PCR基因擴增1
一、實驗原理 聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一種體外核酸擴增系統,其原理類似DNA分子的天然復制過程,是將在待擴增的DNA片段和與其兩側互補的兩個寡聚核苷酸引物,經變性、退火和延伸若干個循環后,DNA擴增 2n 倍。該技術已成為分子生物學中一種有助于DNA克隆及基因分析的必需工具。 PCR的工作程序實際上是一個在模板DNA、一對已知序列的寡核苷酸引物和四種脫氧核苷酸等存在的情況下,DNA聚合酶依賴的酶促合成反應。擴增的特異性取決于引物與模板DNA的結合。整個擴增過程分三步:①變性,加熱使模板DNA雙鏈間的氫鍵斷裂而形成兩條單鏈;②退火,突然降低溫度后模板DNA引物按堿基配對原則互補結合,也存在兩條模板鏈之間的結合,但由于引物的高濃度、結構簡單等特點,主要的結合發生在引物與模板之間;③延伸,在DNA聚合酶及鎂離子等的存在條件下,從引物的 3 ′端開始,結......閱讀全文
PCR基因擴增1
一、實驗原理 聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一種體外核酸擴增系統,其原理類似DNA分子的天然復制過程,是將在待擴增的DNA片段和與其兩側互補的兩個寡聚核苷酸引物,經變性、退火和延伸若干個循環后,DNA擴增 2n 倍。該技術已成為分子生物學中
PCR基因擴增
實驗概要PCR擴增目標DNA片段。實驗原理多聚酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR)基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性、退火、延伸三個基本反應步驟構成。? 1. 模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃
PCR基因擴增2
(4)引物的熔點溫度(Tm值)要適當。Tm值與引物的堿基組成和長度有關;PCR引物的GC/AT應與要擴增的模板DNA相當或略高些。一般熔點溫度以大于55℃為宜。(5)引物的3,末端必須與模板嚴格互補,而5,末端的要求可靈活些。(6)目前在引物選擇中已廣泛應用計算機軟件,從EMBL或Genebank中
PCR基因擴增實驗
[實驗目的]通過本實驗學習PCR反應的基本原理與實驗技術。[實驗原理]多聚酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)的原理類似于DNA的天然復制過程。在待擴增的DNA片段兩側和與其兩側互補的兩個寡核苷酸引物,經變性、退火和延伸若干個循環后,DNA擴增2n倍。1.變性:加
PCR基因擴增原理
基因擴增技術(PCR)聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction簡稱PCR)又稱無細胞分子克隆系統或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增法,是基因擴增技術的一次重大革新。可將極微量的靶DNA特異地擴增上百萬倍,從而大大提高對DNA分子的分析和檢測能力,能檢測單分子DNA或對每1
基因擴增梯度PCR儀
? ? 聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,簡稱PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。 它具有特異、敏感、產率高、 快速、 簡便、重復性好、易自動化等突出優點;能在一個試管內將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀
PCR基因擴增儀簡介
??分類:? ? PCR儀的種類總體來說可以分為兩大類:PCR擴增儀和實時熒光定量PCR儀。用途:? ? PCR儀是醫學,農業,食品,醫藥,檢驗檢疫等領域的實驗室常規儀器設備。PCR儀原理:? ? 為雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在dna聚合酶的作用下,以單鏈為模版,根據堿基互補配對
淺談PCR基因擴增儀
?聚合酶鏈式反應,簡稱PCR。聚合酶鏈式反應,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期,循環進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。生命科學儀器
PCR擴增制備目的基因
1.目的學會PCR操作的基本技術。2.原理是將待擴增的DNA模板加熱變性,與其兩側互補的寡聚核苷酸引物復性,然后經過耐熱的DNA聚合酶延伸。再進入下一輪變性—復性—延伸的循環,n次循環后DNA可被擴增(1+X)n倍。其中
PCR基因擴增儀簡介
聚合酶鏈式反應簡稱PCR(英文全稱:Polymerase Chain Reaction)聚合酶鏈式反應 聚合酶鏈式反應,簡稱PCR。聚合酶鏈式反應,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應
目的基因的PCR擴增
實驗概要進行目的基因的PCR擴增實驗原理PCR(聚合酶鏈式反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法。它包括3個基本步驟:⑴變性:目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈;⑵退火:兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)下與模板上的目的序列通過氫鍵配對;⑶延伸:在Taq ? DNA聚合酶合成DNA的最適
基因擴增PCR的擴增與克隆方法介紹
①引物的序列應位于基因組DNA的高度保守區,且與非擴增區無同源序列。這樣可以減少引物與基因組的非特異性結合,提高反應的特異性 ②引物長度:15-40bp為宜。引物過短或過長均可使反應的特異性下降。 ③引物的堿基盡可能隨機發布,避免出現數個嘌呤或嘧啶的連續排列,G+C堿基的含量在40%-75%
應用PCR技術擴增Hbβ基因
復習細胞內DNA復制條件和過程。 一、目的 1:學習PCR技術的基本原理 2:掌握從全血中制備DNA的方法‘ 3:掌握應用PCR擴增Hbβ基因的基本操作 4:熟悉Hb基因結構 二、原理 1:PCR擴增的原理 聚合酶鏈反應—PCR是一種體外基因擴增技術,是在引物和四種脫氧核苷三磷酸存在下,利用DNA
PCR基因擴增儀的用途
西安天隆科技有限公司DTC-3G型PCR基因擴增儀適用于分子生物學、醫學、食品工業、司法科學、生物技術、環境科學、微生物學、臨床診斷、流行病學、遺傳學、基因芯片、基因檢測、基因克隆、基因表達等領域以聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction , PCR)為特征的、以檢測D
基因擴增儀PCR產品特點
優化的溫控模式,升降溫速度快,溫控精確,熱效率高,儀器壽命更長。一機多用:兼容0.2ml,0.5ml管,96標準微孔板。無油熱蓋調節方便,徹底防止蒸發。儀器操作簡便,人機界面友好。體積小,重量輕,節省實驗室空間。
PCR基因擴增儀實驗原理
技術應用實現快速高效均衡擴增檢測由光開關陣列、自聚焦透鏡和尾纖準直器及變增益微光O/E裝置組成的MEMS有機整體,在以16位單片機為核心的電控裝置管理下,能在毫秒級時間內完成多個標本快速均衡掃描檢測,避免了機械掃描方式或CCD掃描方式引起的時間滯后或漸暈誤差。實現標準樣本的PCR熱循環擴增及高通量實
基因擴增PCR的擴增結果假陽性的原因
出現的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。?引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行PCR擴增時,擴增出的PCR產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現假陽性。需重新設計引物。?靶序列或擴增產物的交叉污染:這種污染有兩種原因:一是整個
PCR擴增模板和抗體可變區基因的擴增
PCR?擴增模板和抗體可變區基因的擴增???? 如果構建Fab抗體庫,必需利用RT-PCR獲取抗體基因;構建ScFv抗體庫,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在構建小鼠ScFv抗體庫過程中,主要采用DNA作為擴增模板。?【材料和試劑】(1)PCR儀(2)Taq酶(3)氯仿(4)瓊脂糖?【
PCR基因擴增儀的工作原理
基因擴增儀性能,能滿足不同工作環境的多種需求。可用作以聚合酶鏈式反應為特征的、以檢測DNA/RNA為目的的各種病原體檢測及基因分析。基因擴增儀廣泛應用于分子生物學、醫學、食品工業、司法科學、生物技術、環境科學、微生物學、臨床診斷、流行病學、遺傳學、基因芯片、基因檢測、基因克隆、基因表達等領域。
基因擴增儀(PCR儀)技術原理
基因擴增儀(PCR儀)技術原理:標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通
PCR基因擴增儀的維護保養
? PCR基因擴增儀適用于分子生物學、醫學、食品工業、司法科學、生物技術、環境科學、微生物學、臨床診斷、流行病學、遺傳學、基因芯片、基因檢測、基因克隆、基因表達等領域以聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction , PCR)為特征的、以檢測DNA/RNA為目的的各種病原
PCR基因擴增儀的分類介紹
PCR基因擴增儀的類型:PCR基因擴增儀的設計均按照DNA變性、復性和延伸三個環節以及溫度均恒、傳導快和升降溫迅速等原則,結合傳感技術、微電子技術和電子計算機等技術發展而成的自動化和智能化的儀器設備,下面僅從保溫和變溫的角度介紹幾類PCR儀的原理。1.?水浴式PCR基因擴增儀 水浴式PCR基因擴增儀
PCR基因擴增儀的分類介紹
PCR基因擴增儀的類型:PCR基因擴增儀的設計均按照DNA變性、復性和延伸三個環節以及溫度均恒、傳導快和升降溫迅速等原則,結合傳感技術、微電子技術和電子計算機等技術發展而成的自動化和智能化的儀器設備,下面僅從保溫和變溫的角度介紹幾類PCR儀的原理。1. 水浴式PCR基因擴增儀 水浴式PCR基因擴增儀
PCR基因擴增儀技術參數
樣品規格0.2ml×96孔、12×8聯排管、96微孔板、0.5ml×77孔控溫模式基座BLOCK模式、管內TUBE模擬計算模式反應體積10-100ul溫控范圍0--99.9℃BLOCK升降溫速率(Max.)≥4℃/sec樣品升降溫速率(Max.)≥3.5℃/sec溫度顯示精度±0.1℃溫度準確度±0
PCR基因擴增儀的工作原理
基因擴增儀性能,能滿足不同工作環境的多種需求。可用作以聚合酶鏈式反應為特征的、以檢測DNA/RNA為目的的各種病原體檢測及基因分析。基因擴增儀廣泛應用于分子生物學、醫學、食品工業、司法科學、生物技術、環境科學、微生物學、臨床診斷、流行病學、遺傳學、基因芯片、基因檢測、基因克隆、基因表達等領域。
PCR基因擴增原理、材料和方法
一、原理多聚酶鏈式反應(polymerase chain reaction , PCR)類似于DNA 的天然復制過程:經過變性、退火、延伸多次循環(圖1 ) , DNA 擴增倍數可達2 n 倍。即Y = ( 1 + X ) n式中,Y 為DNA 擴增倍數;X 為擴增效率;n 為循環次數二、材料(1)
PCR儀|基因擴增儀工作原理
什么是PCR技術?PCR(Polymerase Chain Reaction)技術,中文譯為聚合酶鏈式反應,是一種在體外(試管、切片…)擴增核酸的技術。PCR的基本反應包括以DNA為模板的反應和以mRNA為模板的反應。PCR技術是模擬體內天然DNA(脫氧核糖核酸)的復制過程。以擴增DNA為例,其基本
RTPCR擴增目的基因cDNA
實驗概要學習從細胞或組織的RNA中用逆轉錄PCR擴增目的基因的技術及操作。實驗原理普通PCR方法可以以DNA為模板擴增基因,但真核生物的基因組中通常分為可轉為mRNA的外顯子和不轉錄的成mRNA的內含子,所以從染色體DNA用PCR方法擴增出的基因是內含子和外顯子相間排列的DNA分子,不能用于基因工程
基因擴增儀(PCR儀)技術原理
?基因擴增儀(PCR儀)技術原理:標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,
PCR基因擴增儀的產品特點
優化的溫控模式,升降溫速度快,溫控精確,熱效率高,儀器壽命更長。 一機多用:兼容0.2ml,0.5ml管,96標準微孔板。 無油熱蓋調節方便,徹底防止蒸發。 儀器操作簡便,人機界面友好。 體積小,重量輕,節省實驗室空間。