純合克隆篩選
1．融化雜合突變ES細胞 ，ES/LIF培養液培養，每2～3天傳代，實驗開始把細胞 接種到三個100mm鋪有凝膠碟皿中，每皿接種1～2×106 細胞 。為篩選需用一個以上的ES雜合突變細胞系，因不同細胞系的轉化效率不全相同，另外對檢測細胞表型也需如此。 2．每皿細胞分別加入1.0～2.0mg/ml的G418（終濃度，pH7.4）；應用neo和hyg基因作為篩選標記效果都很好，用hyg時濃度為1.0～2.0mg/ml的hygromycin-β的ES/LIF培養液。 3．培養細胞7～10天，每天換液，仍用含有適當濃度G418的ES/LIF培養液，培養至出現很多單個克隆為止；如細胞已長滿而未出現單個克隆 時，應重復2，并加大G418濃度。 4．按前述雜合突變所述15～21步篩選法進行克隆篩選；在出現有雜交片段表示在純合突變細胞中不存在無改變的靶基因。典型情況下，應有50％為純合的，這是因為此過程是隨機的，......閱讀全文
大量細菌克隆的雜交方法篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方法由 Hanahan 和 Meselson (1980, 1983)報道，主要用來處理由質粒 cDNA 文庫轉化的細菌。將轉化菌的混合物或者一份擴增的 cDNA 文庫直接置于不含洗滌劑的硝酸纖維素膜或尼龍膜上，復制
血清學篩選克隆新抗原/新基因——血清學篩選法
通過以血清的各種反應為中心的機體免疫反應和變態反應的研究體系來篩選新抗原和新基因。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒TBST 裂解液 血清 NZY top IPTG 一抗 二抗 SM 封閉液 MgSO4 LB AP BCIP-NBT 顯色液儀器、耗材硝酸纖維素膜 濾紙 冰箱 培養箱 水浴鍋 平板 脫色搖床
中等量細胞克隆的雜交法篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方法適用于任何大小的細菌克隆，但小的克隆可以給出最清楚的結果。小克隆可以產生尖銳的雜交信號，而且在克隆從瓊脂板轉到膜的過程中不會彌散。操作中 采用能夠包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保證沒有氣泡的情況下
中等量細胞克隆的雜交法篩選實驗
實驗方法原理 這一方法適用于任何大小的細菌克隆，但小的克隆可以給出最清楚的結果。小克隆可以產生尖銳的雜交信號，而且在克隆從瓊脂板轉到膜的過程中不會彌散。操作中 采用能夠包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保證沒有氣泡的情況下，用更大的濾膜很難正好覆蓋于 150 mm 板。實驗材料
中等量細胞克隆的雜交法篩選實驗
這一方法適用于任何大小的細菌克隆，但小的克隆可以給出最清楚的結果。小克隆可以產生尖銳的雜交信號，而且在克隆從瓊脂板轉到膜的過程中不會彌散。操作中采用能夠包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保證沒有氣泡的情況下，用更大的濾膜很難正好覆蓋于 150 mm 板。本實驗來源「分子克隆實驗指南第
小量細菌克隆的雜交法篩選實驗步驟
小量細菌克隆的雜交法篩選實驗步驟，一、材料1. 培養基含有適當抗菌素的 LB 或 SOB 瓊脂板。含有氯霉素的 LB 或 SOB 瓊脂板。2. 專用設備(1) 硝酸纖維素膜（Millipore HAWP，或類似產品）或尼龍膜。濾膜不必是無去污劑污染或無菌。(2) 注射器（3cc )，針頭（18 號）
血清學篩選克隆新抗原/新基因（一）
一、E.coli/phage 裂解液預吸附血清?1. 將E.coli /phage lysate 以1:10-20 稀釋在TBST 溶液中。?2. 將4 張82mm 的nitrocellulose membranes（NC）浸入稀釋后的E.coli/ phagelysate 中，室溫下水平搖動30
轉化克隆的篩選和鑒定——酶切鑒定法
利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片斷的克隆菌落。實驗材料重組大腸桿菌試劑、試劑盒LB培養基氨芐青霉素乙醇質粒提取試劑盒限制性內切酶緩沖液甘油硫酸鎂Tris鹽酸瓊脂糖儀器、耗材試管記號筆酒精燈冰箱牙簽旋渦混合器鑷子微量移液取樣器
血清學篩選克隆新抗原/新基因（二）
19. 第一輪篩選得到陽性克隆需要進行第二輪篩選以去除假陽性并獲得陽性單克隆噬菌體。過程如第一輪篩選，只不過用直徑90mm 平板；具體過程見步驟4，這時所加入的噬菌體溶液是第一輪篩選得到的噬菌體上清（見步驟18），在用前要滴定好噬菌體的滴度，噬菌斑的數量以可區分出單個克隆，同時密度不能太稀為
我國科學家獲得全球首個純合基因編輯橡膠苗
近日，中國熱帶農業科學院橡膠研究所組培與轉基因團隊在全球率先獲得了橡膠樹CRISPR/Cas9純合基因編輯橡膠苗。相關研究成果在線發表于《經濟作物和產品》（Industrial Crops and Products）。橡膠樹基因編輯植株：上排為嵌合植株；下排為純合植株。中國熱科院供圖該團隊前期已實現
沙門氏菌多克隆酶免疫分析篩選方法
本方法由酶免疫分析方法（EIA）測得的陽性樣品的增菌肉湯和 M 肉湯必須依照常規標準方法中所指示的，在選擇性培養基上做劃線接種，并必須將典型或可疑菌落按標準方法進行生化和血清學鑒定。 對于陽性結果的確定 ①可借助比色計卡進行視覺檢查，當判斷陰性和陽性對照符合卡上所描述的標準時，陽性結
關于單克隆抗體技術的細胞篩選的介紹
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選，即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來，通常也稱為抗體檢測。抗體檢測的方法很多，通常根據所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便，便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結
單克隆抗體雜交瘤細胞篩選技術介紹
1986年，美國FDA批準了第一個單克隆抗體藥物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超過40個治療用抗體藥物被批準上市，每年實現超過600億美元的銷售額。在國際及國內形成了抗體藥物開發熱潮。巨大的市場前景和現存的技術問題及壁壘并存的現實不可避免地引發抗體藥物新一輪技術革命。而其結果又將毫無疑問地改
單克隆酶免疫色度分析篩選方法需要哪些儀器？
①微量條板架? 能放置1～8個微量條板的聚苯乙烯框架。②條板密封紙? 覆蓋微量板的粘合紙。③內嵌式包裝物? （用于固定放置試劑）。④培養箱? 能于35.0℃±0.1℃～37.0℃±0.1℃恒溫。⑤水浴箱a.能于42.0℃±0.5℃和35.0℃±1.0℃恒溫。b.能于100.0℃±0.1℃恒溫。（注意
用大片段基因組－DNA－克隆直接篩選－cDNA實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 擴增緩沖液 DNA 聚合酶 DNaseI 限制性內切核酸酶 ATP 鏈霉親和素-磁珠結合緩沖液 T4DNA 連接酶
沙門氏菌單克隆酶免疫色度分析篩選方法
單克隆酶免疫色度分析篩選方法 AOAC 方法：986.35，987.11，993.0均為單克隆酶免疫色度分析篩選方法。現以 AOAC 公定方法 AOAC993.08《SalmonelIa-Tek）》為例做一介紹。 該方法陽性的檢測結果應是客觀的，必須用配有450nm 濾光片的光度計來進行測試
用大片段基因組－DNA－克隆直接篩選－cDNA實驗
試劑、試劑盒 擴增緩沖液DNA 聚合酶 DNaseI限制性內切核酸酶ATP鏈霉親和素-磁珠結合緩沖液T4DNA 連接酶熱穩定 DNA 聚合酶瓊脂糖凝膠BACDNA缺口平移緩沖液雜交液平末端 cDNACot1 基因組 DNA胞漿 poly(A)+RNAdNTP 溶液DNA 分子質量標志物寡
單克隆酶免疫色度篩選法分析沙門氏菌
單克隆酶免疫色度分析篩選方法AOAC 方法:986.35,987.11,993.0均為單克隆酶免疫色度分析篩選方法。現以 AOAC 公定方法 AOAC993.08《SalmonelIa-Tek)》為例做一介紹。該方法陽性的檢測結果應是客觀的,必須用配有450nm 濾光片的光度計來進行測試。只有當陰性
單克隆抗體藥物研發和篩選Molecular－Devices－ClonePix－2
導言：如何加速藥物研發進程？何種利器可解決藥物開發的瓶頸？如何在寶貴而豐富的天然藥物資源中開發出現代化新藥？單抗、疫苗、重組蛋白等大分子藥物爆發式增長，您期待最快速開發出新藥從而占據一席之地嗎？ Molecular Devices公司針對藥物開發過程中的最關鍵步驟提供了完整的解決方案。藥物篩選，
多克隆酶免疫分析篩選方法檢測沙門氏菌
多克隆酶免疫分析篩選方法本方法由酶免疫分析方法(EIA)測得的陽性樣品的增菌肉湯和 M 肉湯必須依照常規標準方法中所指示的,在選擇性培養基上做劃線接種,并必須將典型或可疑菌落按標準方法進行生化和血清學鑒定。對于陽性結果的確定①可借助比色計卡進行視覺檢查,當判斷陰性和陽性對照符合卡上所描述的標準時,陽
流式細胞儀能篩選出單克隆細胞么
可以。為了制備牛型布魯菌核蛋白L7/L12的單克隆抗體,試驗采用流式細胞儀與間接ELISA相結合的方法進行單克隆篩選,以及Western-blot分析。結果表明:最終篩選出3株表達量較高的雜交瘤細胞株,細胞培養上清液的抗體效價可達1∶3 200,3株單克隆抗體均能與核蛋白L7/L12發生特異性結合,
從G418篩選，轉染到單克隆化的總結
我做了穩定轉染，從G418濃度確定到最后的單克隆化鑒定。有自己的體會也有其他戰友遇到的情況, 和大家分享. 沒有總結好的地方，大家補充。篩選之前確定G418濃度：1，由于每種細胞對G418的敏感性不同，而且不同的廠家生產的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉劑中有效的G418含量大約為0.722
用大片段基因組－DNA－克隆直接篩選－cDNA實驗
本方案使用克隆在 BAC 載體上的一段 500kb 的人基因組 DNA 連續序列，直接篩選與其互補的的 cDNA。但本方法也可適用于任意大小的基因組靶 DNA。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。試劑、試劑盒擴增緩沖液DNA 聚合酶 DNaseI限制性內切核酸酶ATP鏈霉親和素
利用α互補現象篩選帶有插入片段的重組克隆的原理
現在使用的許多載體都帶有一個E.coli DNA的短區段，其中含有β-半乳糖苷酶的-α肽基因（lacZ’）的調控序列和頭146個氨基酸的編碼信息。這個編碼區中插入了一個MCS，它并不破壞讀框，但是可使少數幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用于編碼β-半乳糖苷酶C端部分序列
微生物克隆系統使重組基因表達的篩選更加容易
傳統的手工挑取微生物克隆是一個費時煩人且易出錯的過程。微生物克隆篩選系統一小時可以完成3000 個克隆的挑取，而一個熟練的人工只能挑取約600 個克隆。自動化系統的速度相比人工提高了至少5 倍，最關鍵的是更加準確，有效性>98%。微生物克隆篩選系統的熒光成像模塊可以顯著減少下游的工作量，因為通過
微生物克隆系統使重組基因表達的篩選更加容易
傳統的手工挑取微生物克隆是一個費時煩人且易出錯的過程。微生物克隆篩選系統一小時可以完成3000 個克隆的挑取，而一個熟練的人工只能挑取約600 個克隆。自動化系統的速度相比人工提高了至少5 倍，最關鍵的是更加準確，有效性>98%。微生物克隆篩選系統的熒光成像模塊可以顯著減少下游的工作量，因為通過
單克隆抗體技術的方法細胞篩選操作過程
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選,即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來,通常也稱為抗體檢測。抗體檢測的方法很多,通常根據所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便,便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結果,
微生物克隆系統使重組基因表達的篩選更加容易
傳統的手工挑取微生物克隆是一個費時煩人且易出錯的過程。微生物克隆篩選系統一小時可以完成3000 個克隆的挑取，而一個熟練的人工只能挑取約600 個克隆。自動化系統的速度相比人工提高了至少5 倍，最關鍵的是更加準確，有效性>98%。微生物克隆篩選系統的熒光成像模塊可以顯著減少下游的
色譜純、分析純、化學純、優級純有什么區別
這兩者沒有什么可比性。首先這兩者都是指化學試劑的一種純度規格。優級純的化學純度很高，雜質干擾較少。從純度的角度上考慮，優級純>分析純>化學純。像理化鑒別。 色譜純是做色譜用的，液相，氣相色譜。分析純一般作為分析測定用的試劑，做理化鑒別，分析檢查項的時候可以用。因為用途一般不一樣，要求的指標也不一樣
我國學者揭示MoCo是導致植株穗發芽及植株純合致死表型
眾所周知，穗發芽是影響水稻、小麥等主要農作物產量和品質的重要因素之一。近年來，由于極端氣候頻繁出現，作物穗發芽現象呈現普遍遞增的態勢，即使在黑龍江寒帶水稻生產區近年來穗發芽也出現上升勢頭。日前，中科院東北地理與農業生態研究所與東北農業大學等單位合作，在黑龍江省杰出青年基金及國家重點研發計劃的資助