PCR污染的處理（一）
前言 一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶鏈式反應具有的特色之一。這也是分子生物醫學令人震撼的一例。 何謂PCR 簡單的說，PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內 (In Vitro) 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制.目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。 PCR的要素基本的PCR須具備１.要被復制的DNA模板 (Template) ２.界定復制范圍兩端的引物(Primers). ３.DNA聚合酶 ......閱讀全文
PCR污染的處理（一）
前言?一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill?Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase?chain?reaction)--聚合酶鏈式反應具有的特色之一
PCR實驗中的污染預防及處理（一）
????? 一．污染的預防?????? 進行PCR 操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR 污染或杜絕污染的出現。?????? （一）劃分操作區：目前，普通PCR 尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行
PCR污染的處理（三）
（二）反應液污染?可采用下列方法之一處理：1.?DNase?I法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U?DNase?I，室溫反應30?min后加熱滅活，然后加入模板和Taq聚合酶進行正常PCR擴增。該方法的優點是不需要知道污染DNA的序列；2.?內切酶法：選擇識別4個堿基的內切酶（如M
PCR污染的處理（二）
PCR污染及解決對策?PCR檢測微量感染因子時，一定要注意產物殘留污染的問題。?一．?污染的預防進行PCR操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。（一）劃分操作區：目前，普通PCR尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，
PCR簡介及污染的處理
PCR技術簡介? 前言?一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶鏈式
PCR實驗中的污染預防及處理
? 一．污染的預防 ?????? 進行PCR 操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR 污染或杜絕污染的出現。 ?????? （一）劃分操作區：目前，普通PCR 尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行，P
PCR儀反應液污染處理方法
PCR儀是一種利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內InVitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。因而，在PCR儀使用時對于環境要求很高，為了避免實驗未完成前可能出現的任何污染反應液的情況，應該了解關于反應液受到污染時，反應液處理方法： l ?紫外照射法：未加模板
PCR儀反應液污染處理方法
PCR儀是一種利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內InVitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。因而，在PCR儀使用時對于環境要求很高，為了避免實驗未完成前可能出現的任何污染反應液的情況，應該了解關于反應液受到污染時，反應液處理方法： l ?紫外照射法：未加模板
PCR實驗室的污染應急處理方法
1、若核酸樣本溢出：立即用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒10%的次氯酸消毒劑，約30分鐘后，清除污染物品，再用次氯酸消毒劑擦拭，并用75%酒精噴灑，移動紫外車定點照射1小時。2、其他不明情況污染：1、暫停所有實驗操作；2、清理實驗室內所有物品，尋找污染來源；3、加大實驗室的通風；4、對實驗室內所有表
PCR實驗中的污染預防及處理（二）
?????? （二）環境污染：在排除試劑污染的可能性外，更換試劑后，若不久又發現試劑被污染了，如果預防措施比較嚴密，則考慮可能為環境污染。?????? 環境污染中常見的污染源主要有：?????? 1. 模板提取時真空抽干裝置；?????? 2. 凝膠電泳加樣器；?????? 3. 電泳裝置；????
PCR實驗中的污染預防及處理（三）
?????? 1. 原理：在PCR 產物或引物中用dU 代替dT。這種dU 化的PCR 產物與UNG 一起孵育，因UDG 可裂解尿嘧啶堿基和糖磷酸骨架間的N-糖基鍵，可除去dU 而阻止TaqDNA 聚合酶的延伸，從而失去被再擴增的能力。UNG 對不含dU 的模板無任何影響。UNG 可從單或雙
PCR實驗室污染了怎么處理
A. 實驗室進行通風處理，至少2 周的時間；通風可加速擴增產物的消散的速度B. 使用清水對實驗臺面、實驗室進行清洗；DNA不溶于酒精，使用清水多次擦拭后可消除附在實驗臺面等的核酸DNA；C. 使用紫外燈進行房間的照射；紫外線及產生的臭氧都有破壞DNA結構的作用D. 之前使用的滅菌鍋使用清水清洗多次，
PCR簡介及污染的處理－高速離心機
何謂PCR,簡單的說，PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內 In Vitro 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制.目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。?PCR的要素基本的PCR須具備１.要被復制的DNA模板 Template ２.界定復制
核酸檢測中涉及PCR污染的預防和處理原則
一、適用范圍： 本原則適用于涉及PCR方法進行食品安全檢測的實驗室 本原則適用于PCR實驗室污染的預防和處理。 二、污染來源： （1）樣品間的交叉污染：樣品污染主要是由于樣品在運輸、儲存、放置過程中處置不當造成的污染。樣品核酸模板在提取過程中，由于操作不當也會導致樣品間的污染。 （2）試劑
核酸檢測中涉及PCR污染的預防和處理原則
一、適用范圍：本原則適用于涉及PCR方法進行食品安全檢測的實驗室本原則適用于PCR實驗室污染的預防和處理。二、污染來源：（1）樣品間的交叉污染：樣品污染主要是由于樣品在運輸、儲存、放置過程中處置不當造成的污染。樣品核酸模板在提取過程中，由于操作不當也會導致樣品間的污染。（2）試劑的污染：由于操作不當
PCR污染的監測
一個正規的實驗室，要時刻注意監測實驗室的污染情況。了解實驗室有無污染，污染原因，污染程度，以便采取有效措施，防止和消除污染。一般通過陰陽性對照檢測污染情況。1、陰性對照：? ? 不將模板DNA或RNA加入到PCR試劑中，進行PCR擴增，對試劑是否污染進行監測。陰性水樣參與核酸提取和擴增監測整個試驗
PCR污染及防止污染的方法
污染原因 （一）標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染。 （二）PCR試劑的污染:主
PCR的污染與對策
?一、污染原因 ?（一）標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于 密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提 取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠 或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染. （二）P
PCR污染的防止方法
(一)合理分隔實驗室:將樣品的處理、配制PCR反應液、PCR循環擴增及PCR產物的鑒定等步驟分區或分室進行，特別注意樣本處理及PCR產物的鑒定應與其它步驟嚴格分開。最好能劃分①標本處理區;②PCR反應液制備區;③PCR循環擴增區;④PCR產物鑒定區。其實驗用品及吸樣槍應專用，實驗前應將實驗室用紫外線
PCR的污染有哪些？
（1）PCR 反應前污染主要是樣品 DNA 的交叉污染。提取 DNA 使用的儀器上殘留的雜質 DNA 或反應管中殘留的 PCR 產物、PCR 操作者皮膚或頭發等均可引起樣品污染。其中 PCR 產物的污染，也稱殘留污染（carryover），是引起樣品交叉污染的主要因素。明膠、Taq DNA 聚合酶等
PCR污染的監測方法
1.陽性對照:在建立PCR反應實驗室及一般的檢驗單位都應設有PCR陽性對照，它是PCR反應是否成功、產物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標志。陽性對照要選擇擴增度中等、重復性好，經各種鑒定是該產物的標本，如以重組質粒為陽性對照，其含量宜低不宜高(100個拷貝以下)，但陽性對照尤其是重組
PCR污染的主要污染源介紹
?(一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染。?(二)PCR試劑的污染:主要是由于
PCR技術（四）：PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污 染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生.一、污染原因 (一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于 密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提 取過程中，由
PCR產物污染誘因
PCR反應的zui大特點是不僅具有較大擴增能力而且還有著極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。污染原因（1）標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過程中，
PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生. 一、污染原因 1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣
PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生.污染原因 (一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污
如何預防PCR污染？
? 進行 PCR 反應時，遵照下列規則有助于防止 PCR 的污染。（1）PCR 的前處理和后處理在不同的房間或不同的隔離工作臺上進行。即整個 PCR 操作要在不同的隔離區（標本處理區，PCR 擴增區，產物分析區）進行，特別是陽性對照需在另一個隔離環境中貯存、加入。（2）試劑要分裝，每次取完試劑后蓋緊
PCR實驗污染與對策
PCR反應的zui大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。一、污染原因1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍
PCR實驗室污染
在眾多的生物實驗室中，分子生物學檢測方法如PCR因其檢測靈敏度高、準確度好、操作方便、快速等優勢已經被廣泛應用。不過正是由于它的高靈敏性，實驗室中極微量的污染源都有可能導致檢測結果的假陽性，所以對環境中污染源的防控也極為重要。一旦出現實驗室環境污染，比如樣本之間交叉污染、試劑污染、儀器污染、陽性對照
PCR污染及解決對策
?聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法，在微生物感染的診斷中具有重要的價值。在PCR擴增過程中，擴增的DNA產量是呈指數上升的，經過n個循環的擴增，一個DNA分子的產量便達到2n個拷貝。PCR產物一般為1013拷貝/