檢測肝癌細胞基因表達的實驗方法！
檢測肝癌細胞基因表達的實驗方法！ 材料與方法 ⒈材料 人肝癌細胞系HepG2由中國醫科大學科學實驗中心保存。DMEM培養基和胎牛血清購自BioInd公司。細胞轉染試劑Lipofectamine 3000和Trizol購自Invitrogen公司。BDNF AS質粒、BDNF AS與BDNF基因完全互補序列缺失突變質粒以及空載體質粒購自上海和元生物公司。無內毒素質粒中提試劑盒購自天根生化科技公司。Goscript TM Reverse Transcription System反轉錄試劑盒和GoTaq ? qPCR Master Mix試劑盒購自Promega公司。BDNF AS和BDNF引物購自Origene公司。BDNF兔抗人一抗和GAPDH引物購自生工生物工程(上海)股份有限公司。β-actin小鼠抗人一抗和羊抗兔IgG、羊抗小鼠IgG購自北京中杉金橋生物技術公司。BCA蛋白質含量檢測試劑盒購自南京......閱讀全文
檢測肝癌細胞基因表達的實驗方法
材料與方法⒈材料人肝癌細胞系HepG2由中國醫科大學科學實驗中心保存。DMEM培養基和胎牛血清購自BioInd公司。細胞轉染試劑Lipofectamine 3000和Trizol購自Invitrogen公司。BDNF AS質粒、BDNF AS與BDNF基因完全互補序列缺失突變質粒以及空載體質
檢測肝癌細胞基因表達的實驗方法！
檢測肝癌細胞基因表達的實驗方法！ 材料與方法 ⒈材料 人肝癌細胞系HepG2由中國醫科大學科學實驗中心保存。DMEM培養基和胎牛血清購自BioInd公司。細胞轉染試劑Lipofectamine 3000和Trizol購自Invitrogen公司。BDNF AS質粒、BDN
Science：新型單細胞基因表達檢測技術
發表在最新一期《科學》(Science)雜志上的一篇研究論文，證實了一種新型的大規模平行測序技術可借助于新一代測序(NGS)在單細胞水平上檢測基因表達。 論文作者、來自Cellular Research, Inc公司的Christina Fan博士、Glenn Fu博士以及Stephen Fo
蛻皮激素調控誘導細胞基因表達實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 帶有熒光素酶報道基因并受蛻皮激素誘導表達的質粒 帶有感興趣的基因并受蛻皮激素誘導表達的質粒 pVgRXR 培養的哺乳動物細胞
蛻皮激素調控誘導細胞基因表達實驗
下面的方案是從蛻皮激素誘導的哺乳動物表達系統（Invitrogen 公司）附帶的方案修改而來。Stratagene 公司也出售相似的系統。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。實驗材料帶有熒光素酶報道基因并受蛻皮激素誘導表達的質粒帶有感興趣的基因并
蛻皮激素調控誘導細胞基因表達實驗
實驗材料 帶有熒光素酶報道基因并受蛻皮激素誘導表達的質粒帶有感興趣的基因并受蛻皮激素誘導表達的質粒pVgRXR培養的哺乳動物細胞試劑、試劑盒 新霉素松甾酮 AZeocin培養液實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液稀釋到適當濃度。新霉素松甾酮 A蛻皮激素的另一種類似物是 muristerone A(Sig
哪些實驗方法可檢測細胞中某種蛋白表達量
蛋白質分子中關鍵活性部位氨基酸殘基的改變，會影響其生理功能，甚至造成分子病（molecular disease）。例如鐮狀細胞貧血，就是由于血紅蛋白分子中兩個β亞基第6位正常的谷氨酸變異成了纈氨酸，從酸性氨基酸換成了中性支鏈氨基酸，降低了血紅蛋白在紅細胞中的溶解度，使它在紅細胞中隨血流至氧分壓低的外
表達蛋白檢測實驗
實驗方法原理 當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是否從感染細胞中分泌。下面的步驟是介紹檢測非分泌性（細胞內）蛋白的，如果重組蛋白是分泌到培養基中的，可按注解中的步驟操作。實驗材料 生長至匯片的單層 BS-C-1 細胞重組痘苗病毒儲液試劑、試劑盒
表達蛋白檢測實驗
免疫印跡法 免疫沉淀法 點印跡法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是
基因表達的系列分析實驗
SAGE(Velculescuetal.1995) 是基于 PCR 技術的一種高靈敏度研究基因表達的方法，可得到 mRNA 文庫的定性及定量信息。自 1995 年此技術產生以來，發表了大量的相關文章，表明 SAGE 可同時檢測大量基因的表達水平的變化。實驗材料玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒溶液與緩沖液引
基因表達的系列分析實驗
實驗材料?玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒?溶液與緩沖液引物儀器、耗材?試劑盒MPC-EPCR儀Gene PulserII 型系統實驗步驟 一、一般原則若用于 SAGE 的 RNA 有足夠的量，最好用 2.5~5 ug polyA+RNA, 可按實驗方案 A 進行。這里我們還提供了實驗方案 B，它在多
基因表達的系列分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 玻璃及塑料器皿 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 引物
細胞的分化與基因表達
細胞分化是個體發育過程中細胞之間產生穩定差異的過程。所以，細胞分化是指同源細胞通過分裂，發生形態、結構與功能特征穩定差異的過程。細胞分化的實質是基因選擇性表達的結果，在個體發育過程中基因按照一定程序相繼激活的現象，稱為基因的差次表達（differential expression）或順序表達（Seq
表達基因的克隆策略與分離表達基因序列的技術方法
人類基因組計劃的主要任務之一就是要從大片段基因組區域或整條染色體DNA 上鑒定出基因表達序列(gene expressed sequences)或轉錄單位(transcription units)。在人類基因組30億個堿基對中，發生轉錄的表達序列(即基因)僅占總序列的3～5％。基因組中絕大部
bcl2凋亡基因表達的檢測原理和方法
（一）原理：細胞凋亡是一個受基因調控的主動過程，bcl-2是抑制細胞凋亡的原癌基因，正常細胞的激活和發育過程中都有表達，但在發育成熟的細胞中，其表達降低，在低分化或癌變的細胞中，bcl-2高表達與腫瘤的發生、發展相關，bcl-2過量表達常導致對化療藥物的耐藥性而阻止細胞凋亡，影響治療效果，一旦細胞發
除了基因檢測，還有哪些方法可以檢測腫瘤抑制基因的表達或功能狀態？
除了基因檢測，以下方法也可用于檢測腫瘤抑制基因的表達或功能狀態：免疫熒光法（IF）：類似于免疫組織化學，但是在熒光顯微鏡下觀察熒光標記的抗體與目標蛋白的結合情況，能更清晰地顯示蛋白的定位和表達。酶聯免疫吸附測定（ELISA）：定量檢測體液（如血液、腦脊液等）中腫瘤抑制基因編碼的蛋白含量。轉錄組分析：
多藥抗藥基因的表達實驗
實驗方法原理?大多MDR細胞膜上出現MDR-1基因及其基因產物P-糖蛋白過度表達。實驗材料?RNA試劑、試劑盒?PBS氯仿異丙醇萘酸異硫氰酸肽十二烷基肌酸鈉構櫞酸鈉乙酸鈉二疏基乙醇乙醇Taq酶儀器、耗材?離心機紫外分光光度計瓊脂糖凝膠電泳PCR儀實驗步驟 一、細胞總RNA提取1.? 收集約5×107
多藥抗藥基因的表達實驗
PCR擴增法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大多MDR細胞膜上出現MDR-1基因及其基因產物P-糖蛋白過度表達。 多藥抗藥基因的表達實驗是通過反轉錄和PCR的方法來檢測這些特
多藥抗藥基因的表達實驗
?多藥抗藥基因的表達實驗是通過反轉錄和PCR的方法來檢測特定基因的過度表達。一、細胞總RNA提取1. ?收集約5×107個細胞，冷PBS洗滌。2. ?加入400 ul RNA提取液（含6 mol/l 的異硫氰酸肽，0.5%十二烷基肌酸鈉，0.025 mol/l 構櫞酸鈉pH7.0，0.25 mol/
單個腦細胞的基因表達譜
科研人員報告了一種根據基因表達譜為人類大腦的單個細胞分類的方法。人類大腦含有許多種類的細胞，它們的基因表達模式有差別。此前為這些細胞類型分類的方法一直限于使用幾個基因或蛋白質標記物以及分析整個細胞群。Stephen Quake及其同事使用單細胞RNA測序分析了來自人類大腦組織的466個個體細胞的
痘苗病毒系統基因表達實驗
重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染 兩種重組痘苗病毒共感染細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質
基因表達系列分析實驗（SAGE）
實驗材料感興趣的細胞或組織試劑、試劑盒糖原EDTA緩沖液SDSBSATween 20連接子T4 DNA 連接酶BsmFIPC8SeeDNA乙酸鈉乙醇DMSOPCR引物乙酸銨DNA ladder聚丙烯酰胺 TBE凝膠DNA參照pZErO-1 質粒TE緩沖SOC培養液Tris · Cl儀器、耗材微量離心
表達譜基因芯片實驗
表達譜基因芯片可應用于：（1）疾病診斷；（2）新藥開發；（3）環境保護。實驗方法原理按照預定位置固定在固相載體上很小面積內的千萬個核酸分子所組成的微點陣陣列。在一定條件下，載體上的核酸分子可以與來自樣品的序列互補的核酸片段雜交。如果把樣品中的核酸片段進行標記，在專用的芯片閱讀儀上就可以檢測到雜交信號
痘苗病毒系統基因表達實驗
實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質粒載體開始，然后用重組質粒通過脂質體介導轉染已經被vTF7-3（可以持續表達T7 RNA聚合酶的痘苗病毒）感染的細胞。收獲后，基因產物在細胞內的表達可以用脈沖標記的方法或用「重組痘苗病毒及其產物的鑒定實驗」中敘述的方法分
癌基因編碼蛋白表達的檢測
實驗步驟展開
PCR－Array－簡單實用的檢測基因表達的高通量方法
?簡介：什么是PCR芯片？實時定量PCR是檢測基因表達zui靈敏，zui可靠的方法。通過在試驗過程中，實時監測熒光染料的信號變化，反映樣品中的基因拷貝數。實時定量PCR線性范圍廣（能達到5個數量級），因此可以檢測同一樣品中表達量極低的基因和表達量很高的基因。但是，由于實時定量PCR需要制備標準曲線和
PCR－Array－簡單實用的檢測基因表達的高通量方法
簡介：什么是PCR芯片？實時定量PCR是檢測基因表達最靈敏，最可靠的方法。通過在試驗過程中，實時監測熒光染料的信號變化，反映樣品中的基因拷貝數。實時定量PCR線性范圍廣（能達到5個數量級），因此可以檢測同一樣品中表達量極低的基因和表達量很高的基因。但是，由于實時定量PCR需要制備標準曲線和同時分析內
最準確的基因表達檢測方法——RNA測序遭遇“信任”危機？
當前，RNA測序成為了一種常用工具。 利用RNA測序，研究人員能夠定量地檢測各種生物體的基因表達，從而更好地了解細胞中正在發生的事情以及特定基因的功能。 RNA測序的準確性 早在2014年，《Nature Biotechnology》上發表了三篇文章。它們屬于RNA測序質量控制（SEQC）
環境對果蠅基因表達的效應實驗
實驗方法原理?實驗材料?彎翅果蠅試劑、試劑盒?果蠅培養基 乙醚儀器、耗材?恒溫培養箱 立體解剖鏡 培養瓶及麻醉瓶實驗步驟 1.從保種的彎翅果蠅(基因型為cu/cu)培養瓶中建立3種培養體系,雌蠅不要求是處女蠅。在培養瓶上貼上20℃、25℃、28℃標簽,初始培養溫度均為25℃,一直培養到化蛹(這樣可以
環境對果蠅基因表達的效應實驗
表型的許多方面都受到生物體遺傳組成和其生存環境的影響,因此可以說表型是基因型與環境相互作用的產物。果蠅卷曲翅基因的表達常受到環境的修飾,通過觀察該基因在不同環境下的表達情況,即可顯示環境對基因表達的影響。卷曲翅基因(cu)對溫度敏感,純合體(cu/cu)果蠅在高溫下培養時翅膀頂端彎曲(圖7-1),但