分子雜交技術隨機引物合成法操作步驟
(1) 200ng雙鏈DNA(1μl)和7.5ng隨機引物(1μl)混合后置于eppendorf管內,水浴煮沸5分鐘后，立即置于冰浴中1分鐘。 (2) 與此同時,盡快在一置于冰浴中的0.5ml eppendorf管內混合下列化合物: 20mmol/L DTT 1μl 未標記的dNTP溶液 1μl 10×隨機標記緩沖液 1μl [α-32 P] dATP(比活性>3000Ci/mmol； 10μCi/μl) 3μl ddH2O 1μl (3) 將步驟(1)eppendorf管中的溶液移到步驟(2)管中。 (4) 加入5單位(約1μl) Klenow片段, 充分混合,在微型離心機中以12000g離心1-2秒, 使所有溶液沉于試管底部,在室溫下保溫3-16小時。 (5) 在反應液中加入10μl緩沖液A后,將放射性標記的探針保存在-20℃下備用。同時計算放射比活性。 [注意] 1、引物與模板的比例應仔細調......閱讀全文
分子雜交技術隨機引物合成法操作步驟
(1) 200ng雙鏈DNA(1μl)和7.5ng隨機引物(1μl)混合后置于eppendorf管內,水浴煮沸5分鐘后，立即置于冰浴中1分鐘。 (2) 與此同時,盡快在一置于冰浴中的0.5ml eppendorf管內混合下列化合物: 20mmol/L DTT 1μl 未標記的dNTP溶液
分子雜交技術隨機引物合成法
隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,產物平均長度為400-600個核苷酸。利用隨機引物進行反應的優點是：(1)Klenow片段沒有5'→3'外切
分子雜交技術Southern雜交的操作步驟
(1) 約50μl體積中酶切10pg-10μg的DNA, 然后在瓊脂糖凝膠中電泳12-24小時(包括DNA分子量標準物)。 (2) 500ml水中加入25μl 10mg/ml溴化乙錠,將凝膠放置其中染色30分鐘, 然后照相。 (3) 依次用下列溶液處理凝膠,并輕微搖動: 500ml 0.2m
分子雜交技術Northern雜交的操作步驟
(1)RNA經變性電泳完畢后,可立即將乙醛酰RNA轉移至硝酸纖維素濾膜上。轉移方法與轉移DNA的方法相似。 (2)轉移完畢后 ,以6×SSC溶液于室溫浸泡此膜5分鐘,以除去瓊脂糖碎片。 (3)將該雜交膜夾于兩張濾紙中間,用真空烤箱于80℃干燥0.5-2小時。 (4) 用下列兩種溶液之一進行
雙鏈DNA探針隨機引物合成法
? 隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,產物平均長度為400-600個核苷酸。利用隨機引物進行反應的優點是：(1)Klenow片段沒有5'→3'外切
分子雜交技術斑點雜交的操作步驟
(1) 10μl樣品與20μl 100%甲酰胺、 7μl 37%甲醛、2μl 20×SSC混合。混合置于68℃，15分鐘后置冰浴中。 (2) 用0.1mol/L NaOH清洗點樣器,再用無菌水充分沖洗。將一張經20×SSC浸潤的濾紙鋪在點樣器上,上面再鋪上一張經20×SSC浸潤1小時的硝酸纖維
隨機引物合成法雙鏈DNA探針標記法
隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,產物平均長度為400-600個核苷酸。利用隨機引物進行反應的優點是：(1)Klenow片段沒有5'→3'外切酶活
分子雜交技術菌落原位雜交的實驗操作步驟
1. 將少數菌落轉移到硝酸纖維素濾膜上： (1) 在含有選擇性抗生素的瓊脂平板上放一張硝酸纖維素濾膜。 (2) 用無菌牙簽將各個菌落先轉移至濾膜上,再轉移至含有選擇性抗生素但未放濾膜的瓊脂主平板上。應按一定的格子進行劃線接種(或打點)。每菌落應分別劃線于兩個平板的相同位置上。最后，在濾膜和主
分子雜交儀的操作步驟
1. 通電預熱 [2] 接通電源線、打開電源開關、恒溫室溫度顯示、應顯示室溫值，按溫度預熱20分鐘后，恒溫室將處于恒溫狀態。 2. 安裝雜交管 旋轉門鎖、打開玻璃門、向下點動旋轉、步進開關、使雜交支架旋轉到合適的位置，將雜交管卡緊在旋轉支架上，關上玻璃門并鎖緊。 3. 啟動旋轉支架 向
分子遺傳學詞匯隨機引物
中文名稱：隨機引物外文名稱：random primer定義：隨機引物是指當特定mRNA由于含有使逆轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時，可采用隨機六聚體這一非特異的引物來拷貝全長mRNA。
簡述分子雜交儀的操作步驟
1.接通電源打開開關，進行參數設定。參數設定，接通電源→按“選擇”鍵到相應的參數行→按“設定”鍵，該行第一位開始閃爍，進入修改狀態→按“置數”鍵，數字0~9循環到達所需的數字后按“移位”鍵到下一位數字修改最后修改完后，按“設定”鍵確認。按“選擇”鍵可選擇修改其他數據或回到正常顯示狀態。 2.達
核酸雜交的技術操作步驟
（1）制備樣品：首先需要從待檢測組織樣品提取DNA或RNA。DNA應先用限制性內切酶消化以產生特定長度的片段，然后通過凝膠電泳將消化產物按分子大小進行分離。一般來說DNA分子有其獨特的限制性內切酶圖譜，所以經酶切消化和電泳分離后可在凝膠上形成特定的區帶。再將含有DNA片段的凝膠進行變性處理后，直接轉
FYY系列分子雜交儀的操作步驟
1.接通電源打開開關，進行參數設定。參數設定，接通電源→按“選擇”鍵到相應的參數行→按“設定”鍵，該行第一位開始閃爍，進入修改狀態→按“置數”鍵，數字0~9循環到達所需的數字后按“移位”鍵到下一位數字修改最后修改完后，按“設定”鍵確認。按“選擇”鍵可選擇修改其他數據或回到正常顯示狀態。 2.達
分子雜交儀的分類及操作步驟
分子雜交儀 1. 分子雜交儀的種類較多，根據實驗的需求，可以分為6大類： 1) 用于大容量的分子雜交儀。 2) 用于 Southern或者 Northern技術點雜交的雜交儀。 3) 用于小容量的核酸雜交儀。 4) 微孔板原位雜交儀。 5) 載玻片原位雜交和平板雜交儀。 6) We
隨機引物法
此法系可用于從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA 的放射性標記 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983，1984)。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理此法系可用于從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA 的放射性標記 ( Feinberg 和 Vogelstein 1
分子雜交儀操作步驟及注意事項
? ???分子雜交儀操作步驟： 1. 接通電源，打開開關，進行參數設定。 參數設定： 接通電源→按“選擇”鍵到相應的參數行→按“設定”鍵，改行*位開始閃爍，進入修改狀態→按“置數”鍵，數字0~9循環，到達所需的數字后，按“移位”鍵，到下一位數字修改，zui后修改完后，按“設定”鍵確認。按“選擇”
分子雜交儀操作步驟及注意事項
??分子雜交儀操作步驟： 1. 接通電源，打開開關，進行參數設定。 參數設定： 接通電源→按“選擇”鍵到相應的參數行→按“設定”鍵，改行*位開始閃爍，進入修改狀態→按“置數”鍵，數字0~9循環，到達所需的數字后，按“移位”鍵，到下一位數字修改，zui后修改完后，按“設定”鍵確認。按“選擇”鍵可選
快速了解反轉錄引物隨機引物
隨機引物是指當特定mRNA由于含有使逆轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時，可采用隨機六聚體這一非特異的引物來拷貝全長mRNA。 1.特異性引物一般在增低豐度目的基因才選擇使用，用得比較少。一般都推薦用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物。由于rna的二級結構破壞不完全，導致特異性
分子雜交儀的操作步驟及注意事項
操作步驟 1. 通電預熱 [2] 接通電源線、打開電源開關、恒溫室溫度顯示、應顯示室溫值，按溫度預熱20分鐘后，恒溫室將處于恒溫狀態。 2. 安裝雜交管 旋轉門鎖、打開玻璃門、向下點動旋轉、步進開關、使雜交支架旋轉到合適的位置，將雜交管卡緊在旋轉支架上，關上玻璃門并鎖緊。 3. 啟動旋
分子雜交儀操作步驟及使用注意事項
分子雜交儀操作步驟：1.通電預熱接通電源線、打開電源開關、恒溫室溫度顯示、應顯示室溫值，按溫度預熱20分鐘后，恒溫室將處于恒溫狀態。2.安裝雜交管旋轉門鎖、打開玻璃門、向下點動旋轉、步進開關、使雜交支架旋轉到合適的位置，將雜交管卡緊在旋轉支架上，關上玻璃門并鎖緊。3.啟動旋轉支架向上接通旋轉、步進開
分子雜交儀操作步驟及使用注意事項
分子雜交儀操作步驟：1.通電預熱接通電源線、打開電源開關、恒溫室溫度顯示、應顯示室溫值，按溫度預熱20分鐘后，恒溫室將處于恒溫狀態。2.安裝雜交管旋轉門鎖、打開玻璃門、向下點動旋轉、步進開關、使雜交支架旋轉到合適的位置，將雜交管卡緊在旋轉支架上，關上玻璃門并鎖緊。3.啟動旋轉支架向上接通旋轉、步進開
分子雜交儀操作步驟及使用注意事項
?分子雜交儀操作步驟：1.通電預熱接通電源線、打開電源開關、恒溫室溫度顯示、應顯示室溫值，按溫度預熱20分鐘后，恒溫室將處于恒溫狀態。2.安裝雜交管旋轉門鎖、打開玻璃門、向下點動旋轉、步進開關、使雜交支架旋轉到合適的位置，將雜交管卡緊在旋轉支架上，關上玻璃門并鎖緊。3.啟動旋轉支架向上接通旋轉、步進
分子雜交技術
分子雜交技術? 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總R
隨機引物法標記－DNA
實驗方法原理 利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿單鏈模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它們就可在模板的多位點上與模板雜交。因此模板上每一核苷酸（5' 端的核苷酸除外）的互補物將以同樣的頻率摻入產物。實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ Kl
隨機引物法標記－DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿單鏈模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它們就可在模板的多位點上與模板雜交。因此模板上每一核苷酸（5' 端的核苷酸除外）的互補物將以同樣
隨機引物法標記－DNA
利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿單鏈模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它們就可在模板的多位點上與模板雜交。因此模板上每一核苷酸（5' 端的核苷酸除外）的互補物將以同樣的頻率摻入產物。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法
隨機引物法標記探針
實驗概要本實驗探針標記采用TAKARA公司的隨機引物標記試劑盒Ver.2。實驗步驟1．于1.5ml離心管中加入5μl H2O，2μl引物(N6)，5μl DNA(0.1μg-1μg)。2．充分混勻，98°C 3分鐘。3．離心1秒鐘，將離心管蓋上的汽化水甩下。4．加入2.5μl dNTPs(各2.5m
原位雜交技術和操作步驟詳細介紹
原位雜交技術應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測，與免疫組化技術的結合應用，能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結合起來。1969年Pardue和Gall將放射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克隆技術的發展，及不同探針標記系統和檢測系統
原位雜交技術和操作步驟詳細介紹
原位雜交技術應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測，與免疫組化技術的結合應用，能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結合起來。1969年Pardue和Gall將放射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克隆技術的發展，及不同探針標記系統和檢測系統
Northern雜交分析操作步驟
【操作】1．RNA的提取見前。2．變性膠的制備：取瓊脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加熱熔化，冷卻至 60℃時加入5×甲醛凝膠電泳緩沖溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混勻、制膠。待膠凝固后，置于1×甲醛凝膠電泳緩沖溶液中預電泳5min。3．樣品制備 取總RNA4.5 ，加入5