細胞基因組DNA的提取
實驗概要高等動物,高等植物的基因組相當龐大,如人類細胞基因組由30億個堿基對組成,果蠅基因組有1.4×108個堿基對,水稻基因組有1.4×109個堿基對。真核細胞基因組中,約1萬-1.5萬個可表達的結構基因,其它大量存在的是調控序列和內含子序列。可以說某特定物種的基因組,包含了該物種生長,發育,繁殖
核酸提取-基因組DNA的提取
?? DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學研究的主要對象,因此DNA的提取也應是分子生物學實驗技術中的最重要、最基本的操作,如不能有效的完成DNA提取方面的工作,那就根本談不上進行分子生物學方面的實驗。在DNA提取過程中應做到1,根據不同研究需要,保證結構的相應完整性;2,盡
細菌中制備基因組DNA實驗
小量制備 氯化銫法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質,再用酚和氯仿
生物基因組DNA的分類介紹
1、蛋白編碼序列。以三聯體密碼方式進行編碼。編碼DNA在基因組中所占比例隨生物而異,在人類細胞基因組中,這一比例只有1.5%左右。這類編碼序列主要是非重復的單一DNA序列,一般在基因組中只有一個拷貝(單一基因),然而,也有可能有兩個或幾個拷貝甚至多達上千個拷貝的情況,這些都來自于從基因家族里派生
昆蟲全基因組DNA的提取
實驗概要利用改進的CTAB 法提取昆蟲全基因組DNA。主要試劑1. 蛋白酶K[美國Merck公司]2. 三羥甲基氨基甲烷(Tris)[美國Amresco公司]3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]4. 瓊脂糖及溴化乙錠(EB)[美國Amresco公司生產]5. 乙二胺四乙酸鈉(Na2ED
基因組DNA-Southern雜交操作步驟
1)基因組DNA Southern印跡的制備 預備 1.用適當的限制性內切酶消化基因組DNA樣品(10μg)。 2.進行瓊脂糖凝膠電泳。一般用0.7~1.0%的瓊脂糖凝膠分離基因組DNA,它在1~15kb的范圍內有較好的分辨率,可選用TBE或TAE緩沖液。瓊脂糖凝膠電泳需在1V/cm的電
從動物組織提取基因組DNA
實驗概要本實驗以哺乳動物新鮮組織為材料,學習基因組DNA提取的一般方法。實驗原理基因組DNA的提取通常用于構建基因組文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用基因組DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀