位點特異重組的重組機制介紹
位點特異性重組本質上是兩個重組位點的四股DNA發生兩次切割和兩次連接的過程,所需的關鍵成分是重組酶( recombinase),此外還需要一些蛋白因子。這里以入噬菌體DNA與大腸桿菌DNA整合而進入溶原狀態為例,介紹位點特異性重組機制(圖2-33)。 1.第一次切割重組酶(又稱入噬菌體整合酶,integrase,356AA,由入噬菌體基因組編碼)四聚體與兩個重組位點(入噬菌體重組位點attP和大腸桿菌重組位點au,B有15bp相同的核心序列)結合,切斷兩個重組位點一股DNA特定的磷酸二酯鍵,形成兩個切口,切口3’端的磷酸基與重組酶活性中心Tyr342的羥基以磷酸酯鍵結合。 2.第一次連接兩個切口的5 7端交換,與對方3’端連接,形成HoUiday結構。 3.第二次切割重組酶切斷兩個重組位點另一股DNA特定的磷酸二酯鍵,形成兩個切口。切口3 7端的磷酸基與重組酶活性中心Tyr342的羥基以磷酸酯鍵結合。 4.第二次連接......閱讀全文
位點特異重組的重組機制介紹
位點特異性重組本質上是兩個重組位點的四股DNA發生兩次切割和兩次連接的過程,所需的關鍵成分是重組酶( recombinase),此外還需要一些蛋白因子。這里以入噬菌體DNA與大腸桿菌DNA整合而進入溶原狀態為例,介紹位點特異性重組機制(圖2-33)。 1.第一次切割重組酶(又稱入噬菌體整合酶,
關于位點特異重組的重組效應簡介
位點特異性重組既可以發生在一個DNA分子中,也可以發生在兩個DNA分子間。重組酶識別位點有方向性,所以重組時兩個重組位點的排列有方向性。 1.插入 當位點特異性重組發生在兩個閉環DNA之間或一個閉環DNA與一個線性DNA之間時,重組的結果是DNA插入(即整合),并且插入之后在兩端形成同向重復序
關于位點特異重組的簡介
位點特異性重組(sile-specific recombinalion)是指發生在特定的DNA序列之間的片段交換,序列之間不要求有同源性。位點特異性重組發生于包括基因表達調控、胚胎發育過程中的程序性基因重排、免疫球蛋白基因的重排、一些病毒DNA和質粒復制周期中發生的整合與解離等過程中。
位點特異性重組的簡介
位點特異性重組(site-specific recombination)是遺傳重組的一類。這類重組依賴于小范圍同源序列的聯會,重組也只發生在同源的短序列的范圍之內,需要位點特異性的蛋白質分子參與催化,重組的蛋白不是rec 系統而是int 等,如噬菌體l 的定點插入。重組時發生精確的切割、連接反應
關于位點特異性重組的特點介紹
①這種交換是可逆的,原先存在的DNA順序全部被保存下來,并無丟失; ②噬菌體和細菌的DNA之間有一段很短的同源序列,重組交換必須通過其中的一個特定的核苷酸。這兩個特點也就是位點特異性重組的共同特點。
關于位點特異性重組的整合介紹
λ噬菌體編碼λ整合酶(integrase)。這個酶能指導噬菌體DNA插入E.coli染色體中。這種插入作用是通過兩個DNA分子的特異位點進行重組,將兩個環狀DNA分子變成一個大環。在噬菌體感染的早期即有大量整合酶產生,故幾乎所有被感染的細胞都發生整合作用。這種作用可用體外模型來進行實驗。用四種成
位點特異性重組的整合酶和IHF的介紹
在att上都有特定的結合位點,體外實驗也證明這兩種蛋白質結合在attDNA的特定位點上。每一次重組過程需要20-40個整合酶分子及約70個IHF分子。故可能這兩種蛋白質不僅是作為酶(發揮催化作用),而且在每次重組中都要形成某種復合物結構。通過缺失實驗,證明attP至少要約250bp長,太短將使其
關于位點特異性重組的基因的表達調控介紹
如果一個DNA分子上兩個特異位點之間發生重組,其后果有兩種可能性:兩個位點之間的節段或被丟失,或被顛倒。有些生物能夠利用這種重組倒置來控制基因的表達。因為DNA的一正一倒兩種排列法可以相應地表達兩種不同的蛋白質,細胞就可根據需要作出選擇。奇怪的是,利用這種機制所調節的蛋白質往往都位于生物的體表。
關于位點特異性重組的整合和切出的介紹
attB由稱為BOB’的序列組成,而attP由POP'組成。O是核心序列,是attB和attP所共同的。而其兩側的序列是B,B’和P,P’,被稱為臂。噬菌體DNA是環狀的,重組時被整合入細菌染色體中,成為線性序列。前病毒的兩側是兩個新的雜種att位點,左側稱為attL,由BOP’組成,而
簡述位點特異性重組的最終結果
其結果是G(+)和G(-)噬菌體對不同株E.coli有不同的特異性。在G(+)方向,基因S和U表達,其產物使噬菌體可吸附在E.coliK12上,但不能吸附在E.coliC上,反之,在G(-)方向,基因S’和U’表達,噬菌體可吸附在E.coliC上,而不能吸附在E.coliK12上。各蛋白質的分子
關于位點專一重組的基本介紹
λ噬菌體感染大腸桿菌后,或是進入裂解生長,或是進入溶原生長。當噬菌體裂解宿主細胞的功能受到抑制,噬菌體DNA整合進宿主染色體并隨宿主染色體而進行復制,或作為一個獨立的郊猶?/SPAN>(如P22)。這稱為溶原性(lysogeny),這類噬菌體稱為溶原性噬菌體(lysogenic phage)。當
概述位點專一重組的相關信息
溶原狀態同裂解狀態是可以轉換的。當λ噬菌體DNA整合在宿主基因組中,則進入溶原狀態;當噬菌體DNA從宿主基因組中切離下來,則轉入裂解狀態。這種整合和切離,都是通過DNA和細菌DNA特定的附著位點之間的重組來實現的。大腸桿菌DNA上的att(attach)位點記為attλ或attB,長度為23 b
關于DNA重組的重組修復介紹
有絲分裂和減數分裂期間由各種外源因子(例如紫外線,X射線,化學交聯劑)引起的DNA損傷都可以通過同源重組修復機制(HRR)來修復。 人類和嚙齒動物中減數分裂期間HRR所必需的基因產物的缺陷會導致不育 。人類HRR所必需的基因產物(例如BRCA1和BRCA2)的缺陷同時會增加患癌癥的風險。在細菌
DNA重組的作用機制
遺傳重組由許多不同的酶催化。重組酶是DNA重組過程中催化鏈轉移步驟的關鍵酶。?RecA是在大腸桿菌中發現的主要重組酶,負責修復DNA雙鏈斷裂(DSBs)。在酵母和其它真核生物中,修復DSB需要兩種重組酶。?RAD51蛋白是有絲分裂和減數分裂重組所必需的,而DNA修復蛋白DMC1對減數分裂重組具有特異
關于基因重組的自然重組的介紹
自然界不同物種或個體之間的基因轉移和重組是經常發生的,它是基因變異和物種進化的基礎。自然界的基因轉移的方式有: 接合作用:當細胞與細胞、或細菌通過菌毛相互接觸時,質粒DNA就可從一個細胞(細菌)轉移至另一細胞(細菌),這種類型的DNA轉移稱為接合作用(conjugation )。 轉化作用(
簡述DNA重組的機制內容
遺傳重組由許多不同的酶催化。重組酶是DNA重組過程中催化鏈轉移步驟的關鍵酶。 RecA是在大腸桿菌中發現的主要重組酶,負責修復DNA雙鏈斷裂(DSBs)。在酵母和其它真核生物中,修復DSB需要兩種重組酶。 RAD51蛋白是有絲分裂和減數分裂重組所必需的,而DNA修復蛋白DMC1對減數分裂重組具有
細胞重組的介紹
細胞重組由不同細胞的核體與胞質體在融合因子介導下并合形成完整細胞的技術.對研究真核細胞的核、質關系及基因轉移等問題具有重要意義。應用化學物質(如細胞松弛素B或秋水仙堿)并結合機械力(如離心力等),把細胞的核與胞質部分分開。分離出來的核,帶有少量胞質,并圍有質膜,稱“核體”或“小細胞”。有些核體能
分子的重復機制異位重組
減數分裂過程中未對齊的同源染色體之間發生的不平等交叉引起的復制稱為異位重組。不平等交叉是在基因組中對部分區域DNA片段進行復制最有效的方法。發生這種情況的可能性取決于兩條染色體之間重復元件的共享程度。該重組的產物是交換位點的重復和相互刪除。異位重組通常由復制斷裂點處的序列相似性介導,形成直接重復。重
DNA-同源重組的關鍵分子機制
蛋白質與植物基因研究國家重點實驗室研究團隊揭示 DNA 同源重組的關鍵分子機制 作為三大DNA代謝途徑(DNA 復制、重組、損傷修復)之一,DNA同源重組(Homologous Recombination)是生命體的基本生物事件。它在細胞生長、減數分裂、配子形成、物種進化、DNA雙鏈斷裂修復、
簡述轉座重組的轉座機制
細菌轉座子有兩種轉座機制:簡單轉座和復制轉座。 1.簡單轉座( simple transposilion) 轉座酶將轉座子從原位點切下,插入被轉座酶錯位切割的轉座位點,經過填補之后,兩端形成短的同向重復序列(4~13bp)。原位點或被連接修復,或所屬DNA被降解。降解通常是致死性的。 2.復
關于DNA重組的減數分裂重組的介紹
在減數分裂早期出現的四種染色單體中的兩種(前期I)彼此配對并且能夠相互作用。重組由雙鏈斷裂引發。其它類型的DNA損傷也可能引發重組。例如,交聯劑如絲裂霉素C引起鏈間交聯可以通過HRR修復,引發重組。 重組產物有兩種:染色體側翼區域被交換的“交叉”(CO)型和染色體側翼區域未被交換的“非交叉”(
重組-DNA-技術介紹
中文名稱重組 DNA 技術英文名稱recombinant DNA technique定 義在體外將兩個或多個不同的DNA片段全部或部分構建成一個DNA分子的方法。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞生物學技術(二級學科)
基因重組和DNA重組區別
基因重組是由于不同DNA鏈的斷裂和連接而產生DNA片段的交換和重新組合,形成新DNA分子的過程。 在人類的生殖細胞中發現的46條染色體發生在生物體內基因的交換或重新組合。基因重組是生物遺傳變異的一種機制,包括同源重組、位點特異重組、轉座作用和異常重組四大類。DNA重組指DNA分子內或分子間發生的遺傳
基因重組的相關介紹
基因重組指在生物體進行有性生殖的過程中,控制不同性狀的基因重新組合。 其發生在二倍體生物的每一個世代中。每條染色體的兩份拷貝在有些位置可能具有不同的等位基因,通過互換染色體間相應的部分,可產生于親本不同的重組染色體。重組來源于染色體物質的物理交換,減數分裂前期,每條染色體有4份拷貝,所有的4份
重組疫苗的基本介紹
重組疫苗(recombination vaccines)是指隨著過去二十年來遺傳學的飛速發展,通過遺傳學重組機制來生產的疫苗。為了解決傳統疫苗存在的問題,降低免疫原性,提高安全性,減少治療時間,人們提出一種新型的SIT 方法———免疫重組疫苗。隨著分子生物學的發展,編碼大多數過敏原的cDNA 被發現
重組疫苗的應用介紹
重組疫苗是將主要的過敏原重組在一起,代替過敏原提取物達到脫敏的目的,又稱為重組過敏原疫苗。但無論是抗原識別受體(BCR 或TCR),還是特異性抗體分子(IgE 或IgG),所識別抗原的位置均不是完整的抗原分子,而是一段特定的氨基酸序列,該段序列稱為抗原表位。與此同時,隨著人們對過敏原研究的深入,許多
重組疫苗的應用介紹
最初,重組疫苗是將主要的過敏原重組在一起,代替過敏原提取物達到脫敏的目的,又稱為重組過敏原疫苗。但無論是抗原識別受體(BCR 或TCR),還是特異性抗體分子(IgE 或IgG),所識別抗原的位置均不是完整的抗原分子,而是一段特定的氨基酸序列,該段序列稱為抗原表位。與此同時,隨著人們對過敏原研究的深入
重組頻率定位法介紹
原理和在高等動植物中用雜交子代中重組頻率的高低來計算兩個基因間的距離沒有不同。不過在微生物中一個菌落或一個噬菌斑代表一個個體,因而便于通過大量的雜交子代的觀察來進行精細結構分析;而且往往采用選擇性培養方法淘汰沒有發生重組的親本,使分析的效率和精密度進一步提高。不過精細結構的重組頻率容易受到突變位置本
同源重組法技術介紹
同源重組法:同源重組(homologous recombination)是將外源基因定位導入受體細胞的染色體上,在該座位因有同源序列,通過單一或雙交換,新基因片段替換有缺陷的片段,達到修正缺陷基因的目的。如在新基因片段旁組裝一Neo基因,則在同源重組后,因有Neo基因,可在含有新霉素(neomyci
DNA重組
目的:簡單介紹了DNA重組技術的一些方法。包括重組質粒、PCR等。包括細胞結構、DNA,DNA如何改點等。