細胞凋亡檢測(AnnexinVFITC單染法)1
一、實驗原理細胞凋亡或稱程序性細胞死亡(Programmed Cell Death ,PCD)是細胞的生命現象之一,它在機體的胚胎發育、組織修復及自身反應性T淋巴細胞的清除等方面起著十分重要的作用。細胞凋亡調節的失控可導致臨床各種疾病的發生。如老年性癡呆與神經細胞凋亡過度有關,自身免疫性疾病和腫瘤與細胞凋亡的抑制有關。細胞凋亡有別于細胞壞死,它有一系列的細胞形態學和生物化學的改變,包括出現染色質濃縮、DNA降解、凋亡小體形成等。在正常的活細胞,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine, PS)位于細胞膜的內側,但在凋亡的細胞,PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中。Annexin-Ⅴ(膜聯蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白,能與PS高親和力結合。因此將Annexin-Ⅴ進行熒光素(如FITC、PE)或生物素(Biotin)標記,以標記了的Annexi......閱讀全文
細胞凋亡檢測(AnnexinVFITC-單染法)1
一、實驗原理細胞凋亡或稱程序性細胞死亡(Programmed Cell Death ,PCD)是細胞的生命現象之一,它在機體的胚胎發育、組織修復及自身反應性T淋巴細胞的清除等方面起著十分重要的作用。細胞凋亡調節的失控可導致臨床各種疾病的發生。如老年性癡呆與神經細胞凋亡過度有關,自身免疫性疾病和腫
細胞凋亡檢測實驗——AnnexinVFITC-單染法
實驗方法原理細胞凋亡或稱程序性細胞死亡(Programmed Cell Death ,PCD)是細胞的生命現象之一,它在機體的胚胎發育、組織修復及自身反應性T淋巴細胞的清除等方面起著十分重要的作用。細胞凋亡調節的失控可導致臨床各種疾病的發生。如老年性癡呆與神經細胞凋亡過度有關,自身免疫性疾病和腫瘤與
細胞凋亡檢測(AnnexinVFITC-單染法)2
2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡一般以細胞核染色質的形態學改變為指標來評判細胞凋亡的進展情況。常用的DNA 特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種染料與 DNA 的結合是非嵌入式的,主要結合在DNA 的A
細胞凋亡檢測(單染法)
實驗概要本實驗介紹了細胞凋亡檢測(Annexin-V-FITC 單染法)(Assay of Cell Apoptosis)的原理及操作流程。實驗原理細胞凋亡或稱程序性細胞死亡(Programmed ?Cell ?Death,PCD)是細胞的生命現象之一,它在機體的胚胎發育、組織修復及自身反應性T淋巴
流式細胞儀單染可以檢測出細胞凋亡率嗎?
用PI單染就可以,PI是用來測細胞周期的,在單倍體峰前如果有個亞峰則表明有凋亡,但是這個方法不是很好,壞死細胞也會包含在內。準確地說用PI單染測出的凋亡率應該是死亡細胞占細胞總數的比例。建議用AnexinV和PI雙染,PI陰性和AnexinV陽性區是真正凋亡的細胞。細胞早期凋亡時,內膜外翻,位于胞漿
ELISA法檢測細胞凋亡
(一)?原理細胞凋亡的發生,是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA,產生180bp~200bp或其倍數的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復合物而不被核酸內切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結構,可特
細胞凋亡(apoptosis)的檢測1
細胞凋亡(apoptosis)是一種由基因控制的細胞自主性死亡方式。其發生誘因及形態學特征均有別于壞死,與人類免疫系統的發生發展、神經組織發育、器官的形成、腫瘤的發生發展等諸多生物學現象之間有著密切聯系,并且是免疫應答過程中免疫細胞的殺傷機制之一。細胞凋亡的檢測技術已成為免疫學檢測的一個重要內容。凋
細胞凋亡及其檢測技術1
細胞凋亡又稱程序性細胞死亡(PCD),是細胞衰老自然死亡的主要方式之一,在機體中承擔著重要的調控作用。它不僅在維持細胞群體數量的穩定、胚胎發育和免疫系統的克隆選擇方面,而且在腫瘤發生、發展、抗腫瘤藥物的治療等方面具有十分重要的作用。細胞凋亡是由基因編程控制的細胞主動參與的自殺過程沒事一種生理性調節機
DNA-ladder法檢測細胞凋亡
實驗概要發生細胞凋亡時,內源性核酸酶被激活,染色體DNA鏈在核小體之間被切割,形成180~200個堿基或其整數倍的DNA片段,將這些DNA片段抽提出來進行電泳,可得到DNA梯狀條帶(DNA ladder)。主要試劑蛋白酶K(500μg/ml)8mol/L?醋酸鉀白細胞裂解液:pH8.0,10mmol
DNA-ladder法檢測細胞凋亡
發生細胞凋亡時,內源性核酸酶被激活,染色體DNA鏈在核小體之間被切割,形成180~200個堿基或其整數倍的DNA片段,將這些DNA片段抽提出來進行電泳,可得到DNA梯狀條帶(DNA ladder)。一、材料與試劑凋亡細胞;蛋白酶K(500μg/ml)8mol/L 醋酸鉀白細胞裂解液:pH8.0,10
細胞凋亡檢測實驗——TUNEL法
實驗方法原理脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端,與dATP形成異多聚體,并可與連接了報告酶(過氧化物酶或堿性磷酸酶)的抗地高辛抗體結合。在適合底物存在下,過氧化物酶可產生很強的顏色反應,特異準確
DNA-ladder法檢測細胞凋亡
發生細胞凋亡時,內源性核酸酶被激活,染色體DNA鏈在核小體之間被切割,形成180~200個堿基或其整數倍的DNA片段,將這些DNA片段抽提出來進行電泳,可得到DNA梯狀條帶(DNA ladder)。一、材料與試劑凋亡細胞;蛋白酶K(500μg/ml)8mol/L 醋酸鉀白細胞裂解液:pH8.0,10
細胞凋亡的檢測方法綜述1
一、形態學檢測(一)光學顯微鏡和倒置顯微鏡 1、未染色細胞凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。 2、染色細胞常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態。
流式雙染法測凋亡,各個象限代表什么狀態的細胞
一般來說以Annexin-FITC 信號為橫坐標,PI 信號為縱坐標,左下是正常細胞,右下是早期凋亡細胞,右上是中晚期凋亡,左上是壞死細胞。對于右上象限有爭議,有人視其為晚期凋亡,有人視其為壞死細胞~
細胞凋亡檢測操作流程三JC1檢測凋亡細胞線粒體膜電...
細胞凋亡檢測操作流程三--JC-1檢測凋亡細胞線粒體膜電位改變凋亡檢測操作流程??三、JC-1檢測凋亡細胞線粒體膜電位改變BD? MitoScreen (JC-1)線粒體膜電位檢測試劑盒(551302):組分描述JC-1(染料)4瓶,每瓶用于25個樣本。凍干粉,使用前稀釋至儲存液(Stock Sol
流式細胞術測凋亡出現7aad單染是什么問題
單染的細胞是因為細胞膜破損,染料進入細胞核 染了DNA。而annexin則沒有染上。這群細胞可能不是凋亡,而是死亡細胞。或者是已經過了很久,其他信號都檢測不到了。要看你其他對照樣本都染成啥樣了,你的樣本是如何準備的,才能全面回答了。
細胞凋亡檢測實驗——DNA-ladder法
實驗方法原理發生細胞凋亡時,內源性核酸酶被激活,染色體DNA鏈在核小體之間被切割,形成180~200個堿基或其整數倍的DNA片段,將這些DNA片段抽提出來進行電泳,可得到DNA梯狀條帶(DNA ladder)。?實驗材料凋亡細胞試劑、試劑盒蛋白酶K醋酸鉀白細胞裂解液Tris-HClNaClEDTAS
細胞凋亡的免疫檢測技術1
一、概述 細胞凋亡(apoptosis,Apo)是細胞增殖的反面,探討的是細胞死亡的方式與機制。凋亡一詞來源于希臘語。原指花瓣、葉片的脫落。自1972年Kerr首次提出細胞凋亡的概念以來,隨著細胞生物學、免疫學和腫瘤學的研究發展,最近幾年人們對細胞凋亡的重大理論意義和實際意義有了更深的理解。細胞
細胞凋亡的細胞凋亡檢測
細胞凋亡在胚胎發育、造血、免疫系統的成熟以及維護正常組織和器官的細胞恒定與生長平衡,乃至機體衰老方面都起著重要作用。因此,有關凋亡的研究在臨床和基礎等各個領域已經廣泛開展,凋亡細胞的檢測方法顯得非常重要。流式細胞儀( Flow cytometry ,FCM) 將流體噴射技術、激光光學技術、電子技術和
細胞凋亡的細胞凋亡檢測
細胞凋亡在胚胎發育、造血、免疫系統的成熟以及維護正常組織和器官的細胞恒定與生長平衡,乃至機體衰老方面都起著重要作用。因此,有關凋亡的研究在臨床和基礎等各個領域已經廣泛開展,凋亡細胞的檢測方法顯得非常重要。流式細胞儀( Flow cytometry ,FCM) 將流體噴射技術、激光光學技術、電子技術和
細胞凋亡綜述1
細胞程序性死亡是正常生理現象,多發生于胚胎發育和維持組織自身平衡。Kerr et al.最早發現有兩種細胞死亡:壞死(Necrosis)和凋亡(Apoptosis)。Apoptosis,希臘文意思是樹葉從樹上“凋落”,這里是指凋亡,是細胞主動參與自身死亡的過程。凋亡程序有一些特殊形態學特征,包括
細胞凋亡檢測實驗——形態學檢測法
細胞凋亡檢測可應用于:(1)腫瘤細胞和組織在內的不同種類病理標本研究;(2)臨床診療,新藥研制、生物制品開發、腫瘤放化療、以及從促凋亡角度探索腫瘤的基因治療;(3)對相關疾病的早期發現、放化療的療效評價具有舉足輕重的地位。實驗方法原理根據凋亡細胞固有的形態特征,使用合適的顯微鏡檢測凋亡細胞形態變化。
細胞凋亡,細胞凋亡通路和細胞凋亡檢測的幾種檢測方法
一、形態學觀察方法 1、HE染色、光鏡觀察:細胞凋亡后呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團塊狀,細胞表面有“出芽”現象。 2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光。細胞凋亡|后(細胞凋亡,細胞凋亡通路,細胞凋亡檢測)核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側
細胞凋亡檢測操作步驟之ELISA法
細胞凋亡發生時,內源性核酸內切酶將分解核小體區間的雙鏈DNA,但核小體本身由于由組蛋白緊密結合而免受切割,單克隆抗體可以與核小體形成夾心結構,可通過檢測核小體判斷細胞是否經歷凋亡事件。(一) 原理細胞凋亡的發生,是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA,產生180bp~200bp或其倍數的核小
DNA降解斷裂法檢測腫瘤細胞凋亡
細胞DNA提取 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凋亡的DNA降解選擇性發生在核小體間DNA,提取細胞總DNA或者選擇性提取小分子量DNA后電泳可檢查獨特的核小體間片段DNA。
DNA降解斷裂法檢測腫瘤細胞凋亡
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凋亡的DNA降解選擇性發生在核小體間DNA,提取細胞總DNA或者選擇性提取小分子量DNA后電泳可檢查獨特的核小體間片段DNA。 實驗材料 腫
細胞凋亡的檢測—早期(細胞線粒體膜蛋白法)
實驗步驟展開
細胞凋亡檢測實驗——Caspase3活性檢測法
實驗方法原理Caspase家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中caspase-3為關鍵的執行分子,它在凋亡信號傳導的許多途徑中發揮功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中,在凋亡的早期階段,它被激活,活化的Caspase-3由兩個大亞基(17KD)和兩個小亞基(
細胞凋亡檢測
實驗概要細胞凋亡是細胞生物學研究的重要領域。檢測藥物或某種處理對于細胞細胞的影響時,細胞凋亡檢測是一個重要檢測指標。以Annexin V聯合PI法為例簡述細胞凋亡檢測。實驗原理在細胞凋亡早期,位于細胞膜內側的磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)遷移至細胞膜外側。磷脂結合蛋白V(
細胞凋亡檢測
細胞凋亡在胚胎發育、造血、免疫系統的成熟以及維護正常組織和器官的細胞恒定與生長平衡,乃至機體衰老方面都起著重要作用。因此,有關凋亡的研究在臨床和基礎等各個領域已經廣泛開展,凋亡細胞的檢測方法顯得非常重要。流式細胞儀( Flow cytometry ,FCM) 將流體噴射技術、激光光學技術、電子技術和