RTPCR原理與實驗操作步驟3
八、PCR產物電泳先將1-10μl左右PCR產物，加已點在紙上的溴酸蘭，反復吸打混勻后進行電泳，一般電流為10mA，電源100V，電泳30分鐘，紫外燈下觀察，滿意的結果掃描打印。九、幾個注意點：1、逆轉錄的關鍵步驟是立即冰水浴？2、Rt時，先打開PCR預熱30分鐘。3、RNA抽提前，打開離心機預冷。TRIzol法抽提總RNA細胞1×107組織100mg↓加1mlTRIzol細胞用1ml加樣器吹至液體澄清且無細胞團塊↓勻漿（要徹底，后轉至EP管）（組織勻漿量>100mg時分裝1ml/每EP管）↓顛倒混勻10下，室溫5分鐘↓加氯仿1/5體積（0.2ml）（必須按總體積的1/5）↓顛倒混勻10下，室溫5分鐘↓4℃，離心12000g，15分鐘↓轉上層水相（約400μl）于另一1.5mlEP管中↓加等體積異丙醇（約400μl），混勻室溫10分鐘↓4℃，離心12000g，10分鐘↓棄上清↓加冰預冷的75%乙醇（用DEPC水配）1ml↓......閱讀全文
RTPCR原理與實驗操作步驟3
八、PCR產物電泳先將1-10μl左右PCR產物，加已點在紙上的溴酸蘭，反復吸打混勻后進行電泳，一般電流為10mA，電源100V，電泳30分鐘，紫外燈下觀察，滿意的結果掃描打印。九、幾個注意點：1、逆轉錄的關鍵步驟是立即冰水浴？2、Rt時，先打開PCR預熱30分鐘。3、RNA抽提前，打開離心機預冷。
RtPCR實驗準備及與操作步驟3
注：1、RNA若用于核酸轉移應溶解于樣本緩沖液中，否則DEPC溶解2、細胞組織加TRIzol勻漿后，可在-60℃放置至少一個月（甚至可一年以上）3、RNA在75%乙醇中，2-8℃至少可保存一周，-20℃至少可保存一年 兩步法RT-PCR （第一步：逆轉錄反應） 試劑 濃度 體積 終濃度
RTPCR原理與實驗操作步驟1
一、知識背景：1、基因表達：DNA RNA Protein單拷貝基因表達存在逐步放大機制，如一個蠶絲心蛋白基因 104個絲心蛋白mRNA（每個mRNA存活4d，可以合成105個絲心蛋白） 共合成109個絲心蛋白 。因此單拷貝基因的mRNA表達水平對于其功能水平的調控是非常重要的。2、PCR技術(ol
RTPCR原理與實驗操作步驟2
二、實驗器具的處理與準備1、塑料制品：（包括槍頭、EP管、勻漿管等）先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中，將塑料制品逐個浸泡其中，其中小槍頭需要吸管打入DEPC水，過夜，然后高壓，再烤干備用，實驗前將槍頭等放入吸頭臺，再高壓一次（EP管）2、玻璃制品：泡酸過夜，沖洗干凈，蒙錫紙烤干備用（DEPC水泡）
RTPCR實驗原理與步驟
【實驗原理】RT-PCR 是以RNA 為模板經逆轉錄反應（Reverse Transcription，RT）產生cDNA 第一鏈，再以cDNA 為模板進行PCR 擴增以檢測目的基因的表達情況。【實驗儀器】1. 恒溫金屬浴2. PCR 擴增儀【試劑及配制】RNA PCR Kit (AMV) Ver 3
RtPCR實驗準備及與操作步驟2
六、需購置的Rt-PCR材料：（生工. Tel. 2236106.）Taq酶（含MgCl2 Buffer） 200u 70.00dNTP: 1支oligo(dT)15: 1 OD 40.00 promegaM-MLV: 1支 250.00 promega (Buffer)RNasin: 1支 110
RtPCR實驗準備及與操作步驟1
一、實驗器具與材料：1、移液槍：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸頭：1ml、200μl、20μl3、勻漿管：5ml4、吸頭臺：放置1ml吸頭的一個，放置20μl吸頭的一個5、EP 管：1.5ml、0.2ml、100μl6、試劑瓶：2個60ml的棕色試劑瓶（廣口，帶蓋）1個125m
轉膜實驗原理與操作步驟
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物(一般是尼龍膜)上固定，是進行各種后續研究(如 RFLP 分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究)的前提。 實驗目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟 實驗原理： 1. ?轉膜的方式： 向上的毛細管
RTPCR原理與實驗技術
一、知識背景：1. 基因表達：DNA——RNA——Protein單拷貝基因表達存在逐步放大機制，如一個蠶絲心蛋白基因——104個絲心蛋白mRNA（每個mRNA存活4d，可以合成105個絲心蛋白）——共合成109個絲心蛋白 。因此單拷貝基因的mRNA表達水平對于其功能水平的調控是非常重要的。2.?PC
RTPCR實驗步驟
一、組織抽提：1.???????取組織塊50-100㎎用液氮在研缽中研磨成粉末2.???????移入玻璃勻漿器加入1ml Trizol?抽打勻漿3.???????移入1.5ml新離心管用5 ml針頭抽打4.???????冰上孵育5分鐘5.???????離心12,000g??4℃??5分鐘?取上清液移
RTPCR實驗步驟
實驗材料：水稻葉片的 RNA 。實驗原理：目前?PCR?技術只能擴增?DNA?模板，對 RNA 模板不能直接擴增。mRNA反轉錄生成的?cDNA?可作為 PCR 的模板進行擴增，這種在 mRNA 反轉錄后進行的 PCR 擴增稱為?RT-PCR?。 RT-PCR 比 Northern 雜交更靈敏，對
RTPCR技術的操作步驟
1、從RNA（或mRNA）反轉錄合成cDNA第一鏈：2、于95℃加熱5～10min，滅活反轉錄酶，使RNA—cDNA雜交體變性，然后迅速冰浴冷卻：3、PCR擴增：方法基本同PCR。cDNA第一鏈合成方法：20ul反應液中含10xPCR擴增緩沖液，2ul；四種dNTP（10 mmol/L）2ul；RN
Transwell侵襲實驗總結－（3）－操作步驟
．步驟2．1 Transwell小室制備2．1．1 無基質膠Transwell小室制備① 包被基底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀釋液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃風干。如果需要在下室面鋪FN的話，可將200ul槍頭的尖端剪掉,吸取FN均勻涂抹在小室的下面。用膠原（col
RNA提取與RTPCR(3)
2.3 RT-PCR的引物設計 RT-PCR引物設計和一般PCR引物設計可以遵循同樣的原則。細心地進行引物設計是PCR中最重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。設計理想的引物都有以下共同的特點，而設計失敗的引物則各有各的缺
RtPCR實驗準備及與操作步驟
一、實驗器具與材料：1、移液槍：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸頭：1ml、200μl、20μl3、勻漿管：5ml4、吸頭臺：放置1ml吸頭的一個，放置20μl吸頭的一個5、EP 管：1.5ml、0.2ml、100μl6、試劑瓶：2個60ml的棕色試劑瓶（廣口，帶蓋）1個125m
RTPCR步驟
總RNA提取1. 取200mg組織，放到1.5ml EP管中，加入1ml Trizol剪碎。2. 震蕩30s。3. 加0.2ml氯仿，劇烈搖動30s，室溫3min。4. 12000×g，4℃ 離心，15min。5. 吸上層無色水相，移入另一EP管中（約0.5ml）。6. 加等體積異丙醇，-20℃，3
PCRDGGE實驗原理和操作步驟
【實驗目的】 1．了解PCR-DGGE技術的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技術的步驟。 【實驗原理】 變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度（Tm
PCRSSCP實驗原理和操作步驟
【實驗目的】1．了解PCR-SSCP技術的原理。2．了解并熟悉PCR-SSCP技術的步驟。 【實驗原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等創建的篩查突變的新技術。它是一種簡單、快速、經濟的點突變篩查手段。PCR-SSCP技術的基本原理是PCR擴增后的DNA片段經變性成單鏈DNA，
cDNA的合成實驗原理和操作步驟
一、實驗目的掌握植物cDNA合成的原理和方法二、實驗原理反轉錄酶主要用于體外cDNA的合成。目前最常用的反轉錄酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它們具有依賴于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性，可以以RNA分子
雙脫氧鏈終止法測定DNA序列實驗原理、操作步驟和儀器...3
3．單鏈模板的分離(1)沉淀M13：在上述M13培養物上清中，加入0.2倍體積的3.5mol/L醋酸銨/20%多聚乙二醇溶液，顛倒混勻數次，置冰浴30分鐘。離心15-30分鐘(11000g)可見白色噬菌體沉淀。小心除去上清液，可將試管倒置并吸去多余液體。(2)分離純化模板：向沉淀中加入TE緩沖液10
引伸計的工作原理與操作步驟
引伸計是用來測量試件線伸縮變形的儀器。它一般由三個基本部分組成，即感受變形部分；傳遞和放大部分；顯示部分。引伸計的種類很多，在拉力機上常有的有大變形引伸計（測試橡膠類產品）和小變形引伸計（金屬引伸計）這兩種。一、產品簡介??? 引伸計是用來測量試件線伸縮變形的儀器。它一般由三個基本部分組成，即感受變
RTPCR需要多大的細胞量及操作步驟
理論上50個cell就可以，但是實際操作中我只看到過牛人從100個cell里面提出來過（用LCM逮的），自己提弄過1000cell的。沒有用kit。不同點是用BCP代替氯仿，并且加糖原助沉淀，具體的好處不是很清楚，但是BCP用量小，而且在cell少的情況下，使用糖原可以盡量的降低誤操作。由于細胞的大
Western－免疫印跡實驗原理和操作步驟
[實驗原理]Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠
重組DNA的轉化實驗原理和操作步驟
實驗目的制備出感受態細胞，把體外重組的DNA引入受體細胞，使受體菌具有新遺傳性，并從中選擇出轉化子。實驗原理感受態就是細菌吸收轉化因子的生理狀態，只有發展為感受態的細胞才能穩定攝取外來的DNA分子。pUC18的LacZ基因區域當有DNA片段插入時，LacZ基因失活，轉化進入大腸桿菌并在含有IPTG和
DNA的酶切實驗原理和操作步驟
一、實驗目的 本實驗學習、了解限制性內切酶的特性，學習根據具體目的設計適當的酶切體系并實施之。 二、實驗原理 利用限制性內切酶切割DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一。成功的酶切為后續工作提供了有效的實驗材料。限制性內切酶是細菌體內限制修
霉菌的形態觀察實驗原理和操作步驟
一、實驗目的1、學習自制水浸片觀察微生物的形態；2、學習并掌握觀察霉菌形態的基本方法，了解四類常見霉菌的基本形態特征。二、基本原理霉菌可產生復什分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態特征是識別不同種類霉
基因的PCR擴增實驗原理、實驗材料和操作步驟
實驗原理單鏈DNA在互補寡聚核苷酸片段的引導下，可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向復制出互補DNA。這時單鏈DNA稱為模板DNA，寡聚核苷酸片段稱為引物（Primer），合成的互補DNA稱為產物DNA。雙鏈DNA分子經高溫變性后成為兩條單鏈DNA，它們都可作為單鏈模板DNA，在相應的引物引導下，用
織物透氣性測試原理與操作步驟
材料的透氣性能測試有透氣性測試和透氣度測試兩種：1.透氣性測試??? 通常所說的透氣性測試是指對于具有一定氣體阻隔性的材料進行特定氣體滲透性的檢測。這類材料大多是高分子聚合物或是由高聚物制成的多層復合材料,廣泛應用于食品、化工、電子、軍工等領域的產品包裝。其中阻隔性極優(氣體滲透性極低)的材料可以用
RTPCR實驗操作的注意事項
在做Northern等雜交實驗、構建cDNA文庫、獲取能夠編碼真核生物蛋白的基因、獲得RNA病毒基因時，會用到RNA提取和RT-PCR技術。真核生物的基因組是DNA，為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢？因為真核生物的基因含有大量的非編碼區，稱為內元（intron），真正編碼蛋白的區段是
實驗室粉碎磨介紹與操作步驟
??? 實驗室粉碎磨又叫做旋風式粉碎磨，其原理是采用高速氣旋原理，樣品進料口緩緩加入，被葉輪產生的高速旋氣流甩到磨室環上，被撞擊成粉未，并由風路送入樣品采集瓶，以取得所需的樣品。旋風式粉碎機能高效粉碎麥類、玉米、水稻、玉米、大豆等物品，粉碎樣品符合陳化糧檢測和小麥全麥粉面筋測定前期處理要求。???