蛋白質、多肽液相色譜純化方法
1、純化的一般目標和方法 首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟（例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等）成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。 然后進行捕獲色譜（capturechromatography），主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步最關心的是流速和載量，常采用高載量、快流速凝膠。 經過濃縮的部分純化的樣品進行中級色譜（intermediatechromatography），目的是去除較難去除的雜質，此步最關心的是分辨率，常采用高分辨率的細顆粒凝膠。 最后為了得到符合要求的最終產品，去除殘存的雜質以及目的蛋白的多聚物或者降解片斷，進行精制色譜（polishingchromatography），常采用具有高分辨率的凝膠過濾凝膠進行凝膠過濾色譜。 2、純化前的準備工作 （1）樣品穩定性試驗 a、測定樣品在pH2-9的穩定性； b、測定樣品在0-4mol/LNaCl及0......閱讀全文
蛋白質、多肽液相色譜純化方法
?? 1、純化的一般目標和方法 首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟（例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等）成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。 然后進行捕獲色譜（capturechromatography），主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步最關心的是流速和載量，常采用高載
蛋白質、多肽液相色譜純化方法簡介
1、純化的一般目標和方法首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟(例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等)成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。?然后進行捕獲色譜(capture chromatography)，主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步最關心的是流速和載量，常采用高載量、快流速
蛋白質、多肽液相色譜純化方法簡介
1、純化的一般目標和方法 首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟(例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等)成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。 然后進行捕獲色譜(capture chromatography)，主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步最關心的是流速和載量
蛋白質、多肽液相色譜純化方法簡介
?修飾肽純化的一般目標和方法? ? 首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟（例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等）成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。然后進行捕獲色譜（capture chromatography），主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步zui關心的是流速和載量，常采用
蛋白質、多肽液相色譜純化方法簡介
1、純化的一般目標和方法首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟(例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等)成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。然后進行捕獲色譜(capture chromatography)，主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步最關心的是流速和載量，常采用高載量、快流速凝
蛋白質、多肽液相色譜純化方法簡介
1、純化的一般目標和方法首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟（例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等）成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。然后進行捕獲色譜（capture chromatography），主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步最關心的是流速和載量，常采用高載量、
蛋白質、多肽液相色譜純化方法簡介
修飾肽純化的一般目標和方法 首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟(例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等)成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。 然后進行捕獲色譜(capture chromatography)，主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步最關心的是流速和載
蛋白質、多肽液相色譜純化方法介紹（三）
2、純化前的準備工作?（1）樣品穩定性試驗?a、測定樣品在pH2-9的穩定性；b、測定樣品在0-4mol/LNaCl及0-2mol/L硫酸銨中的穩定性；c、測定樣品在0-50%乙醇、甲醇中的穩定性；d、測定樣品在4-40℃的穩定性；e、室溫下靜置過夜，測定對蛋白水解酶的穩定性。（2）樣品預處理?a、
蛋白質、多肽液相色譜純化方法介紹（一）
1、純化的一般目標和方法?首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟（例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等）成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。然后進行捕獲色譜（capturechromatography），主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步最關心的是流速和載量，常采用高載量、快流速凝
奶制品蛋白質、多肽液相色譜純化方法介紹
1、純化的一般目標和方法?首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟(例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等)成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。?然后進行捕獲色譜(capture chromatography)，主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步關心的是流速和載量，常采用高載量、快流速
蛋白質、多肽液相純化方法簡介
修飾肽純化的一般目標和方法? ? 首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經過一些粗提的步驟（例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等）成為穩定的可以用于色譜分離的樣品。然后進行捕獲色譜（capture chromatography），主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步zui關心的是流速和載量，常采用高
正相液相色譜方法
正相液相色譜方法建立的一般模式與反相液相色譜類似。正相液相色譜的色譜柱選擇范圍較寬，氰基柱通常是首選；與氰基柱相比，硅膠柱可獲得更大的值，適合于異構體和疏水性溶質的分離，但分析時必須嚴格控制流動相中水含量，也不適于梯度分離:二醇基柱和氨基柱穩定性較差，僅在其他類型正相色譜柱無法完成分離時采用；氧化鋁
反相高效液相層析實驗_多肽和蛋白質的分離
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒TFA乙腈鹽酸胍儀器、耗材層析柱HPLC進樣器實驗步驟1. ?用經脫氣的HPLC級水洗去反相柱的有機溶劑，梯度從100%有機溶劑到100%水，流速1 ml/min，持續15 min 以上。?2. ?以100%的TFA/乙腈緩沖液平衡柱子至柱壓和光吸收值達到恒定。用10~15
關于分離純化多肽、蛋白質的分析方法親和層析的介紹
AC 是利用連接在固定相基質上的配基與可以和其特異性產生作用的配體之間的特異親和性而分離物質的層析方法。自1968 年Cuatrecasas 提出親和層析概念以來，在尋找特異親和作用物質上發現了許多組合，如抗原-抗體、酶-催化底物、凝集素-多糖、寡核苷酸與其互補鏈等等。對多肽類物質分離目前主要應
色譜技術方法高效液相色譜
高效液相色譜 （HPLC）是目前應用最多的色譜分析方法，高效液相色譜系統由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩；進樣系統要求進樣便利切換嚴密；由于液體流動相粘度遠遠高于氣體，
蛋白質純化方法
蛋白質的提純? ? 蛋白質純化方法屬于生物化學技術。1、超速離心法? ? 此法分離和純化抗原的原理是利用各顆粒在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度梯度層內，達到彼此分離的目的。常用的密度梯度介質有蔗糖、甘油、CsCl等。? ? 用超速離心或梯度密度離心分離和純化抗原時，除個
液相色譜流動相的貯存方法
液相色譜流動相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內，不能貯存在塑料容器中。因為許多有機溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料中的增塑劑，導致溶劑被污染。被污染的溶劑如用于液相色譜系統，可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴，防止溶劑揮發引起組成的變化，同時防止空氣中的氧和二氧化碳溶入流動相中。 液相色譜
液相色譜柱選擇方法
一、液相色譜柱選擇方法|液相色譜柱選擇的簡單思路? 1.確定分離目的確定你的應用是否要求高分離度、短分析時間、高靈敏度、長柱壽命，低的操縱本錢等等。? 2.評估分析物的化學性質評估分析物的化學性質..諸如化學結構、溶解性、穩定性等等。? 3.選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理和化學性質。?
高速液相色譜方法解析
在生物工程中，作為代謝產生的物質群種在分離、精制過程中，生理物質容易失去活性，而且被分離物的分布范圍甚廣，如在水相溶液中時，性質相類似的蛋白質、氨基酸、核酸（DNA、NRA），抗體以及含有遺傳基因結構的生物物質，用通常的化學方法很難進行分離。? 80年代中期，采用高速液相色譜方法，便有效地解決了這
高效液相色譜定性方法
與氣相色譜相比，高效液相色譜定性的難度更大。HPLC過程中影響待測組分遷移的因素較多，同一組分在不同色譜條件下的保留值可能相差很大。即便在相同的操作條件下，同一組分在不同色譜柱上的保留值也可能有很大差別。因此，在高效液相色譜分析過程中，對定性分析方法提出了更高的要求。 （1）利用檢測器的選擇性進
液相色譜操作方法
準備與開機??1．打開主機箱門，在進樣閥和檢測器間安裝合適的色譜柱。?2．打開計算機電源開關，打開LC電源開關。?3．打開柱箱電源開關，設定分析溫度。?4．雙擊計算機桌面上的Instrument online圖標進入工作站系統。??二、編輯LC分析方法??1．在Instrument online主界
液相色譜常用洗脫方法
進行液相色譜分析時，常用兩種洗脫方式，一種為等度洗脫，另一種為梯度洗脫。? 用等度洗脫進行色譜分離時，由不同溶劑構成的流動相的組成，如流動相的極性、離子強度、pH值等，在分離的全過程中皆保持不變。用梯度洗脫進行色譜分離時，在洗脫過程中含2種或兩種以上不同極性溶劑的流動相組成會連續或間歇地改變，其間可
液相色譜柱選擇方法
液相色譜柱選擇方法 一、液相色譜柱選擇方法|液相色譜柱選擇的簡單思路 1.確定分離目的確定你的應用是否要求高分離度、短分析時間、高靈敏度、長柱壽命，低的操縱本錢等等。 2.評估分析物的化學性質評估分析物的化學性質..諸如化學結構、溶解性、穩定性等等。 3.選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（八）
肽圖分析法 - 蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南反相高效液相色譜已成為蛋白質分析和表征的標準方法，尤其是治療性藥物的分析和表征。反相色譜分析法分辨率高，檢測靈敏度好，能夠提供大量關于蛋白質的信息。有些時候，蛋白質作為完整的分子分析，但更多的時候采用蛋白水解酶作用于特殊的氨基酸殘基將碳骨架斷開，
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（三）
蛋白質純化RP-HPLC 是一種有效的蛋白質/多肽純化工具。通過 RP-HPLC 法可以從雜質中分離目標蛋白/多肽，采集到的片段可用于進一步研究，以及借助正交分析技術的分析，甚至可作為治療藥物。在蛋白質/多肽分析過程中，色譜條件優化的目標是優化分辨率和保留時間。制備色譜法分離蛋白質/多肽時，色譜條件
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（一）
蛋白質組學蛋白質組學是鑒定和定量細胞、組織或生物體蛋白質的科學，目的是了解生物學變化和疾病狀態，開發疾病的生物標記和治療藥物的靶點。如果將一個基礎蛋白的各個修飾蛋白算作一個蛋白，那么哺乳動物細胞含多達3~4萬個蛋白。當計算各個修飾后的蛋白時，蛋白質的數量遠遠超過了10萬。細胞內不同蛋白質的豐度或濃度
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（十六）
選擇合適的色譜柱微粒。通過與柱內填充微粒疏水表面的相互作用實現蛋白質與多肽的分離。柱內填充粒通常以硅膠為基礎，這是因為硅膠的穩定性高，能夠在大多數溶劑條件下（除了pH大于6.5的情況）保持穩定，此外，硅膠可以形成各種大小的具有不同直徑的多孔球形顆粒。硅膠純度。高效液相色譜柱所用硅膠填料的純度對分離性
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（九）
胰蛋白酶水解分析。蛋白質水解產生的肽段利用反相高效液相色譜分析，流動相采用含TFA體系（參見第15-17頁），以起始濃度約5%的乙腈梯度洗脫（乙腈起始濃度低于5%可能導致較早洗脫出肽的色譜的不可重現性），乙腈濃度逐漸升至70%（參見圖31）。梯度洗脫的時間取決于待水解蛋白的大小。大分子蛋白比小分子蛋
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（十四）
蛋白質/多肽液相分析中的流動相選擇有機溶劑可將吸附在疏水界面的蛋白質洗脫（圖14）。在梯度洗脫期間，當有機溶劑量達到針對每一蛋白質的特定濃度時，蛋白質就會從疏水界面上解吸，繼續順著柱向下，從而從柱中洗脫。 圖14. 當有機改性劑的濃度達到特定值時，蛋白質從疏水界面洗脫。乙腈。在多肽的反相色譜分離時最
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（十七）
選擇分離表面。硅膠表面改性所用的化學過程允許多種有機基團附著在硅膠表面。最常見的改性是鍵合一條十八碳線性脂肪鏈，形成“C18”柱或ODS柱（圖10A）。如圖所示，有機氯硅烷與大多數硅烷醇基反應，但仍有部分不反應，這會在硅膠表面形成一層較厚的碳氫化合物層。蛋白質和多肽可以吸附到該碳氫化合物層。C18柱